Способ определения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих с @ -фракцию комплемента

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-Фракцию комплемента. Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа. У обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, инкубируют ее с донорскими эритроцитами человека 0(1) Rh-группы, предварительно обработанными нормальным иммуноглобулином человека. Затем проводят центрифугирование и в надосадке определяют спектрофотометрически количество циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-Фракцию комплемента. По сравнению с известным способом сокращается время анализа в 9-12 раз и упрощается данный способ.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/536

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4757282/14 (22) 04.11.89 (46) 07.02.92. Бюл, hh 5 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад. И. П. Павлова (72) И. Л. Кожевникова, А, Г. Рыбкин и А. А. Яковлев (53) 615,373(088,8) (56) Роль иммунных комплексов при заболеваниях, — Докл. научной группы ВОЗ. Женева, 1978, с,-27, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ, СОДЕРЖАЩИХ Сз-ФРАКЦИЮ КОМПЛЕМЕНТА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения

Изобоетение относится к ма « ° может использоваться в клиническои иммунологии для определения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сзфракцию комплемента.

-Целью изобретения является сокращение времени анализа и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для получения суспензии зритроцитов кровь донора О(1) Rh-группы берут из локтевой вены в количестве 4 мл в пробирку, содержащую О,1 мл. 2,5 ед. гепарина, и центрифугируют при 1500 об/мин 15 мин с последующим удалением надосадка, Осадок, содержащий эритроциты, трижды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин по

10 мин. Для промывки используют фосфатно-солевой буфер рН7,2-7,4. Полученный после отмывки осадок разводят фосфатносолевым буфером до получения 3-5ф, суспензии эритроцитов, 0,3-0,5 см

3 эритроцитов смешивают с 9,5-9,7 мл фосфа„„. Ж„, 1711881 А1 циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-фракцию комплемента, Цель изобретения — сокращение времени анализа и упрощение способа. У обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, инкубируют ее с донорскими эритроцитами человека 0(1) Rh-группы, и редвар ител ь но обработанными нормальным иммуноглобулином человека. Затем проводят центрифугирование и в надосадке определяют спектрофотометрически количество циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-фракцию комплемента. По сравнению с известным способом сокращается время анализа в 9-12 раз и упрощается данный способ. то-солевого буфера, После чего 1,5 мл полученной 3-57, суспенэии эритроцйтов донора смешивают с 1,5 мл нормального человеческого иммуноглобулина в разведении

1:200 и инкубируют при 37 С в течение

20-30 мин с последующим центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин, Надосадочную жидкость удаляют, а осадок доводят фосфатно-солевым буфером до

1,5 мл и используют для последующего определения.

Использование предлагаемого разведения иммуноглобулина позволяет получить концентрацию белка в растворе в пределах

0,5-1,1 мг/мл, т.е. в пределах максимальной чувствительности спектрофотометрического способа учета. Выбор в качестве клетоксорбентов эритроцитов донора 0(1)

Rh-группы позволяет свести к минимуму возможность видовой и групповой агглютинации, так как указанная группа считается универсальной. В данном случае остальными системами гистосовместимости можно пренебречь, поскольку необходимо исклю- П, Боткина г. Ленинграда 14.1.89 в тяжелом чить возможность прямого гемолиза. состоянии с жалобами ча боли в области

Использование равных объемных сост- печени, тошноту, рвоту, сильную слабость с ношений эритроцитов и иммуноглобулина диагнозом направления — хронический виобеспечивает адекватный контакт Fc-ре- 5 русныйгепатитвцирротическойстадии, Нецепторов клеток с Fc-цепями иммуноглобу- смотря на проводимую терапию состояние лина, что объесняет также и выбранный больного прогрессивно ухудшалось, наратемпературный режим. стала желтуха, асцит. усилились проявления

Для исследования кровь обследуемого геморрагического синдрома, появились берут натощак из локтевой вены в количест- 10 проявления печеночной энцефалопатии. В ве 3,5-3 мл и центрифугируют при 1500 об/мин последующем развилась острая печеночная в течение 15 мин. Полученную сыворотку недостаточность, отмечались носовые и жеразводят физиологическим раствором в со- лудочные кровотечения, протромбиновый отношении 1:3 и 1,5 мл разведенной сыво- индекс упал до 30-25%, на фоне нарастаюротки смешивают с 1,5 мл 3-5 % суспензии 15 щих явлений острой печеночной недостадонорскихэритроцитов,полученнойпопри- точности больной скончался 21.3.89. веденной методике, Инкубацию смеси про- Клинический диагноз: хронический вирус+ водят в течение 40-45 мин при комнатной ный гепатит В, НВз Ад, тяжелое течение. температуре. По истечении сроков инкуба- Портальная гипертензия. Острая печеночции смесь центрифугируют при 1500 об/мин 20 ная недостаточность. Прекома 1. Кома, Див течение 10 мин и измеряют оптическую агноз подтвер кден патолого-анатомически, плотность надосадочной жидкости против За время нахождения в больнице больной контрольной пробы на спектрофотометре трижды был обследован предлагаемым спопри длине волны 450 нм, Полученное значе- собом. Использовалась 3%-ная суспензия ние оптической плотности отражает количе- 25 эритроцитов доноров 0(1) Rh-группы, 1,5 мл ство циркуляции иммунных комплексов, которой обрабатывали 1,5 мл нормального содержащих С3-фракцию комплемента. В человеческого иммуноглобулина в разведекачестве контрольной пробы используют нии 1:200.1,5 мл сыворотки больного, развесмесь. 1,5 мл разведенной 1 Ç исследуемой денной 1:3, инкубировали в течение 40 мин сыворотки, 1,5 мл физиологического раство- 30 с 3%-ной суспензией эритроцитов, груженра, которую обрабатывают параллельно с ных иммуноглобулином, Измерение провоосновной пробой, дили при длине волны 450 нм против

