Способ определения концентрации этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе

Авторы патента:

G01N33/98 - с использованием спиртов, например этилового спирта, в продуктах дыхания

Способ определения концентрации этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе относится к области медицины, в частности к судебно-медицинской экспертизе для определения степени опьянения и диагностики предрасположенности к алкоголизму. С целью повышения чувствительности и точности способа при работе с биологическим материалом его предварительно подвергают микроперегонке, пробу вносят в раствор, содержащий НАД, алкогольдегидрогеназу из семян пшеницы, иоднитротетразолий фиолетовый с последующим спектрофотометрированием. При определении этанола в выдыхаемом воздухе последний барботируют через указанный раствор. Использование изобретения позволяет повысить чувствительность определения этанола до 10 - 12 раз. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (зппп G 01 N 33/98

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4658456/14 (22) 29.01.89 (46) 30.07.91. Бюл. М 28 (71) Институт биологии Якутского филиала

СО АН СССР (72) В.В, Рогожин, Б. М. Кершенгольц, Т. П. Го орова, В. В. Тарасов и Х. Х. Турнин (53) 612.015(088.8) (56) Кочетов Г. А. Практическое руководство по энзимологии.вЂ” M.: Высшая школа, 1980, с, 179 вЂ” 181. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭТАНОЛА В БИОЛОГИЧЕСКОМ

МАТЕРИАЛЕ И ВЫДЫХАЕМОМ ВОЗДУХЕ (57) Способ определения концентрации этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе относится к области

Изобретение относится к медицине, а именно к способам судебно-медицинской экспертизы, диагностики предрасположенности к алкоголизму, и может быть использовано наркологической службой, Цель изобретения вЂ” повышение чувствительности и точности определения этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе.

Способ осуществляют следующим образом.

Биологический материал предварительно подвергают микроперегонке, В раствор, содержащий 0,1 М, рН 10, глицин/NaOH-буфер, водный раствор НАД (24 мг/мл) и иоднитротетразолий фиолетовый, вносят перегнанную пробу и раствор алкогольдегидрогеназы (активность фермента составляет около 24 МЕ) из семян пшеницы с,„„ Ы„, 1666956 А1 медицины, в частности к судебно-медицинской экспертизе для определения степени опьянения и диагностики предрасположенности к алкоголизму. С целью повышения чувствительности и точности способа при работе с биологическим материалом его предварительно подвергают микроперегонке, пробу вносят в раствор, содержащий

НАД, алкогольдегидрогенаэу из семян пшеницы, иоднитротетразолий фиолетовый с последующим спектрофотометрированием.

При определении этанола в выдыхаемом воздухе последний барботируют через указанный раствор, Использование изобретения позволяет повысить чувствительность определения этанола до 10 вЂ” 12 раз, 2 з. и. ф-лы, 2 табл. последующим фотометрированием при длине волны 510 нМ.

При определении этанола в выдыхаемом воздухе последний барботируют через раствор, содержащий 0,1 М глицин/NaOHбуфер, рН 10, алкогольдегидрогеназу из семян пшеницы, НАД, Затем вводят иоднитротетразолий фиолетовый. Реакцию останавливают через 10 мин 0,2 М соляной кислотой и производят фотометрирование . при той же длине волны.

Пример 1. Определение этанола в сыворотке крови.

Предварительно путем микроперегонки отделяют этанол от сыворотки. Для этого 3 мл сыворотки помещают в пенициллиновый флакон. Туда же помещают стеклянные или пластмассовые открытые капсулы, объемом

0.8 вЂ” 1 мл, так чтобы верхний слой капсулы был ча 4 вЂ” 5 мл выше уровня сыворотки во

1666956 флаконе. В капсулы опускают наконечники охлаждающей системы. Нагревают флаконы на водяной бане при 80 С в течение 1 ч, Пары летучих жидкостей, включая этанол, конденсируются на охлаждающих наконечниках микроперегонки и стекают в капсулу, объем конденсата в капсуле достигает 0,30,5 мл. При этом достигается отделение этанола от белков и многих других веществ сыворотки крови, а также era концентрирование. Измеряют точный объем собранного конденсата в капсуле. Подготовленная проба может храниться в закрытой капсуле несколько дней.

