Способ диагностики генитального кандидоза

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике генитального кандидоза. Цель изобретения - повышение точности способа и сокращение времени диагностики. У больного берут кровь, выделяют сыворотку, в одну ее пробу добавляют антиген, а обе пробы инкубируют с 3% и 5% полиэтиленгликоля, определяют затем количество мелких и крупных иммунных комплексов по оптической плотности, вычисляют соотношение между ними и при снижении этого соотношения в пробе сыворотки с антигеном по сравнению с пробой без антигена диагностируют генитальный кандидоз. По сравнению с прототипом повышается точность способа на 60%, а время диагностики сокращается на 7 - 10 дней.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (I I) (sI)s G 01 N 33/53

ГОСУДАР СТ В ЕТЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

V

О

0с

О

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4687625/14 (22) 05,05.89 (46) 15.08.91. Бюл. М 30 (71) Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им. С.M. Кирова (72) З.О.Караев, Т.Н.Лебедева, Н.А,Михайлова и А. К . М ирэабал авва (53) 615.375 (088.8) (56) Большая медицинская энциклопедия, 1982, т.10, раздел "Кэндидоз". (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕНИТАЛЬНОГО КАНДИДОЗА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике генитального кандидоза. Цель изобретения—

Изобретение относится к области медицинской микологии и может быть использовано в диагностике генитального кандидоэа.

Цель изобретения — повышение точности способа и сокращение времени диагностики.

Способ осуществляют следующим образом.

Сыворотку крови получают из венозной крови больного, Предварительно определяют рабочую дозу антигена. Для этого готовят 2кратные разведения гликопротеидного антигена (Candida albicaus), 8 ряд пробирок вносят пипеткой исследуемую сыворотку больного, предварительно сорбированную эритроцитами барабана, и равный обьем различных разведений антигена. Полученную смесь инкубируют при 37 С в течение

30 мин и проводят постановку РТНГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Доза антигена, нейтрализующая антитела сыворотки крови, является эквиваповышение точности способа и сокращение времени диагностики. У больного берут кровь, выделяют сыворотку, в одну ее пробу добавляют антиген, а обе пробы инкубируют с 3 и 5 полиэтиленгликоля, определяют затем количество мелких и крупных иммунных комплексов по оптической плотности, вычисляют соотношение между ними и при снижении этого соотношения в пробе сыворотки с антигеном по сравнению с пробой без антигена диагностируют генитальный кандидоз. По сравнению с прототипом повышается точность способа на 607, а время диагностики сокращается на 7 — 10 дней. лентной. За рабочую дозу антигена принимают его разведение. на 1 порядок превышающее эквивалентную дозу. Затем приступают к постановке основного опыта, В две оаытные пробирки вносят по 0.1 мл исследуемой сыворотки крови и по 0,1 мл антигена в рабочем разведении; в две контрольные пробирки вносят по 0,1 мл физиологического раствора. Пробирку инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре.

Затем в одну опытную и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл 6 ПЭГволо для определения мелких иммунных комплексов,в две оставШихся пробирки вносят такое же количество 3 раствора ПЭГкюо для определения крупных иммунных комплексов.

Пробирки инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего содержимое пробирок переносят в кюветы спектрофотометрэ и фотометрируют при длине волны 450 нм, Результаты учитывают в единицах оптической плотности (ед.ОП).

1670607

0,47ед.оп

0,12ед.ОП

0,54ед.ОП вЂ” 2 16

0,25ед.ОП

Далее определяют величину иммунных комплексов, образующихся при взаимодействии сыворотки крови с субэквивалентной дозой специфического антигена, Для этого вычисляют показатель соотношЕния мелких

М иммуннык комплексов к крупным (ИК вЂ” 1 в к) контрольных пробах (беэ добавления анти. гена) и опытных пробах (с добавлением антигена), и при снижении этого показателя в опытных пробах по сравнению с контрольными (что свидетельствует об образовании у больных преимущественно крупных иммунных комплексов со специфическим антигеном) диагностируют генитальный кандидоэ, Пример 1. Больная Б., 30 лет, поступила в клинику Всесоюзного центра по глубоким микозам МЗ СССР с жалобами на зуд наружных половых органов, выделения иэ влагалища. Больна в течение 1 года после лечения высокими дозами антибиотиков широкого спектра действия по поводу эндометрита. При осмотре гинекологом обнаружены явления вульвовагинита. Микроскопия мазков отделяемого влагалища выявила дрожжевые клетки. При посеве патологического материала на сусло-агар обнаружен рост дрожжевых клеток, культура идентифицирована как Candlda albicaus, Специфические антитела в сыворотке крови выявлены в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) в титрах 1:4, в реакции непрямой гемагглютинации(РНГА) в титрах

1:32. У больной исследовано соотношение мелких иммунных комплексов к крупным после добавления к сыворотке крови субэквивалентной дозы специфического антигена (опыт) и без добавления антигена (контроль).

