Способ оценки токсичности биологических жидкостей

 

Изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для определения токсичности биологических жидкостей организма человека. Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций при одновременном повышении точности способа . Оценку токсичности производят путем забора пробы биологической жидкости, приготовления фильтрата, воздействия этим фильтратом на суспензию подвижных биологических микрообъектов с последующей регистрацией зависимости подвижности суспензии подвижных микрообъектов от времени. При этом пробу подвергают фильтрации в пенной фазе через фильтр с диаметром пор 45 ± 5 А° и пропускной способностью 0,5± 0,1 в области мол.м. 50000, в качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозо-цитратном растворе, определяют жизнеспособность сперматозоидов быка, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в фильтрате относительно жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе. Предлагаемый способ позволяет повысить точность оценки токсичности биологических жидкостей организма человека при различных заболеваниях , сопровождающихся интоксикацией . ;..,. сл с

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (! 9) ((!) (я)s G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4771381/14

,(22) 19.12.89 (46) 07.04.92. Бюл. N 13 .(71) Всесоюзный научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники (72) А.П.Еськов, P.È.Êàþìîâ, В.И.Прилуцкий, В;К;Ткачев и А.А.Конкин (53) 612.015 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1224723, кл. G 01 N ЗЗ/48, 1984.. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, биологии и может быть использовано для определения . токсичности биологических жидкостей организма человека. Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций при одновременном повышении точности способа. Оценку токсичности производят путем забора пробы биологической жидкости, приготовления фильтрата, воздействия

Изобретение относится к медицине, в частности оно применимо для определения токсичности биологических жидкостей ограниэма человека при различных заболеваниях, сопровождающихся интоксикацией, Цель изобретения — упрощение способа за.счет сокращения числа трудоемких опе-. раций при одновременном повышении точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу исследуемой биологической жидкости подвергают фильтрации в пенной фаэтим фильтратом на суспензию подвижных биологических микрообъектов с последующей регистрацией зависимости подвижности суспензии подвижных микрообъектов от времени. При этом пробу подвергают фильтрации в пенной фазе через фильтр с диаметром пор 45 + 5 А0 и пропускной способностью 0,5+ 0,1 в области мол.м. 50000, в качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка s глюкозо-цитратном растворе, определяют жизнеспособность сперматозоидов быка, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в фильтрате относительно жизнеспособности суспензии сперматозоидов быка в З глюкозоцитратном растворе. Предлагаемый способ позволяет повысить точность оценки токсичности биологических жидкостей организма человека: при различных заболеваниях, сопровождающихся интоксикацией. зе через фильтр с диаметром пор 45+ 5 А и пропускной способностью 0,5 . 0,1 в области мол.м. 50000, В качестве суспенэии подвижных биологических микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе. Жизнеспособность суспензии сперматозиодов быка определяют как произведение среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности в момент начала воздействия фильтратом, а токсичность определяют по изменению жизнеспособности суспенэии сперматозоидов быка в фильтра1725120

4 те относительно жизнеспособности суспенэии сперматозоидов быка в глюкозоцитрат. ном растворе.

Выбор характеристик фильтра (а именно, диаметра пор 45 5А и пропускной способностей 0,5й01) обусловлен необходимостью удаления из образца биологической жидкости высокомолекулярных соединений, вызывающих агглютинацию сперматозоидов. 3о позволяет правильно оценить жизнеспособность суспензии сперматозоидов. Кроме того, характеристики фильтра таковы, что в фильтрат попадают все компоненты, ответственные за токсичность.

Фильтрация в пенной фазе позволяет использовать малые объемы образца, обеспечивает лучшее перемешивание и удаление фильтрационной корки.

Использование в качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов суспензии сперматозоидов быка в глюкоэоцитратном растворе обусловлено тем, что сперматозоид как клетка млекопитающего по сравнению с парамециями по известному способу более адекватно реагирует на изменение состава биологических жидкостей организма человека.

Пример 1. У больного из катетера, . стоящего в одной из центральных вен, берут 10 мл крови, далее ее центрифугируют

15 мин со скоростью 3000 б/мин. Полученную сыворотку подвергают с помощью перистальтического насоса фильтрации через волоконный фильтр с диаметром пор

45+5 А и пропускной способностью

0,5й 0,1 в области мол.м. 50000.

Для определения степени токсичности фильтрат сравнивают с контрольным раствором. Контрольной пробой служит глюкозоцитратная среда (цитрат натрия, вода дистиллированная).

Опытным образцом в эксперименте служит фильтрат, доведенный до изотонии.

На 5 мл фильтрата добавляют 0,2 r глюкозы и 0,050 г цитрата натрия.

В качестве суспензии подвижных биологических микрообъектов используют замороженную в парах жидкого азота гранулированную сперму быка.

