Способ определения иммуногенной активности препаратов из адгезинов кишечной палочки

 

Использование: ветеринарная микробиология, иммунология, способы определения иммуногенных свойств препаратов, в частности, из адгезинов кишечной палочки. Сущность изобретения: подкожно иммунизируют белых мышей адгезинами кишечной палочки, заражают перорально через 7-14 дней штаммом кишечной палочки, из кото- jDoro получают адгезины, забивают животных на 2-4 день после заражения, отбирают тонкий отдел кишечника, готовят суспензию, высевают ее на твердые питательные среды, выделяют, идентифицируют культуру, определи ют частоту выделения исходного штамма. Способ упрощает и повышает точность оценки иммуногенной активности препарата. 2 табл.^^-^f •ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21).4738784/13 (22) 21.09.89 (46) 15.02.92. Бюл., N 6 (71) Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (72) А.Н.Головко, Г.B. Гнатен ко и Г.А, Красников (53) 576.8.097 (088.8) (56) А.Н.Головко.Адгезивный антиген К99 у патогенных для телят эшерихий и его иммуногенные свойства. Автореф.дис. канд..вет. наук. 1989, с,157.

Пирожков M,К. Усовершенствованная вакцина против колибактериоза /эшерихиоза поросят. Автореф.дис.канд.вет.наук.

1989, с. 183.

Falavera А, ес а1., Rev. cub. olinlc; v. -1,:

1984, 15, N. 2, р. 111-116.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и иммунологии, а именно к области определения иммуногенйых свойств адгезинов кишечной палочки, которая вызывает колибактериозы сельскохозяйственных животных.

Адгезины (пили, фимбрии) являются одним из факторов патогенности E,coll. Они обеспечивают способность микро0рганизмов прикрепляться к эпителию кишечника и сказывать дальнейшее болезнетворное влияние на организм животного. Из адгезинов в настоящее время производят препараты для специфической профилактики колибак.териоза. Иммуногенные свойства вакцин, приготовленных из адгеэинов кишечной па„... ЖÄÄ 1712406 А1 (s>>s С 12 N 1/20, С 12 0 1/00, А 61 К 39/108 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ

АДГЕЗИНОВ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ (57) Использование: ветеринарная микробиология, иммунология, способы определения иммуногенных свойств препаратов, в частности, из адгезинов кишечной палочки.

Сущность изобретения: подкожно иммунизируют белых мышей адгезинами кишечной палочки, заражают перорально через 7-14 дней штаммом кишечной палочки, из которого получают адгезины, забивают животных на 2-4 день после заражения, отбирают тонкий отдел кишечника, готовят суспензию, высевают ее на твердые питательные среды, выделяют, идентифицируют культуру, определяют частоту выделения исходного штамма. Способ упрощает и повышает точность оценки иммуногенной активности препарата. 2 табл. лочки испытывают несколькими способами

Известен способ определения иммуногенной активности препаратов из адгезинов путем внутрибрюшинного заражения вакцинированных лабораторных животных летальными дозами Е,coll с гомологичным типом адгезинов.

Недостатком этого способа является неполная доказательность полученных результатов, так.как при этом не учитывается иммунитет возникающий в кишечнике, где s основном и оказывают свое действие эшврихии с адгезинами, вызывая так наэыРаемую энтеротоксическую форму заболевания (колидиарею). Внутрибрюшинное заражеI

1712406 ечника, измельчают его, добавляют

10,0 мл физиологического раствора хлориа натрия и растирают в стерильной фарфоровой ступке. После этого на специальные питательные среды (Минка или УНИИЭВ) елают высев 0,1 мл суспензии кишечника.

Через 24 ч культивирования при 37 С из каждого посева подвергают исследованию

10 выросших колоний в реакцИи агглютинации (PA) на стекле с антиадгезивной К 99 сывороткрй. Далее определяют средний процент выделения исходной культуры по группам и проводят сравнение. Оптимальным для оценки иммуногенной активности используемого для иммунизации мышей препарата из адгезинов Е.coll, считается день после заражения, в который отмечается наиболее существенная разница в выделении исходной культуры из суспензии,, тонкого отдела кишечника иммунизированных и неиммунизированных животных.

