Штамм sтrертососсus lастis - продуцент антибиотика низина

 

Изобретение относится к штаммам микроорганизмов и может быть использовано в пищевой, молочной, медицинской, микробиологической и консервной промышленности Целью изобретения является штамм продуцент низина, обеспечивающий высокий выход целевого продукта при сокращении сроков ферментации и расширении спектра сбраживаемых субстратов. Штамм Streptococcus lactis ВКПМ В-4591 является рекомбинантным, полученным при слиянии протопластов низкоактивных по низину родственных штаммов 729 и 1605, полученных из коллекции культур микроорганизмов ВНИКМИ. Штамм обладает высокой антибиотической активностью низина в культуральной жидкости, позволяет сократить время процесса получения низина и обеспечивает возможность замены глюкозы на другой углеводный субстрат. 2 табл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4729917/13 (22) 18.08.89 (46) 30.10.91. Бюл. ¹ 40 (71) МГУ им. М.В.Ломоносова (72) Н.С.Егоров и Л.Г,Стоянова (53) 664.38 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹1551744,,кл. С 12 P 21/00, 1989, (54) ШТАММ STREPTOCOCCUS LACT1S—

П РОДУ ЦЕ НТ АНТИ 6ИОТИ КА Н И 3 И НА (57) Изобретение относится к штаммам микроорганизмов и может быть использовано в пищевой, молочной, медицинской, микробиологической и консервной промышленности. Целью изобретения является штамм—

Изобретение относится к штаммам микроорганизмов и может быть использовано в пищевой, молочной, медицинской, микробиологической и консервной промышленности.

Целью изобретения является штамм— продуцент низина, обеспечивающий высокий выход целевого продукта при сокращении сроков ферментации и расширении спектра сбраживаемых субстратов.

Штамм Streptococcus lactis F116 хранится в музее чистых культур ВНИИгенетики и селекции и ром ы шле н н ых ми кроорга ниэмов под коллекционным номером ВКПМ

В-4591. Штамм является рекомбинантным, полученным при слиянии протопластов низкоактивных по низину родственных штаммов 729 и 1605, полученных из коллекции культур микрорганизмов ВНИКМИ Госагропрома СССР.

„„ Ж„„1687616 А1 (s3)s С 12 Р 21/00, С 12 N 1/20 продуцент низина, обеспечивающий высокий выход целевого продукта при сокращении сроков ферментации и расширении спектра сбраживаемых субстратов. Штамм

Streptococcus lactls ВКПМ В-4591 является рекомбинантным, полученным при слиянии протопластов низкоактивных по низину родственных штаммов 729 и 1605, полученных из коллекции культур микроорганизмов

ВНИКМИ. Штамм обладает высокой антибиотической активностью низина в культуральной жидкости, позволяет сократить время процесса получения низина и обеспечивает возможность замены глюкозы на другой углеводный субстрат. 2 табл.

Морфологические признаки. Грамположительные бактерии, бесспоровые, неподвижные, клетки сферйческой формы до 2 мкм в диаметре, образующие пары или цепочки до четырех кокков. На агаровых средах образуют белые блестящие колонии с ровными краями, мелкие с диаметром до 3 мм (поверхностный рост). Возможен глубинный рост на твердых агаровых средах, при этом вырастают колонии лодочкообразной формы. Характер роста на агаровых средах с добавлением гидролизата молока, капустного отвара, дрожжевого автолизата в сочетании с солями или MllA идентичен, Культуральные признаки. При росте в жидких средах, приготовленных на основе гидролизата молока, глюкоэодрожжевой с солями наблюдается помутнение, в стерильном обезжиренном молоке образуется плотный сгусток. В мясопептонном бульоне (МПБ) с 2 — 4 хлористого натрия наблюда1687616

10 ется рост, а с 6,5 хлористого натрия рост отсутствует, а гидролизате молока с рН 9,2 растет, а при рН 9,6 нет. Штамм термоустойчив при 55 С, но при 45"С не растет, как и при температуре ниже 10 С, Оптимальной температурой инкубирования является

25 С, Физиолого-биохимические признаки, Штамм образует аммиак из аргинина, сбраживает арабинозу, галактозу, маннозу, глюкозу, лактозу, сахароэу, мальтозу, рафинозу, сорбит, маннит., декстрин. Является типичным представителем гомоферментативного молочно-кислого брожения.