Строят калибровочную кривую. Для этого определяет зависимость начальной активности приготовленного перед измерением раствора алкогольдегидрогеназы от концентрации стандартных растворов этанола, Раствор алкогольдегидрогеназы перед употреблением готовят растворением лиофилизированного препарата из расчета 20 мг на 1 мл бидистиллированной воды (активность фермента составляет около 24 МЕ).

Активность фермента определяют следующим образом.

В спектрофотометрическую кювету вносят 1,1 мл М, р Н I О, глицин /Na OH-буферного раствора, 0,1 мл 36 мМ водного раствора

НАД (24 мг/мл), 0,1 мл иоднитротетразолиевого фиолетового с исходной концентрацией 3,8 мг/мл и 0,2 мл раствора этанола с известной концентрацией от 0,75 до 75 мМ, Реакцию инициируют введением 0,2 мл раствора алкогольдегидрогеназы. Измерение оптической плотности фиксируют при длине волны 510 нм на спектрофотометре или фотоэлектрокалориметре.

Для определения содержания этанола в сыворотке крови определяют активность ал-. когольгидрогеназы аналогично описанному, но вместо раствора этанола с известной концентрацией вводят в кювету 0,2 мл отi она из капсулы. По калибровочной кривой находят концентрацию этанола в кювете.

Затем рассчитывают концентрацию этанола в сыворотке крови по формуле (ЭТАН ОЛ)сыворотки=С A/B, (1) где А вЂ” коэффициент разведения отгона в кювете;

С вЂ” концентрация этанола, определенная по калибровочному графику;

В вЂ” коэффициент концентрирования при отгоне этанола из сыворотки равный отношению объема взятой сыворотке к объему отгона в капсуле.

Пример 2. Определение этанола в выдыхаемом воздухе.

Для определения этанола в выдыхаемом воздухе последний медленно барботи5 руют через раствор. содержащий 2 мл 0,1 М глицин/NaOH-буфер рН 10, в котором растворены 1 мг алкогольдегидрогенаэы и 2 мг

НАД. Объем барботируемого воздуха равен

1 литру (можно брать 2 или Зл). Затем вводят

10 0,05 мл 5,4 мгlмл иоднитротетразолиевого фиолетового. Реакцию останавливают через 10 мин 0,2 M соляной кислотой. Контролем служит пробирка, содержащая аналогичные реагенты, через которую воз15 дух не барботировали.

Расчет концентрации этанола проводили по формуле (ЗТАНОЛ)вЂ”

Ч мкг/л воздуха, (2), где копыт и Оконтр вЂ” оптические плотности

25 раствора в опытной и контрольной пробах при 510 нм;

V вЂ” общий объем барботируемого через индикаторный раствор выдыхаемого воздуха;

30 6,57 вЂ” коэффициент пересчета 1 мкг этанола на 1 л выдыхаемого воздуха.

При наличии этанола в выдыхаемом воздухе раствор окрашивается в красный цвет, окраска которого при фиксации соляной

35 кислотой может сохраняться в течение 4-6 недель при сохранении в темноте при+4 C.

Данные приведены в табл. 1-2.

Предложенный способ позволяет повысить чувствительность определения этанола

40 до 10 вЂ” 12 раз.

55 2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и точности при работе с биологическим материалом, пробу предварительно подвер гают микроперегонке.

