Способ окрашивания перехватов ранвье

 

Изобретение отмоется к медицине, а именно к нейрогистологии. Цели изобретения - увеличение количества окрашенных перехватов Ранвье нервных волокон. Цель достигается многоступенчатой обработкой нервных волокон. Вначале их фиксируют 2 ч в 5%-ном глютаровом альдегиде на дистиллированной воде, затем инкубируют 1 ч в 0,01 М растворе хлористого железа (рН 1,5) и 20 мин 81%-ном растворе желтой кровяной соли (рН 2,0). Затем нервные волокна инкубируют 10-20 мин с 3-4%-ном растворе нитрате серебра и после зтого 27-30 мин в 1,5 ±0,5% растворе красной кровяной со ли (рН 2). Затем препараты заключают j глицерин-желатин и изучают под микроскопом.

00103 СОПЕТСКИХ

СОЦИАЛИС ТИ 1Е СКИХ

Р E C11Ó Г> Л И К

ГОСУДАР СТ БЕ ННЬ1 Й КОМИТЕТ

llO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И 01КРЬ1ТИЯМ

ПРИ ГК11Т СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

t !

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4708484/14 (22) 22.05.89 (46) 23.01.92, Бюл. M 3 (71) Институт физиологии им. И.П.Павлова (72) И.Н.Замуоаев (53) 615.475(088.8) (56) Quick 0.С., Waxman S.G. Serrocyanide

and Inor9anic phosphate as cytochemical

reactallt". at perIpherlal nodes of Rawier. -J.

Menrocy tol., 197/, ч.6, N. 5, р.555-570. (54) СГlОСОБ СКРАШИВАНИЯ ПЕРЕXВАТОВ PAHRbE (57) Изобретение относи ся к медицине, а именно к нейрогистологии. Цель изобретения — увеличение количестса окрашенных

Изобретение относится к медицине, в част11ости к нейрогистоло ии.

Цель изобретения — повышение качества окраски за счет увеличения количества окрашенных перехватов Ранвье нервных волокон.

Окрашивание по предлагаемому cnocoby включает фиксациlo в 5%-ном глутаральдегиде на дистиллированной eqAe, инкубацию в течение 1 ч в растворе хлорного железа и затем в растворе ферроцианида калия с последующей заливкой для микроскопического исследования, дополнительно пс ле двух .,a-. ь,ь х инкубaö,.1 препаргл

ИНКуа Р От В i <„ lla 1 Р Ст СРС 1 ГТРа серебра в течение lv — 20 и 27- v мин в

1,5 + 0,5%-ном растворе феррицианида калия, используют глутаральдегид на дистил„„53J „„1707499 А l перехватов Ранвье нервных волокон. Цель достигается многоступенчатой обработкой нервных волокон. Вначале их фиксируют 2 ч в 5%-ном глютаровом альдегиде на дистиллированной воде, затем инкубируют 1 ч в

0,01 М растворе хлористого железа (рН 1,5) и 20 мин 81%-ном рас1воре желтой Ypr вя ной соли (рН 2,0), Затем нервные волокна

víKóbèpóþò 10-20 глин ь 3-4%-ном растворе нитрата ссребра и после этого 27 — 30 миг1 в 1,5 +0,5% растворе красной кровяной со ли (рН 2), Затем препараты =-аключают а глицерин-желатин и иэуча1 т под ве осы1 микроскопом. лированной воде, а заливку осуществляют в глицерин-желатин.

Пример 1. Кролика после предварительного эфирного наркоза умерщвляли декапитацисй. После этого в районе подколенной ямки обнажали седалищнь1и нерв и вырезали его часть и вырезали его часть длиной 1 см. Нерв фиксировали 2 ч в

5%-ном глутаральдегиде на дистиллированной воде. Объем фиксирующей жидкости 40 мл. Затем нерв промывали в 5 порциях дистиллированной воды 4 раза. Потом под микроскопом МССО тонкими иглами удаляли с нер",.а эп.инеерий, После удален1,я э. ин врия oclloculo г1ерв11 nl ствол с -; .- "< на ряд более тонких нервных пу-:г,ов о»щ ной 0,5-1 мм, которыс выделяли и далее проводили по растворам отдельно.