При росте образует до 4,0 молочной кислоты, следовые количества диацетила и ацетоина (по креатиновой пробе), за 8-9,5 ч инкубирования — полипептидный антибиотик низин с активностью его в культуральной жидкости до 4000-4200 ME!мл, Штамм устойчив к низину, фузидину, рифампицину, неомицину; пенициллину, фагоустойчив, не патогенен, Высокая активность штамма стабильна в течение 22 генераций и при длительном хранении в лиофильном состоянии в ампулах с защитной средой, содержащей, : желатоза 11; сахароза 22, глютамат натрия 4,4; цитрат натрия трехзамещенного

50,0, при 4 — 6 С; в течение месяца штамм можно хранить в условиях холодильника в виде молочного сгустка. Перевивку производят посредством внесения сгустка с одной микробиологической петли в стерильное обезжиренное молоко (8 — 10 мл). Засеянный инокулят выращивают при 22 — 25 С в течение 10 — 12 ч.

Пример 1. Использование штамма

Streptococcus lactls I= 116, Штамм восстанавливают в стерильном обезжиренном молоке и инкубируют при

25 С до образования сгустка. Микробиологической петлей сброженный культурой молочный сгусток вносят в 10 мл стерильного обезжиренного молока и инкубируют .8 ч.

Затем тем же способом сгусток вносят в посевную промежуточную среду состава: глюкоза 1%; дрожжевой автолизат 25 мг по азоту аммония. После 8 — 9 ч инкубирования 3 инокулята переносят из посевной среды в солевую среду, содержащую, %: глюкоза 1; К2НРО4 2,0; NaCl 20,2; MgSO4

0,02 и дрожжевой автолизат в том количестве, что и в посевной среде. Процесс ферментации ведут 8-9,5 ч при комнатной температуре, что обеспечивает антибиотическую активность культуральной жидкости на уровне 4000 ME/ìë.

Пример 2. Штамм, восс1ановленный в стерильном обезжиренном молоке, после инкубирования в промежуточной посевной среде состава по примеру 1, высевают в солевую среду, содержащую, : мальтоза

1,0; остальные компоненты — в том же количестве. Уровень антибиотической активности при тех же режимах составляет

4200 ME/мл, Антибиотическую активность определяют микробиологическим методом с тесткультурой Вас, coagulans. Среду для культивирования теста готовят на бульоне

Хоттингера с добавлением, ; глюкоза 1,0;

NaCl 0,2; агар-агар 2,0. Для титрования антибиотика низина служит среда, приготовленная на фосфатном буфере с рН 5,0 с добавлением, ; пептон 2,0; глюкоза 1,0; агар 2,0.

Ход определения. Культуральную жидкость вместе с биомассой стрептококков экстрагируют ацетоуксусной смесью в соотношении ацетон:кислота:вода 4:1;5 при

55 С в течение 1 ч. Для этого 0,5 мл культуральной жидкости разводят в 4,5 мл смеси, ставят на экстракцию, полученный экстракт разводят фосфатным буфером в соотношении 1:10 и 0,12 мкл, вносят в лунки на агаровой среде, засеянной тест-культурой, По зонам ингибирования роста теста за 14 ч роста определяют антибиотическую активность экстрактов в пересчете по калибровочной кривой, полученной при титровании растворов стандартного препарата Nisaplln фирмы АрПп and Barret (Англия), содержащего 5, 10, 15, 20 мкг/мл чистого низина.

В табл.1 приведены сравнительные данные антибиотической активности и процесса ферментации предлагаемого и известного штаммов, В табл, 2 приведены генетические особенности предлагаемого и известного штаммов, Использование предлагаемого штамма по сравнению с известным имеет следующие преимущества. высокая антибиотическая активность низина в культуральной жидкости; сокращение времени процесса получения целевого продукта: возможность замены основного углеводного субстрата (глюкозы на мальтозу или другой утилизируемый углеводный субстрат).

Формула изобретения

Штамм Streptococcus lactls ВКПМ В-4591— продуцент антибиотика низина.

1687616

Таблица 1

Таблица 2

Составитель Н. Афанасьева

Техред M. Моргентал Корректор В, Гирняк

Редактор М. Петрова производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 3678 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5