Способ определения тромбоцитообразующей активности мегакариоцитов костного мозга на препарате

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)э 6 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

©

QQ

О

О (21) 4133707/14 (22) 15,10.86 (46) 07,11.91. Бюл. Я 41 (71) Ленинградский медицинский институт им. акад. И.П.Павлова (72) Н.Н.Мамаев и Т.И.Гричанова (53) 616-0.89.9 (088,8) (56) Mazur Е.М., et al., 1Labor, СИп., cleed, 1988, р. 111, 194-202. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРОМБОЦИТООБРАЗУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ МЕГАКАРИОЦИТОВ КОСТНОГО МОЗГА НА

ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигаетИзобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Целью является повышен е точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

При стернальной пункции берут костный мозг, Далее готовят мазки клеток костного мозга на стекле, мазки высушивают на воздухе, затем фиксируют в смеси: метиловый спирт — ледяная уксусная кислота в соотношении 3:1 в течение 5 — 10 мин, затем мазки ополаскивают дистиллированной водой, После высушивания препараты обрабатывают в 2 -ном растворе муравьиной кислоты. По окончании инкубации стекла ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают 50 ным раствором нитрата серебра по стандартной методике. После окрашивания

„„!Ж„„1689791 Al ся тем, что мазки костного мозга, фиксированные в метиловом спирте — ледяной уксусной кислоте, взятые в соотношении 3:1 . окрашивают в красителе, содержащем 50 ьный водный раствор нитрата серебра. Активность мегакариоцитов оценивают по наличию в клетках гранул серебра. При содержании в клетке гранул до 110 и больше оценивают мегакариоцит как активный, а при содержании гранул в клетке до 30 и ниже — как неактивный. Способ позволяет оценить тромбоцитообраэующую активность мегакариоцитов в целой популяции, что дает возможность оценить в этом плане состояние больного, скорректировать лечение, серебром препараты снова ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе в течение 10 — 20 с, подкрашивают 1 -ным раствором краски Гимза, приготовленной на фосфатном буфере с рН 6.8.

Поиск мегакариоцитов осуществляют под 100-кратным увеличением микроскопа.

Главными ориентирами в идентификации клеток являются: крупный размер и наличие ярко-желтой цитоплазмы.

Определение числа ядрышек в мегакариоцитах и подсчет в них гранул серебоа осуществляют под иммерсионным объективом с увеличением 1000х, причем на увеличение функциональной активности мегакариоцитов указывает нарастание гранул серебра в ядрышках,свыше 100, а на уменьшение — снижение последних ниже

30.

1689791

Пример 1; Больной, 31 г, по профессии водитель. Диагноз: аутоиммунная тромбоцитопения с явлениями тяжелого геморрагического диатеза и постгеморрагической анемии, спленэктомия, сопутствующий эрозивный гастрит, Больной отмечает появление синяков на теле. Не обследовался. Повторные обильные носовые кровотечения потребовали тампонирования носовых ходов. Поставлен диагноз тромбоцитопения.

Больной поступает в клинику по поводу очередного носового кровотечения. При поступлении состояние больного средней тяжести, явления геморрагического диатеза на коже, в местах иньекций, тампонированные носовые ходы. Пульс 80 уд/мин, АД

180/110 мм рт,ст, Число дыханий в 1 мин—

18. Увеличение печени и селезенки не зарегистрировано. Отмечено умеренное увеличение лимфатическi х узлов в flBxoBblx u подмышечных областях. Анализ крови; эритроциты — 3,2х1012/л, гемоглобин 104 г/л, ЦП 1,0, ретикулоциты 3,1, тромбоциты 2 в мазке, лейкоциты 5,0х10 /л, эоз. 4, нейтр. 5%, сегментоядерные нейтрофилы

72, лимфоциты 16, моноциты 3 („анизоцитоз +++, пойкилоцитоэ++, СОЭ 35 м/ч, Миелограмма без особенностей. Мегакариоциты — 68 на 250 полей зрения, Больному был поставлен диагноз аутоимунной тромбоцитопении и начата терапия предниэолоном в дозе 120 мг в сутки и дициноном. На 5 — и день от начала терапии количество тромбоцитов в крови повысилось до 148х10 /л с последующим сниже9 нием до (36 — 60)х10 на фоне снижения дозы преднизолона. Течение заболевания осложнилось присоединением бронхита, потребовавшего отсрочки сплекэктомии.