Формула изобретения

1. Способ определения концентрации этанола в биологическом материале и выды45 хаемом воздухе путем взаимодействия пробы с раствором, содержащим НАД, алкогольдегидрогенаэу, с последующим фотометрированием, отличающийсятем, что, с целью повышения чувствительности

50 способа, используют алкогольдегидрогеназу из семян пшеницы, в раствор дополнительно вносят иоднитротетраэолий фиолетовый.

1666956

3. Способ по и, 1, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа при работе с выдыхаемым воз-!

Таблица1

Определение концентрации зтанола в выдыхаемом воздухе

Та блица 2

Определение концентрации этанола в цельной кроен, сыворотке крови и гомогенатак тканей предлоаенным способом и способом-прототипом

Концентрация этанола, мкмоль/л или мкмоль(л ткани

Метод олределени

Гомогенат »> ÷>, суслика

Цельная кровь

Гомогенат печен человека

Сь>воротка крови и (э m+8» g m+H

) l. п ет m+H

12 21,4 786+ 14

65>3

1б 6 542+ 25 42 750+ 15 46

49,5 117

534

137

Р<0>0!

Р 0,01

РЮ,О!

Pi0,0l

АлкогольдегидровЂ” геназа зерен пшеницы 12 6,7

66+ 14

20,4

В>9 54 4+ 25 8 3

F40> 01

Р 0,01

РСО, 01

P Ю>01

Составитель Н.Теренина

Редактор Л,Пчолинская Техред М.Моргентал Корректор В. Гирняк

Заказ 2519 Тираж 415 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Алкогольдегидрогенеза печени лов>ади (прототип) духом, пробу барботируют через полученныи раствор, 82+ 15 7, 4 81>

23 21,8

Способ определения концентрации этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе

Изобретение относится к акушерству

Способ определения активности атеросклеротического процесса при облитерирующих заболеваниях артерий нижних конечностей // 1252729

Изобретение относится к хирургии

Способ определения меди(ii) в сыворотке крови // 2225618

Изобретение относится к медицине

Способ прогнозирования послеоперационных тромбоэмболических осложнений эндопротезирования у больных старше 45 лет с дегенеративно-дистрофическими поражениями тазобедренного сустава // 2394245

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии

Способ определения эффективности диетотерапии при нарушениях липидного обмена // 1720016

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении эффективности диетотерапии при нарушениях липидного обмена

Способ блокировки и разрешения движения транспортного средства на основе газового анализа выдыхаемого воздуха // 2543133

Изобретение относится к контролю состояния водителей транспортных средств. Способ блокировки и разрешения движения транспортного средства на основе газового анализа выдыхаемого воздуха заключается в том, что забирают у водителя выдыхаемую воздушную пробу, определяют при помощи измерительных датчиков концентрации газовых компонентов в этой пробе, определяют координаты местонахождения транспортного средства, передают посредством беспроводной связи измеренные значения концентраций и координаты местонахождения транспортного средства в блок анализа и принятия решений, где сравнивают полученные значения концентраций с предельно допустимыми значениями. При превышении полученных значений предельно допустимым посредством беспроводной связи направляют сигнал на блокировку движения транспортного средства. При значениях ниже предельно допустимых направляют из блока анализа и принятия решений сигнал на разрешение движения транспортного средства. В качестве беспроводной связи используют мобильную телефонную связь. Измерение концентраций газовых компонентов осуществляют при помощи установленных в мобильный телефон измерительных датчиков различного физического принципа действия. Достигается повышение достоверности измерений. 2 з.п. ф-лы.

Способ блокировки и разрешения движения транспортного средства на основе диагностики физического состояния водителя // 2548642

Изобретение относится к технике контроля состояния водителей транспортных средств. Способ блокировки и разрешения движения транспортного средства на основе диагностики физического состояния водителя заключается в том, что в забираемой у водителя воздушной пробе определяют концентрацию алкоголя, принимают у водителя речевое сообщение и определяют координаты местонахождения транспортного средства. Далее передают измеренные значения в блок анализа и принятия решений, где на основе сравнительного анализа принятых значений с предельно допустимыми передают сигнал на блокировку движения транспортного средства или на разрешение движения. В качестве канала передачи информации используют мобильную телефонную связь, а концентрацию алкоголя в выдыхаемой воздушной пробе измеряют при помощи установленных в мобильный телефон измерительных датчиков. Достигается повышение безопасности эксплуатации транспортного средства. 1 з.п. ф-лы.