Использование в этом случае равных контрольной. пробы на спектрофатометре объемных соотношений сыворотки и сус- СФ-46, пензии эритроцитов обеспечивает полно- 35 Было выявлено, что по мере ухудшения ценный контакт рецепторов и иммунных состояния больного наблюдалось нарастакомплексов, содержащих Сз-фракцию комп- ние содержания циркулирующих иммунных лемента. При избытке эритроцитов не все комплексов, содержащих Сз-фракцию комп- рецепторы к Сз "загружены" иммунными лемента, резко увеличившегося при наракомплексами, что искажает результат, тогда 40 стании явлений острой печеноч ной как при избытке сыворотки возможно избы- недостаточности, приведшей в итоге к леточное содержание иммунных K0M!lABKcoB тальному исходу. по сравнению с общим количеством рецеп- Пример 2. Больная Кардава M. И., торов к Сз-фракции, не учитываемых вслед- поступила в городскую инфекционную больствие этого, что также ведет к ошибочным 45 ницу М ЗО им. С. П. Боткина г. Ленинград с результатам, жалобами на кожный зуд, тошноту, боли в

Выбранный температурный режим ин- области печени, сильную слабость, потерю кубации объясняется вероятностью спон- аппетита в состоянии средней тяжести с танной агглютинации эритроцитов. что диагнозом направления острый вирусный наблюдается в ходе экспериментов при ис- 50 гепатит. По результатам клинико-биохимипользовании температур, превышающих ческого обследования был поставлен диаг30-37 С. При использовании нижнихтемпе- ноэ: острый вирусный гепатит В, HBsAg ратур адекватного контакта не происходит. тяжелое течение. Прекома 1. Больная нахоТаким образом, выбранный температурный дилась в отделении реанимации и интенсиврежим является оптимальным и позволяет 55 ной терапии, где проводилась обойтись без дополнительных технических массированная терапия, на фоне которой средств (термостат, холодильник и т,п.). состояние больной постепенно улучшалось, Пример 1. явления острой печеночной недостаточноБольной Краско Р. С„ поступил в город- сти регрессировали. Больная была перевескую инфекционную больницу М 30 им, С, дена в отделение, где продолжалась

1711081

Составитель В. Литовченко

Редактор M. Стрельникова Техред M.Moðlåíòàë КоРРектоР T. Малец

Заказ 336 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 терапия, на фоне которой состояние больной продолжало улучшаться и она была выписана по выздоровлении на 56-й день госпитализации. 3а время нахождения в больнице трижды проводилось обследование предлагаемым способом. Использовали

5;(,-ную суспенэию эритроцитов донора 0(1)

Rh-группы, предварительно обработанные нормальным человеком иммуноглобулином в разведении 1,200, которые инкубировали в течение 45 мин с сывороткой больной в разведении 1:3. Измерения проводили на спектрофотометре СФ-46 при длине волны

450 нм, Содержание циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сэ-фракцию комплемента, снижалось по мере регрессии явлений печеночной недостаточности, достигнув к выписке нормальных цифр, тогда как общее количесгво циркулирующих иммунных комплексов в фазе реконвалесценции остается повышенным.

Использование предлагаемого способа позволяет упростить определение циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сэ-фракцию комплемента и сократить сроки исследования в 9-12 раэ в известном способе затрачивается на исследование 2436 ч, а в предложенном способе 2-4 ч), снизить стоимость исследования в 8-10 раз эа счет отказа от использования клеточной ли5 нии RA i, а также l-меченной антисыворот125 ки против иммуноглобули нов и дорогостоящего устройства для регистрации результатов радиоиммунного метода применять доступное недорогое оборудова10 ние и реактивы отечественного производства, Формула изобретения

Способ определения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сэ15 фракцию комплемента, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее с клетками-сорбентами,,центрифугирование, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени анализа и упрощения

20 способа, в качестве клеток-сорбентов используют человеческие донорские эритроциты 0(1) R h-груп п ы, обработанные нормальным человеческим иммуноглобулином, и после центрифугирования в надосад25 ке определяют количество циркулирующих иммунных комплексов спектрофотометрически,