1707499

Формула изобретения

Способ скрашивания перехватов Ранвье, включающий фиксацию в глутаровом альдегиде, инкубацию в течение 1 ч в растворе хлористого железа и затем в растворе ферроцианида калия, отличающийся тем, что с цел ю повышения качества окраски за счет увеличения в препарате количества окрашенных перехватов Ранвье, дополнительно проводят инкубацию в 34 -ном растворе нитрата серебра в течение

10-20 и 27-30 мин в 1,5 и 0,5;(,-ном растворе феррицианида калия.

Составитель А.Древаль

Редактор О.Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор Т.Палий

Заказ 262 Тираж Подписное

В((ИИРИ Госуд;р;.т ><> . ãñ: ",-;.",т.;г и:. обриениям и открь тиям при (Ki-(T С(.СР

1 1303>. гЛ(скьа, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент, г. Ужгород, ул.Га)арина. 101

Выделенные нервные пучки после этого инкубировали 1 ч в 0,01 М растворе хлорного железа (рН 1,5). рН раствора доводили 0,1 н соляной кислотой, а затем проверяли по рНметру. Далее нервы промывали 5 раэ по 5 5 мин в дистиллированной воде. Затем нервные пучки инкубировали 20 мин в 17ь-ном растворе желтой кровяной соли (рН 2), рН . раствора доводили как указано. Промывали нервы в 5 порциях дистиллированной воды 10 по 5 мин. После этого инкубировали нервы

20 мин в 3 -ном растворе нитрата серебра.

Промывали в 5 порциях по 5 мин дисч иллированной воды, Затем инкубировали нервы

30 мин в 1 -ном растворе красной кровя- 15 ной соли (рН 2). Промывали нервы в 5 порциях дистиллированной воды по 5 мин.

После этого заключали нервные пучки на предметные стекла в глицерин-желатин..

Сразу после этого препараты можно изу- чать под световым микроскопом, 20

Результаты. У 50 произвольно выбранных волокон на протяжении 880 мкм было обнаружено 29 окрасившихся перехватов. У

50 волокон, обработанных по способу-прототипу, на протяжении 880 мкм удалось вы- 25 явич ь лишь 2 окрашенных перехвата.

Пример 2. Лягушку умерщвляли декапитацией. После этого вырезали участок седалищного нерва в области бедра длиной 0,5 см. Фиксировали, как и в приме- 30 ре 1. После промывки в дистиллированной воде снимали эпиневральную соединительнотканую оболочку. Затем нерв проводили по растворам тем же способом, как и в примере 1. Нервы заливали в глицерин-жела- 35 тин.

Результаты, В перехватах Ранвье выпал темно-корг".невый осадок. У 50 произвольно выбранных волокон на протяжении 889 мкм было обнаружено 48 окрашенных перехватов, а у обработанных по способу-прототипу 6.

Пример 3. Лягушку умерщвляли декапитацией. После этого вскрывали спиномоэговой канал и выделяли левый дорсальный корешок Х пары спиномозговых нервов. Затем осуществляли с нервом те же операции. что и в примерах t и 2.

Результаты. В толстых нервных пучках мякотных афферентных волокон выявились перехваты Ранвье и насечки Шмидта-Лантермана. У50 произвольно выбранных волокон на расстоянии 880 мкм было обнаружено 36 перехватов Ранвье. У такого же количества волокон на расстоянии 880 мкм из нервных пучков, обработанных по способу-прототипу, выявлено 19 окрашенных перехватов, насечки Шмидта-Лантермана не выявились.