Питательная среда для культивирования micrococcus luтеus вкпм в-2836 - продуцента сайт-специфической эндонуклеазы mlu1

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I, С целью повышения выхода биомассы и фермента продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu I - Micrococcus luteus ВКПМ В- 2836 культивируют на среде, содержащей следующие компоненты, мас.%: гидролизат казеина 1,8-2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное. Преимущество предлагаемой среды заключается в увеличении выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной питательной среде, при этом выход биомассы достигает 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды, а активность фермента - 100-420 тыс. ед/г, 2 ил., 1 табл. сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4632938/13 (22) 05.01.89 (46) 23.11.91. Бюл. N 43 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) 3. Ф, Бунина и В. В. Смолянинов (53) 57?.15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 1025725, кл. С l2 N 9/22, 1981.

S ug i saki H., Ka nazawa S. New restriction

endonucleases from Flavobacterium

okeanokoites (Fok l) and Mlcrococcus luteus (Mlu l). Gene. 1981, к 16, р. 73-78; (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ MICROCOCCUS LUTEUS

ВКПМ В-2836 — ПРОДУЦЕНТА CAAT-СПЕ-ЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ MLU l

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении сайт-специфической эндонуклеазы Mlu f.

Цель изобретения — повышение выхода биомассы и фермента.

На фиг. 1 и 2 представлены графики, отображающие рост культур.

Изобретение заключается в том, что в известной питательной среде для культивирования продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu в качестве источника аминного азота используют гидролизат казеина.

В качестве продуцента сайт-специфической зндонуклеазы Mlu I используют штамм

М. luteus, полученный из Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов

ВНИИ генетика, г, Москва, где хранится под номером В-2836... Ж 1693041 А1 (st)s С 12 N 1/20, 9/22/ fC 12 N 1/20, С 12 8 . 1:265) (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения сайт-специфической эндонуклеазы Miu l, С целью повышения выхода биомассы и фермента продуцента сайт-специфической эндонуклеазы Mlu l — Micrococcus luteus ВКПМ В2836 культивируют на среде, содержащей следующие компоненты, мас.,(,: гидоолизат казеина 1,8-2,0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное. Преимущество предлагаемой среды заключается в увеличении выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной питательной среде, при этом выход биомассы достигает 20-24 г сырой биомассы с

1 л среды, а активность фермента — 100-420 тыс. ед/г, 2 ил., l табл.

Пример 1. Эксперименты с жидкой средой проводят в качалочных колбах Эрленмейера вместимостью 750 мл в 100 мл среды при 30 С с качанием 200-220 об/мин.

Концентрацию клеток определяют по оптической плотности путем измерения на приборе фотоэлектроколориметр КФК-2 при длине волн 540 нм в кювете толщиной 5,05 мм.

Культуру выращивают на среде следующего состава, мас; : гидролизат казеина

1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлористый натрий 0,2; дистиллированная вода остальное.

Данная среда соответствует минимальным концентрациям компонентов (фиг. 1, кривая

1).

Пример 2. Среда содержит мас. ; гидролизат казеина 2,0; дрожжевой экстракт 3,0; хлористый натрий 0,3; дистилли1693041 рованная вода остальное, Данная среда соответствует максимальным концентрациям компонентов. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг. 1 рост представлен кривой 2. Как видно по кривым 1 и 2 минимальные и максимальные значения содержания компонентов среды показывают идентичные результаты.

Пример 3. Среда с концентрацией компонентов меньше предлагаемой, мас. : гидролизат казеина 1,5; дрожжевой экстракт 2,5; хлористый натрий 0 1; дистиллированная вода остальное, Условия культивирования, как в примере 1. На фиг.

1 рост клеток представлен кривой 3. Как видно по характеру кривой 3, в сравнении с кривыми 1 и 2, снижение концентраций компонентов приводит к уменьшению плотности клеток в конце роста.

Пример 4. Среда с концентрацией компонентов выше предлагаемой, мас. : гидролизат казвина 2,5; дрожжевой экстракт 3,5; хлористый натрий 0,4; дистиллированная вода остальное. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг, 1 рост клеток представлен кривой 4. По ха. рактеру кривой 4 видно, что увеличение концентраций компонейтов среды выше предлагаемого значения к улучшению роста не приводит, но наблюдается тОрможение в фазе экспоненциального роста культуры.

Таким образом, предложенные концентрации компонентов являются оптимальными.

Пример 5; Совокупность компонентов в предлагаемой среде подобрана по результатам двухэтапного эксперимента.

В таблице представлены данные, подтверждающие, что штамм М. Iuteus предпочитает в своем развитии гидролизат казеина и дрожжевой экстракт (время культивирования 24 ч).

Пример 6, Культивирование проводят в ферментере вместимостью 30 л в 20 л питательной среды, снабженном автоматической системой регулирования рН среды, температуры 30 С, воздух 20 л/мин, скорость перемешивания 500 об/мин, на двух

5 средах- предложенной и известной. Состав предложенной среды, мас. : гидролизат казеина 1,8; дрожжевой экстракт 2,7; хлори.стый натрий 0,2; дистиллированная вида остальное. Состав известной среды, мас. :

10 триптон (Difco) 1,0; дрожжевой .экстракт (Difco) 0,5; хлористый натрий 0,5, Пробы отбирали, как указано на фиг. 2. Активность

Mlu 1 определяли в грубом клеточном экстракте. Как видно по кривым фиг. 2, рост на

15 предлагаемой среде (кривая 5) в 4,6 раз лучше, чем рост на среде прототипа (кривая 6), при этом получают 20-24 г сырой биомассы с 1 л среды в той точке (16 опт. ед.), которая соответствует максимальной активности

20 фермента 400-420 тыс. ед,/г, в то время как выход биомассы на известной среде(кривая

6) составляет 7-9 г с 1 л среды и максимальная активность фермента около 90 тыс. ед./r.

25 Преимущество предложенной среды заключается в повышении у продуцента выхода биомассы и фермента в 4 раза по сравнению с культивированием на известной среде.

30 Формула изобретения

Питательная среда для культивирования Micrococcus luteus BKllM В-2836 — продуцента сайт-специфической эндонуклеазы

Mlu I, включающая источник аминного азо35 та, дрожжевой экстракт, хлористый натрий и дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ ая с я тем, что, с целью повышения выхода биомассы и фермента, она содержит в качестве источника аминного азота гидролизат

40 казеина при следующем соотношении компонентов, мас. : гидролизат казеина 1,82.0; дрожжевой экстракт 2,7-3,0; хлористый натрий 0,2-0,3; дистиллированная вода остальное.

1693041

Продолжение таблицы

1693041

78 1Ф Уб 18 чу

Составитель В.Соина

Редактор О,Юрковецкая Техред М.Моргентал

Корректор Т.Палий

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 4051 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5