Определение выделяемости исходной культуры из суспензий тонкого отдела кишечника мышей в различные дни после заражения.

Пример 2, Опытные группы белых мышей массой 14-16 г иммунизируют подкожно, однократно, различными дозами (0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,7 мл).адгезивного антигена К 99. Животных контрольной группы не иммунизируют. Через.7 дней после вакцинации мышей опытных групп и животных контрольной группы заражают через рот живой культурой Е.соК содержащей адгезин К 99 в дозе 1 10 микробных тел.

Через 2 сут. после заражения, выделение и идентификацию исходной культуры проводят, как в примере 1.

После определения процента выделения исходной культуры из суспензий тонкого отдела кишечника, иммунизированных различными дозами препарата и непривитых животных, устанавливается наиболее оптимальная доза, дающая наибольшую степень предотвращения прикрепления

Е.coll к эпителию кишечника.

Выделение исходной культуры из суспензий тонкого отдела кишечника мышей, иммунизированных различными дозами адгезина К99.Формула изобретения (Способ определения иммуногенной активности препаратов из адгезинов кишечной палочки, включающий подкожную. иммунизацию животных, последующее их заражение исходным штаммом кишечной. палочки, из которого получают адгезины, и оценку результатов, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения ние дает воэможность воспроизвести лишь ш септическую форму заболевания.

Наиболее близким к изобретению яв- д ляется способ определений иммуногенности препаратов из адгезинов, путем 5 вакцинации глубокостельных коров с по- д следующим пероральным заражением, родившихся от них телят, энтеротоксигенными E;coll с гомологичным типом адгезинов. Эффективность препаратов в данном 10 случае устанавливается по наличию или отсутствию клинических проявлений заболевания (диареи).

Недостатком известного способа является его трудоемкость и большие расходы 15 по постановке пробы в контролируемых условиях и то, что способ не позволяет определить степень предотвращения антиадгезивными антителами прикрепления эшерихий к эпителию кишечника. 20

Целью изобретения является упрощение и повышение точности определения степени иммуногенной активности препаратов из адгезинов Е.coll при использовании в качестве биологической модели белых 25 мышей.

Поставленная цель достигается тем, что привитых препаратами из пилей E.coll мышей заражают через рот культурой Е.соИ с гомологичным типом адгезионов, на вто- ЗО рые — четвертые сутки после заражения мышей умервщляют, а из тонкого отдела кишечника готовят суспензию, которую высевают на твердую питательную среду для культивирования Е,coll с адгезином, после 35 культивирования проводят идентификацию выделенной культуры и ее соответствие исходной с антиадгезивной сывороткой, причем полученные данные сравнивают с результатами заражения непривитых мы- 40 шей по частоте выделения исходной Е,coll в группе животных.

Примеры определения степени предотвращения прикрепления Е,соН к эпителию кишечника белых мышей, иммунизирован- 45 ных препаратами адгезинов.

Пример 1. Беспородных белых мышей, массой 14 — 16 г вакцинируют подкожно, однократно адгезином К 99, полученным из культуры E.coll К 12 К 99, в обьеме 0,3 мл. 50

Животных контрольной группы не прививают.

Через 7 дней после вакцинации опытных животных и мышей контрольной группы заражают через рот живой культурой Е.collÄ 55 в содержащей адгезин К 99 в дозе 1 10 микробных тел. Через 1-5 сут после заражения, в контрольной и опытной группах эфиром умервщляют по 5 мышей. У каждого животного отдельно извлекают тонкий отдел ки1712406

Таблица 1

Составитель А; Головко

Техред М.Моргентал Корректор С. Шевкун

Редактор Ю. Середа

Заказ 510 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Г точности, иммунизируют белых мышей, sa- высевают на твердые питательные среды ражение осуществляют перорально через для идентификации выделенной культуры. а

7-14 дней. далее животных забивают на 2-4 о иммуногенности препарата судят по часдень после заражения, отбирают тонкий от- тоте выделения культуры исходного штам дел кишечника, готовят из него суспензию, 5 ма.