Способ количественного определения ксимедона в крови

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности для контроля содержания препарата в крови и для установления дозазависимых эффектов при клинических исследованиях. Способ заключается в обработке 1 мл крови 4 мл 7,5%-ной хлорной кислотой, отделении образующегося осадка центрифугированием, фильтровании супернатанта и последующем спектрофотометрировании о диапазоне 270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание ксимедона. Способ позволяет определять ксимедон в крови в количестве 0,1 мкг/мл. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/52

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

«g I гЯ

3, К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4663923/14 (22) 28.12.88 (46) 07.10.91. Бюл. М 37 (71) Казанский государственный медицинский институт им. С.В.Курашова и Институт органической и физической химии им. А.Е,Арбузова (72) Д,А.Валимухаметова, В.И.Погорельцев, P.P.Шагидуллин и А.В.Чернова (53) 615.475(088.8) (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КСИМЕДОНА В КРОВИ (57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности для контроИзобретение относится к области ..экспериметральной медицине, в частности к количественному анализу лекарственного вещества пиримидинового ряда — ксимедона, и может быть использовано для контроля содержания препарата в крови человека и животных и для установления доза зависимых эффектов при клинических исследованиях для расширения показаний применения препарата.

Способ осуществляют следующим образом.

В центрифужную пластмассовую пробирку с предварительно налитой туда хлорной кислотой в объеме 4 мл (7,5 -ный раствор, приготовленный путем разбавления НС104, ч, в 4 раза) по каплям добавляют

1 мл крови (сыворотки) стерильно взятой из вены донора, принимавшего ксимедон. В этот момент наблюдается коагуляция белка

5U«168293G А1 ля содержания препарата в крови и для установления дозазависимых эффектов при клинических исследованиях. Способ заключается в обработке 1 мл крови 4 мл 7,57ь-ной хлорной кислотой, отделении образующегося осадка центрифугированием, фильтровании супернатанта и последующем спектрофотометрировании в диапазоне

270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание ксимедона, Способ позв6ляет определять ксимедон в крови в количестве 0,1 мкг/мл.

3 табл. и частичное разрушение клеточных элементов крови с образованием сгустка коричневого цвета и прозрачного надосадка с легким желтым оттенком. Далее содержимое пробирки перемешивают, а затем центрифугируют 15 мин при 15 тыс, об/мин.

Надосадок фильтруют через шотовский фильтр М 2. Полученный прозрачный экстракт помещают в сантиметровую кварцевую кювету и регистрируют спектр в диапазоне 270 — 320 нм. Контролем служит проба крови (сыворотки), обработанная аналогичным образом, но полученная отдонора до приема ксимедона. По спектру определяют оптическую плотность в max полосы (Dmax) и по известной формуле находят концентрацию ксимедона, Минимальная концентрация ксимедона, определяемая предлагаемым методом, составляет

0,1 мкг/мл. Следы ксимедона (качественно) 1682930 можно уловить вплоть до 0,001 мкг/мл, Определение проводят при комнатной температуре.

В связи с тем, что изменение концентрации хлорной кислоты в большую или 5 меньшую сторону от предлагаемой отрицательно сказывается на чувствительности метода, необходимо строгое соблюдение рекомендуемой степени разбавления кислоты. Применение большего разведения 10 приводит к недостаточной коагуляции белков цельной крови, из-за чего растет оптический "белковый фон", ухудшающий условия регистрации анализируемой полосы, В случае применения более концентри- 15 рованной НС104 растет оптический

"удельный фон" путем усиления поглощения более концентрированной кислотой и пигментов как результата жесткого гемолиза эритроцитов. 20

Пример 1. Определение ксимедона в растворах различной концентрации методом УФ-спектроскопии. Навески ксимедона растворяют в 7,5%-ном растворе НС104 с учетом получения концентраций препарата в растворе кислоты, отличающихся на порядок, мг/мл: 1 10, 1 10, 1 10, 1 10

Определение проводят в кварцевых кюветах на двухлучевом саморегистрирующем спектрофотометре UV Иэ Specord M40.

Полученные результаты представлены в табл.1.

Пример 2, Количественное определение ксимедона в крови человека, получившего перорально препарат. 35

Навеску препарата растворяют в 50 мл дистиллированной воды из расчета 30 мг/кг веса, после чего донор принимает ее вовнутрь. Перед приемом препарата у донора из локтевой вены методом венопункции бе- 40 рут 1 мл крови, используемой в дальнейшем в виде контроля. После приема препарата через 20, 40, 60, 120 и 240 мин у донора аналогичным методом берут опытные пробы крови по 1 мл. 45

Далее пробу добавляют по каплям в центрифужную пластмассовую пробирку, с предварительно налитой в нее 7,5%-ной хлорной кислотой (4 мл).

В момент добавления наблюдают коагу- 50 ляцию белка с частичным разрушением клеточных элементов крови в виде сгустка коричневого цвета и прозрачного надосадка с легким желтоватым оттенком, Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой, а затем центрифугируют 15 мин при 15 тыс. об/мин.

Отфильтрованный после центрифугирования надосадок помещают в кварцевую кювету (1 = 1 см) и спектрофотометрируют в диапазоне 270-320 нм, Данные опыта приведены в табл. 2.

Пример 3. Количественное определение ксимедона в сыворотке крови собаки после внутривенного введения препарата.

Навеску препарата растворяют в 10 мл дистиллированной воды из расчета 10 мг/кг веса, после чего собаке вводят препарат методом венопункции поверхностной вены передней лапы, Через 30, 90, 180 и 280 мин этим же методом берут по 4 мл крови (возможен вариант, когда под внутрибрюшинным уретановым наркозом собаке вставляют канюлю в наружную сонную артерию из которой кровь получают многократно. Присутствие уретана в организме животного не мешает определению), До введения препарата у этой же собаки аналогичным образом берут 4 мл крови, используемой в дальнейшем в виде контроля.

Взятую кровь помещают в сухую центрифужную пробирку и центрифугируют ее

15 мин при 3 тыс. об/мин. Полученную сыворотку в обьеме 1 мл обрабатывают как в примере 2. При добавлении сыворотки к кислоте образуется осадок белого или кремового цвета, а надосадок прозрачен.

Данные опыта приведены в табл. 3.

Предлагаемый способ количественного определения ксимедона прост, специфичен и не требует специальной подготовки донора.

Формула изобретения

Способ количественного определения ксимедона в крови, включающий обработку крови 7,5 -ной хлорной кислотой, центрифугирование, далее супернатант спектрофотометрируют в диапазоне 270-320 нм и по максимуму интенсивности поглощения определяют содержание ксимедона.

Таблица I

Таблица 2 При расчете количества препарата учитывается коэффициента раэбавления пробы кислотой. который равен 5.

Таблица 3

Составитель H.Òåðåíина

Редактор Н.Бобкова Техред М.Моргентал Корректор В.Гирняк

Заказ 3409 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-36, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101