Для этого предварительно определяли рабочую дозу антигена следующим образом, Готовили 2-кратные разведения антигена. В ряд пробирок вносили исследуемую сыворотку больной, сорбированнуе эритроцитами барана, и равный объем различных разведений антигена, Смесь инкубировали при

37 С в течение 30 мин и проводили постановку РТНГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом, Оказалось, что при добавлении к сыворотке крови антигена в количестве 0,07 мг/мл (расчет проводился по содержанию белка в антигенном препарате) антитела сыворотки крови полностью нейтрализуются. 3а рабочую дозу антигена принята доза 0,035 мг/мл. Затем приступили к постановке основного опыта. В две опытные пробирки внесли по 0.1 мл исследуемой сыворотки и по О,1 мл антигена в рабочей дозе; в две контрольные пробирки внесли по 0,1 мл исследуемой сыворотки и

55 по 0,1 мл физиологического раствора. Пробирки инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре, Затем в одну опытную и одну контрольную пробирку внесли по 2 мл 6 7(ПЭГбооо для определения мелких иммунных комплексов,в две оставшихся пробирки внесли по 2 мл 37 раствора

ПЭГеар для определения крупных иммунных комлексов, Пробирки инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего содержимое пробирок перенесли в кюветы спектрофотометра и фотометрировапри длине волны 450 нм. Результаты учитывали в единицах оптической плотности (ед.ОП), Количество мелких иммунных комплексов в контрольной пробе составило

0,47 ед, ОП, крупных иммунных комплексов — 0,12 ед. ОП. В опытной пробе (т.е. при добавлении к сыворотке крови антигена в рабочей дозе) количество мелких иммунных комплексов повысилось до U,54 ед. Uli, а количество крупных иммунных комплексов возросло до 0,25 ед. ОП, Далее высчитывали показатель соотношения количества мелких иммунных комплексов к крупным в опытной и контрольной пробах. В контрольной пробе он оказался равным в опытной пробе он составил

Снижение соотношения мелких иммунных комплексов к крупным в опытной пробе по сравнению с контрольной свидетельствовало о наличии у данной больной генитального кандидоза. Действительно, на основании повторных исследований диагноз кандидоза гениталий был подтвержден.

Лечение антифунгальными препаратами привело к положительному эффекту, Пример 2, Больная М. Поступила в клинику Всесоюзного центра по глубоким микозам МЗ СССР с жалобами на эуд наружных гениталий и выделения из влагалища.

Больна в течение 5 мес, При объективном осмотре гинеколога обнаружены проявления вульвовагинита. Микроскопическое исследование отделяемого влагалища показало наличие в мазках дрожжевых клеток и

Frichomonas vaginalis. Посев патологического материала на сусло-агар выявил рост гриба, гриб был идентифицирован как С.al0lcaus.

Специфические антитела сыворотки крови в

РНИФ выявлены в титрах 1:16, в РНГА—

1670607

1:32. Показатель соотношения ИК вЂ” в м к контрольной (исходной) сыворотке составил

01едОП 0 43

0.23ед. ОП в опытнайпробе

0,12ед.ОП 0 44

0,27ед.ОП

Составитель В.Литовченко

Техред М.Моргентал Корректор М,Максимишинец

Редактор О,Спесивых

Заказ 2748 Тираж 390 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 т.е. при взаимодействии сыворотки крови с субэквивалентной дозой специфического антигена не отмечено снижения соотноше- 15 м ния ИК вЂ” no сравнению с этим показатек лем в контрольной пробе, что свидетельствовало об отсутствии кандидоза у больной, Больной был поставлен диагноз трихомониаза. Действи- 20 тельно, специфическое лечение трихомониаза беэ применения антифунгальной терапии привело к выздоровлению больной.

Предложенный способ апробирован на

20 здоровых лицах. 10 больных гинекологи- 25 ческими и соматическими заболеваниями некандидоэной этиологии и 20 больных генитальным кандидозом.

У здоровых лиц и больных гинекологи 30 ческими соматическими заболеваниями некандидоэной этиологии после добавления к сыворотке крови антигена в рабочей дозе м соотношение ИК вЂ” не менялось или воэк 35 растало, При наличии генитального кандидоза этот показатель снижался у 17 из 20 обследованных, т.е. в 85 JL случаев.

При исследовании сыворотки крови соответственно известному способу (определение титров антител в сыворотке крови). диагностически значимые титры антител в

РНИФ найдены в 3 из 20 больных генитальным кандидоэом,что составляет 157ь случаев от числа обследованных, в РНГА — у 5 из

20 больных, т.е. в 257; случаев.

Таким образом предложенный способ повышает надежность серодиагностики не менее, чем на 607ь. Время диагностики по сравнению с прототипом уменьшается на 7 — 10 дней, так как предлагаемый способ не требует исследования сыворотки крови в динамике, и выполняется однократно в течение одного рабочего дня, Формула изобретения

Способ диагностики генитального кандидоэа путем забора крови, выделения сы-. воротки, добавления к ней антигена с последующей инкубацией, о т л и ч а ю щи йс я тем, что с целью повышения точности способа и сокращения времени диагностики, к сыворотке крови и к смеси ее с антигеном дополнительно добавляют полиэтиленгликоль, после инкубации центрифугируют. определяют концентрацию мелких и крупных иммунных комплекоов по оптической плотности, вычисляют их соотношение и при снижении соотношения иммунных комплексов в сыворотке, содержащей антиген, по сравнению с этим соотношением в сыворотке диагностируют генитальный кандидоз.