Оттаивание каждой гранулы осуществляют в 0,5 мл глюкоэоцитратной среды при

40 С. После оттаивания сперму сливают в колбочку и тщательно перемешивают. Затем в 1 мл опытной пробы добавляют 0,2 мл оттаянной спермы; Приготовленные опытный и контрольный образцы помещают в измерительные кюветы. Проводят измерение зависимости подвижности — величины, 10 равной концентрации подвижных клеток на средний модуль их скорости, от времени в условных единицах для опытного и контрольного образцов. Вычисляют жизнеспособность суспензии сперматозоидов быка в опытном Ж и контрольном Ж" образцах как произведение среднего времени подвижности tcp на логарифм подвижности в начальный момент времени logmt = 0

Ж =т ср logm с =0,Ж =тср logmс =0

Среднее время подвижности измеряют в минутах, а подвижность в условных единицах.

Определяют токсичность (индекс токсичности) как отношение жизнеспособности опытного образца к жизнеспособности контрольного образца ж 100 g

20 где 1т — индекс токсичности.

Для сыворотки крови больного В. с диагнозом панкреанекроз,абсцесс сальниковой сумки с прорывом в свободную брюшную полость, разлитой гнойный перитонит состояние после операций: tcp = 21,7 мин, m =438 у.е., Ж =57,8 мин, tcp" =51,5 мин, m "=178у.е., Ж"=131,5 мин,!с=44%.

Пример 2. Для сыворотки крови больного А. с диагнозом панкреанекроз, ферментативный перитонит состояние после холецистостомии, дренирования и тампонирования сальниковой сумки и брюшной полости; tcpо =- 25,1 мин, гпс-оо =

35 605 у.е., Ж = 68,6 мин, tcp = 51,5 мин, m

= 178 у,е., Ж" = 131,5 глин, l = 53%.

Пример 3. Для сыворотки крови больного Я; с диагнозом сепсис, разлитой гнойный перитонит, флегмона забрюшинного пространства и парарентальной клетчатки состояние после операций: tcp = 12,8 мин, m =258y.е.,Ж -30,9мин,tcp"=34,1 мин, п1с-о" = 190 у,е„Ж = 77,7 мин, lT = 40%.

Пример 4. Для сыворотки крови

45 здорового человека Т.: tcp = 36,4 мин, вс-о

= 217 у.е., Ж = 217,6 мин, тср" = 49,1 мин, пс-о" = 167 у.е., Ж" = 167,9 мин, lT = 130%.

Пример 5. Для сыворотки крови здорового человека К.: tcpо = 51,6 мин, псс-oo .

50 =335у.е., Ж =339мин, tcp 62,8 мин, тс-о"

= 284 у,е., Ж" = 284 мин, lr = 119%.

Из примеров 1-4 видно, что больные имеют значение индекса токсичности значительно ниже (выше интоксикация), чем у здоровых людей. У больного Я. по сравнению с больными В; и А. индекс токсичности наименьший, что свидетельствует.о большей выраженности интоксикации, которая привела бального к летальному исходу. У всех представленных пациентов с синдро1725120 стей за счет использования стандартной суспензии сперматозоидов, сохраняемой неограниченного долго до использования в жидком азоте, а также за счет возможности использования инструментальной оценки подвижности суспензии сперматозоидов. Возможность использования суспензии сперматозоидов обеспечивается предварительной фильтрацией исследуемого образца.

35 .

Составитель Н.Гуляева

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор О.Кундрик

Редактор И.Горная

Заказ 1172 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета пО изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101 мом эндотоксикоэа величина индекса токсичности совпала с клинико-лабораторными данными.

Определенный данным методом индекс токсичности дает возможность объективной 5 оценки степени выраженности эндотоксикоэа, выбора метода деэинтоксикационной терапии и ее оценки.

Пример 6. Экспериментальное животное (собака), диагноз: перитонит. 10

Получают лимфу, проводят пробоподготовку аналогично примеру 1: tcp - 17,5 мин, пзс-о =403 у е., Ж =45,6 мин. t

Пример 7. Экспериментальное жи- 15 вотное (собака), диагноз: перитонит, Получают спинномозговую жидкость, проводят пробоподготовку аналогично примерам 1-4: ted = 18,2 мин, гл -о = 512 у.е., Ж = 49,3 мин, т р" 34,2 мин, m " = 258 20 у.е., Ж" = 81,9 мин, 1 = 60,2 .

Изобретение позволяет повысить точность способа эа счет оценки подвижности по 1000 и более клеткам, а также эа счет определения жизнеспособности суспензии 25 сперматозоидов быка как произведения среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности в момент начала воздействия. В совокупности точность предлагаемого способа увеличивается, по 30 крайней мере, на порядок. Предлагаемый способ позволяет также упростить определение токсичности биологических жидкоФормула изобретения

Способ оценки токсичности биологи-. ческих жидкостей, включающий исследование воздействия биологической жидкости на суспензию подвижных биологических, микрообъектов с последующей оценкой токсичности по изменению подвижности объектов во времени непосредственно после добавления исследуемой жидкости, отл и ч а ю шийся тем, что,, с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций при одновременном повышении точности способа, пробу биологической жидкости предварительно подвергают фильтрации в пенной фазе, удаляя ингредиенты с мол.м. более 50000, в качестве микрообъектов используют суспензию сперматозоидов быка в глюкозоцитратном растворе, а жизнеспособность определяют как произведение среднего времени подвижности на логарифм величины подвижности.