Калибруемый анализатор дыхания // 2557922

Группа изобретений относится к медицине, а именно диагностике содержащихся в выдыхаемом воздухе паров алкоголя, и может быть использована в клинической практике, промышленности, здравоохранении или для личного пользования. Для этого используют калибруемый анализатор дыхания, содержащий датчик алкоголя, энергонезависимую память, процессорный блок или процессор, дисплей и корпус для размещения этих компонентов. Процессорный блок способен калибровать анализатор дыхания с использованием организма пользователя в качестве имитатора, исходя из интенсивности обмена веществ в организме пользователя, типа и количества алкоголя, употребленного пользователем. Процессорный блок определяет момент взятия образца выдыхаемого пользователем воздуха на основании времени до заданной точки калибровки от момента начала употребления алкоголя, вычисленного с использованием интенсивности обмена веществ в организме пользователя и определенного максимального уровня содержания алкоголя. Результаты измерения процентного содержания алкоголя в крови (ВАС%), осуществленного на основании образца выдыхаемого пользователем воздуха в момент взятия образца, используются в качестве контрольной точки при калибровке анализатора дыхания. Группа изобретений обеспечивает возможность калибровки анализатора дыхания пользователем и исключает обращение в сервисные центры обслуживания. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 5 ил.

Картридж со стандартным спиртовым газом для алкометра // 2586773

Изобретение относится к области диагностики и может быть использовано для тестирования и корректировки работы алкометра. Портативный картридж со стандартным спиртовым газом для алкометра содержит стандартный спиртовой газ с предварительно заданной концентрацией и выполнен с возможностью отображения значения указанной концентрации на внешней поверхности картриджа (1) или его сохранения на запоминающем носителе, предусмотренном на картридже (1). Картридж (1) имеет выходное отверстие, выполненное с возможностью соединения с алкометром (30) для выпуска стандартного спиртового газа в алкометр (30) и герметично закрытое мягкой мембраной (16). Картридж (1) также содержит внутренний контейнер из мягкого материала, в котором содержится стандартный спиртовой газ с предварительно заданной концентрацией, и внешний кожух (10) из твердого материала для защиты внутреннего контейнера. При соединении картриджа (1) с алкометром (30) происходит протыкание мягкой мембраны (16) и обеспечивается возможность перетекания стандартного спиртового газа из внутреннего контейнера в алкометр (30). Изобретение обеспечивает упрощение конструкции картриджа и повышает его надежность. 2 з.п. ф-лы, 5 ил.

Способ количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной // 2599014

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной. Сущность способа заключается в том, что извлекают стерины из корневищ с корнями крапивы 70% этиловым спиртом и рассчитывают количественное содержание стеринов по оптической плотности в концентрированной серной кислоте при максимуме поглощения 328 нм в пересчете на эргостерин, и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле где A - оптическая плотность испытуемого раствора; Aо - оптическая плотность раствора стандартного образца; M - точная навеска сырья, г; mo - точная навеска эргостерина, г; W - влажность сырья, %. В случае отсутствия рабочего стандартного образца эргостерина используют значение удельного показателя поглощения его раствора - 800; расчет содержания стеринов в пересчете на эргостерин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле где A - оптическая плотность испытуемого раствора; m - точная навеска анализируемого образца, г; W - влажность сырья, %. 800 - удельный показатель поглощения эргостерина. Использование способа позволяет с высокой точностью определять стерины в корневищах крапивы двудомной. 2 ил., 2 пр.