Операция удаления селезенки произведена, Послеоперационный период протекал относительно благополучно. Изучение функционального состояния мегакариоцитов, полученных при поступлении в клинику, показало, что число гранул серебра в ядрышках варьировало от 31 до 302 (среднее

170 rp./клетку), Из них 61 мегакариоцитов имели повышенную функциональную активность, а 39% — не отличались от контроля.

Наименьшая активность мегакариоцитов наблюдалась в клетках с 1 — 3 лопастями в ядре (56 гр,/клетку), промежуточная — в клетках с 4 — 6 лопастями (115,5 rp./клетку) и высокая — в мегакариацитах с 7 — 12 и более

12 лопастями в я,рах (соответственно — 186 и 208 гр./клетку), что соответствовало высокой томбоцитообразующей активности мегакариоцитов, 5

30

ЗО

Пример 2. Больной, 64 лет, с диагнозом, аутоиммунная тромбоцитопения, сахарный диабет Н типа. Страдает геморрагическим диатезом в течение 20 лет, который преимущественно проявляет себя кровотечениями со стороны слизистой ротовой полости.

Количество, тромбоцитов в крови все время оставалось низким (40 — 32x10 /л),а количество мегакариоциотов в пунктате было увеличено, 3а год до настоящего исследования проводилась терапия винкристином (суммарная доза 18 мг), которая не принесла эффекта, Поводом для госпитализации послужило длительное непрекращающееся кровотечение из слизистой полости рта, При поступлении состояние удовлетворительное. На коже груди и живота полиморфные подкожные кровоизлияния. Бледности слизистых оболочек нет, единичные кровяные сгустки в полости рта.

Пульс 72 уд./мин, АД 140/70 мм рт,ст, Нижний край печени выступает из-под реберного края на 5 см., селезенка не пальпи2руется, Анализ крови, эритроциты 4,7х10 /л, ге1 моглобин 156 г/л, Цп 1,0,. тромбоциты

10х10 /л, лейкоциты 6,8х10 /л, эозинофилы

2;(„нефтрофилы 5;(, сегментно-ядерные нейтрофилы 64ф„лимфоциты 24, моноциты 57ь, СОЭ 20 мм/ч. Глюкоза в крови 10,2 ммоль/л, Пунктат костного мозга умеренно клеточный, гранулопоэз зрелый, эритропоэз нормобластический, умеренно раздражен.

Мегакариоциты 48:250 полей зрения. Больному было проведено 3 курса импульсной терапии преднизолоном в дозе 510 мг в сутки в течение 4 дней. На фоне этого геморрагический диатез ликвидировался. Однако повышение количества тромбоцитов было незначительным (до 32х10 /л).

Изучение функционального состояния. мегекариоцитов, проведенного в динамикепоказало, что содержание гранул cepebpa в ядрышках колебалось от 8 до 264 на ядро (среднее 66,2 rp./клетку), причем в мегакариоцитах с 1-3 лопастями их было 34,2, с

4-6 лопастями — 67,5 и с 7-12 лопастями—

92,9, что соответствовало низкой функциональной активности клеток, а соответственно, и недостаточной компенсаторной реакции мегакариоцитов. Данному больному подобрано другое лечение, Таким образом, способ позволяет повысить точность определения активности мега кариоцитов, что позволяет прогнозировать тяжесть тромбоцитопении у больного, оценивать адекватность проводимой терапии и эффективность лечения, 1689791

Составитель Л. Стебаева

Техред М.Моргентал Корректор М. Шароши

Редактор Л. Волкова

Заказ 3806 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Формула изобретения

Способ определения тромбоцитообраэующей активности мегакариоцитов костного мозга на препарате путем е.го фиксации с последующим окрашиванием, о т л и ч э ю- 5 шийся тем, что, с целью повышения точности способа, фиксацию проводят в течение 5-10 мин в растворе, содержащем метиловый спирт и ледяную уксусную кислоту в соотношении 3:1, при этом в качестве красителя используют 50 -ный водный раствор нитрата серебра, а активность мегакариоцитов определяют по содержанию гранул серебра в цитоплазме клеток.