Способ определения пестицидной интоксикации рыб

 

Изобретение относится к водной токсикологии и может быть использовано для диагностики интоксикации рыб. Целью изобретения является повышение точности определения. Рыб разделяют на опытную и контрольную партии. Опытную партию помещают в исследуемую среду. Затем отбирают пробы крови у рыб обеих партий, проводят отмывку эритроцитов в забуферной изотонической среде и гемолиз эритроцитов путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером и последующим центрифугированием. Определяют концентрацию гемоглобина и выравнивают ее во всех пробах, далее устанавливают в н,их значение рН, равное физиологическому рН крови рыб. После обработки проб нитритом натрия ежесекундно регистрируют экстинкцию гемоглобина, а пестицидную интоксикацию у рыб устанавливают при отклонении времени полуокисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на 30%. 3 табл. (Л С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1 I ) (я)ю G 01 N 33/18

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4628903/13 (22) 30.12.88 (46) 23.11.91. Бюл, N 43 (71) Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (72) А.М.Левин, М.Л.Кесельман и В.Н.Прокофьев (53) 586(088.8) (56) Зигова И.Л. и др. Мембранотоксический эффект воздействия пестицидов на промысловую ихтиофауну. — Тезисы докл. к XXVII съезду Госхимкомиссии Итоги госиспытаний пестицидов, биопрепаратов и регуляторов роста растений в 1986 г. М., 1987, с. 229 и 230. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕСТИЦИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ РЫБ (57) Изобретение относится к водной токсикологии и может быть использовано для диагностики интоксикации рыб. Целью

Изобретение относится к водной токсикологии и может быть использовано для диагностики интоксикации рыб при загрязнении рыбоводных водоемов пестицидами.

Цель изобретения — повышение точности определения.

На чертеже изображена кинетическая кривая, поясняющая способ.

Способ осуществляют следующим образом.

Рыб разделяют на опытную и контрольную партии, опытную партию помещают в изобретения является повышение точности определения. Рыб разделяют на опытную и контрольную партии. Опытную партию помещают в исследуемую среду. Затем отбирают пробы крови у рыб обеих партий, проводят отмывку эритроцитов в забуферной изотонической среде и гемолиз эритроцитов путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером и последующим центрифугированием. Оп ределяют кон центрацию гемоглобина и выравнивают ее во всех пробах, далее устанавливают в них значение рН, равное физиологическому рН крови рыб. После обработки проб нитритом натрия ежесекундно регистрируют экстинкцию гемоглобина, а пестицидную интоксикацию у рыб устанавливают при отклонении времени полуокисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на

30 . 3 табл. исследуемую среду, затем отбирают пробы крови у рыб обеих партий, проводят отмывку эритроцитов в забуферной изотонической среде и гемолиз эритроцитов путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером и последующим центрифугированием, определяют концентрацию гемоглобина и выравнивают ее во всех пробах, далее устанавливают в них значение рН. равное физиологическому рН крови рыб, после обработки проб нитритом натрия ежесекундно регистрируют экстинкцию гемоглобина, а пестицидную интоксикацию у рыб устанавливают при отклонении времени полу1I693548

55 окисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на 30 .

Пример 1. Для эксперимента брали лещей 2-летнего возраста, выдержанных 45 сут в аэрированной водопроводной воде, Их помещали в емкости с водой, содержащей хлорорганический пестицид полихлор, пинен (ПХП) в концентрации 0,5 мг/л. В

, контроле рыбы содержались в аэрируемой, водопроводной воде без токсиканта. Эритроциты отмывали в 130 мМ раствора NaCI забуференным 20 мМ трис-буфером рН 7,4 и гемолизировали 10 мМ трис-буфером рН

7,4. Концентрацию гемоглобина выравнивали во всех гемолизатах, доводя Esm до

0,5001+. 0,010 путем разбавления гемолизата 10 мМ трис-буфером рН 7,4.

Для контроля выравнивания снимали спектры поглощения гемолизатов в диапазоне длин волн 500-600 нм на спектрофотометре. К 3 мл гемолизата в кювете спектрофотометра добавляли 50 мкл 35 мМ раствора нитрита натрия 10 мМ трис-HCI буфера рН 7,4. Кинетику реакции окисления

HbOz,нитритом натрия регистрировали при

А=630 нм. температуре 25 С, рН 7,4. Оптимальная концентрация нитрита натрия для гемоглобина леща составляла 10 мМ. Изменение экстинкции гемоглобина регистрировали в течение 500 с со скоростью 60 измерений в 1 мин. По кинетической кривой определяли время, за которое экстинкция гемоглобина достигала величины, равной половине максимальной, время полуокисления гемоглобина to,5 выражали в секундах.

Полученные данные приведены в табл.1.

