Способ получения стрептококковой гиалуронидазы
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTQPCRQbAJJ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистицеских
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 12Х11.1962 (№ 786340/31-16) Кл. 30h, 6 с присоединением заявки №
Приоритет
Государственный комитет ло делам изобретений и открытий СССР
ЫПК А 61k
УДК 615.45:615.779.94:
577.153.365 (088.8) Опубликовано 06.VIII.1965. Бюллетень № 16
Дата опубликования описания 29.IX.1965
Аьтор изобретения
М. Ш. Могилевский-Гурвич
Заявитель
СПОСОБ ПОЛ УЧ ЕН ИЯ СТРЕПТОКОККОВОЙ ГИАЛУРОН ИДАЗЬ1
Предмет изобретения
Под гисная нюруп га № 189
Известны способы получения стрептококковой гиалуронидазы путем выращивания штамма-продуцента с последуюшим фракционированием микробного фильтрата сернокислым аммонием и очисткой препарата. Однако они не позволяют получить препарат достаточной чистоты с высокой активностью.
По предлагаемому способу для улучшения качества и повышения активности препарата штамм «Китанин» культивируют на среде
A. П. Конникова, а очистку диализата ведуг холестерином; получают высокоакти вную стрептококковую гиалуронидазу, практически свободную от примесей. Для этого штамм
«Китанин» гемолитического стрептококка группы А, серотипа Гриффитс 4 выращивают на питательной среде A. П. Конникова, содержащей на 1 л пептона Хоттингера 1 л мясной воды, 3 л водопроводной воды, 30 мл насыщенного раствора поваренной соли, 15 двузамещенного фосфата натрия и 10 г глюкозы (рН среды 7,4), Материалом для засева колб служит бульон шестичасового роста культуры на скошенном кровяном агаре, для получения которого пробирки со скошенным кровяным агаром заливают 5 мл бульона и ставят в термостат на б час. Колбы с 500 мл бульона засевают 10 мл шестичасового посевного материала и помещают в термостат на
18 час (температура 37 С).
Для выделения гиалуронидазы бульон микробной культуры освобождают от клеток центрифугированием или фильтрованием через слой асбеста и производят фракциониро5 вание сульфатом аммония, добавляемым в три стадии соответственно в количестве 35, 50 и 75>/О от насыщения. Соль добавляют медленно, при энергичном перемешпвании. Фильтраты с сернокислым аммонием оставляют на ночь, после чего осадок отделяют центрифугированием и добавляют к надосадочной жидкости очередную порцию сульфата аммония.
К полученным диализатам добавляют 2 — 3 г холестерина на каждые 100 мл раствора и в течение 15 — 30 мин встряхивают на шуттельаппарате, Достигается полная инактивац ия стрептолизина-О и, кроме того, в растворе значительно уменьшается количество стрептокиназы. Диализаты, обработанные холестери20 ном, фильтруют и высушивают (из замороженного состояния) в вакуумном аппарате.
Сухой вес всех фракций, выделяемых из 1 л фильтрата, составляет от 335 до 422 мг.
Способ получения стрептококковой гиалуронидазы путем выращивания штамма-проду30 цента с последующим фракционированием
173887
Составитель В. А. Таратута
Редактор Ь. А. Шнейдерман Техред А. А. Камышникова Корректор Л. Е. Марисин
Заказ 2385!)О Тираж 450 Формат бум. 60)(90 /а Объем 0,0i изд. л. Цена 5 коп.
ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 микробного фильтрата сернокислым аммо.нием и очисткой препарата, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества и повышенин активности препарата, штамм «Китанин» культивируют на среде А. П. Конникова, а очистку диал изата ведут холестерином.