Как видно из табл,1, воздействие ПХП на лещей в течение 24 ч достоверно снижает время полуокисления гемоглобина (то,5) на

42,8 (Р<0,02). При 48-часовой экспозиции

ПХП отмечается достоверное снижение to,5 <0,05).

Пример 2. Аналогично примеру 1 исследовали действие ГХЦГ (гексахлорциклогексана) на кинетику полуокисления гемоглобина леща нитритом натрия.

Концентрация ГХЦГ составляла 2 мг/л, Результаты исследования представлены в табл.2.

Как видно изтабл.2, под влиянием ГХЦГ достоверно снижается время полуокисления гемоглобина лещей на 36%. . Пример 3. Аналогично примеру 1 определяли кинетику окисления гемоглобина лещей нитритом натрия под воздействием растворенных в воде фосфорорганических пестицидов паратион-метила и базудина в концентрации 5 мг/л и 0,1 мг/л соответственно, 5

Результаты исследований представлены в табл.3.

Как видно из табл.3, воздействие на лещей паратион-метила в течение 24 ч, увеличивает tp,5на 107,9%, а через 48 ч — на 43,5%, базудина на 127,8 и 42.6% соответственно.

Полученные данные свидетельствуют о существенных нарушениях функционального состояния гемоглобина при пестицидной интоксикации.

Сравнение результатов регистрации кинетики полуокисления гемоглобина под воздействием хлор- и фосфорорганических пестицидов показыает, что хлорорганическая интоксикация сопровождается снижением времени полуокисления, а воздействие фосфорорганических — противоположным изменением функционального состояния гемоглобина.

Минимальное отклонение от контроля в приведенных примерах составляло 30,5%.

Таким образом, изменение кинетики полуокисления гемоглобина рыб более чем на

30% по сравнению с контролем свидетельствует о патологии и может быть принято за показатель пестицидной интоксикации рыб.

Предлагаемый способ позволяет улучшить качество исследований пестицидной интоксикации рыб за счет повышения точности и достоверности ее определения.

Формула изобретения

Способ определения пестицидной интоксикации рыб, предусматривающий разделение рыб иа опытную и контрольную партии, помещение опытной партии рыб в исследуемую среду, отбор проб крови у рыб обеих партий, отмывку и гемолиз эритроцитов, определение концентрации гемоглобина, обработку нитритом натрия, установление времени полуокисления гемоглобина путем регистрации динамики экстинкции раствора, сравнение опытных и контрольных данных и установление пестицидной интоксикации у рыб опытной партии в случае отклонения on ытных данных от контрольных, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, отмывку эритроцитов проводят в забуференной изотонической среде, а гемолиз— путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером с последующим центрифугированием, после определения концентрации гемоглобина осуществляют выравнивание экстинкции растворов и установление в них значения рН, равного физиологическому рН крови рыб, во всех пробах, после обработки нитритом натрия экстинкцию гемоглобина регистрируют эжесекундно, а пестицидную

16935 18 окисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на ЗО (.,интоксикацию у рыб опытной партии устанавливают при отклонении времени полуТабли ца 1

Показатели

Контроль

Время окисления с,при экспозиции

24 ч

48 ч

108,0

117,2

204,2

135,5

152,0

149,1

206 3

238,0

163,9*16,5

<0,02

-42,8

422,8

255,7

194,8

182,4

181, 5

255,4

322,1

478,2

286,4 39,8

x+s„

Процент

Табли ца2

Показатель

Время окисления с46 при. экспозиции

156 ч

Контроль

143

314

241

401

267+-43

Кинетика нитритного окисления гемоглобина х+я

P.

Процент та бл и ца 3

0рен лолтюкислемия,,с

Показатели

Па рагмнон-метил

Конт- 24 и 48 и Контроль роль

247,4

225,4

224,8

255.7

319,6

275 ° 0

332,0 (..

32 91

74 37

29 215

35 70

79

202

28

54

99,86!7,8

48,067,2 с0,02

+!07,В

404,5

548,8

845,7

227,1

334,5

277,1

466,3

450,3

554 9

463,6

291,0

Кинетика ннтритного окисления геноглобина

363+40.9

21,1 а0,05

+42,6

268! 16, 2

68 ° 9! 7, 4 с0 ° 05

+43,5

611,7+1 с0,01

127,8!

Пв

Процент

Кинетика нитритного окисления гемоглобина

- 105

43

33

88

39

27

28

81

92

193,9

-261, 6

221, 7

183,7

148,4

221,8

224,0

207, <+13,7

<0,05

-30,5

183

141

171

159

1 70+10 (0,05

-36

1693548 яо t(c) Составитель О.Корженко

Техред M.Ìîðråíòàë Корректор Т.Палий

Редактор М.Бланар

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 4076 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государст венного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5