Способ экспресс-анализа биологически активных соединений с подвижным атомом водорода

 

Изобретение относится к медицинской химии, фармакологии, химии биологически активных соединений и может быть использовано при экспресс-анализе больших партий биои фармпрепаратов, лекарственных средств и растений на наличие биологической активности. Цель изобретения - повышение чувствительности и сокращение времени анализа. Регистрируют светосумму свечения, возникающего в реакции пероксидазного окисления люминола, которая уменьшается в присутствии соединений с выраженными донорными свойствами.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 21/64, 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ л ( (21) 4792445/25 (22) 15.02.90 (46) 15.06.92. Бюл. N 22 (71) Казахский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии им.А.Н.Сызганова (72) Ю.К.Подгорный,,В.П.Верболович и

Л.М.Подгорная (53) 543.42 (088.8) (56) Угарова Н,Н., Лебедева P,В. Структура и функции пероксидазы из хрена. Биохимия, 1978, т.43, в.10, с,1731-1742.

Авторское свидетельство СССР

¹ 1320749, кл. G 01 N 33/48, 1985.

Изобретение относится к медицинской химии, фармакологии. химии биологически активных соединений, Известен способ определения электродонорной активности химических соединений по увеличению скорости изменения оптической плотности гемсодержащего соединения в опытной и контрольной пробах.

Однако чувствительность данного способа является сравнительно низкой (10-4—

10-5 М), процедура подготовки образца сложна, время одного анализа (20-30 мин) велико.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа при определении донорных свойств широкого спектра соединений, в том числе и неизвестной природы.

Поставленная цель достигается путем использования в качестве гемсодержащего,, Ы,„, 1741026 А1 (54) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ С

ПОДВИЖНЫМ АТОМОМ ВОДОРОДА (57) Изобретение относится к медицинской химии, фармакологии, химии биологически активных соединений и может быть использовано при экспресс-анализе больших партий био- и фармпрепаратов; лекарственных средств и растений на наличие биологической активности, Цель изобретения — повышение чувствительности и сокращение времени анализа, Регистрируют светосумму свечения, возникающего в реакции пероксидазного окисления люминола, которая уменьшается в присутствии соединений с выраженными донорными свойствами. соединения пероксидазы и определения светосуммы свечения, генерируемого в процессе ферментативной реакции пероксидазного окисления люминола, которую проводят вплоть до полного завершения реакции вследствие исчерпания одного из субстратов — перекиси водорода.

В кювету люминометра вносят 250 мкл

0,1 M фосфатного буфера, рН 8,0, и 50 мкл

5 10 М раствора пероксидазы хрена (КФ

1.11.1.7). Реакцию запускают введением 200 мкл 5 10 М раствора люминола, содержащего 7 10 М перекиси водорода. На ленте самописца записывают кинетику реакции вплоть до ее полного завершения, Определяют светосумму свечения и принимают ее за 100%. Регистрируют кинетику реакции в присутствии тестируемого на наличие донорных свойств соединения. Вновь определяют светосумму свечения и в случае ее

1741026

Формула изобретения

50

Составитель Ю.Подгорный

Редактор Л.Веселовская Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Е.Соломинская

Заказ 2080 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4(5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 снижения считают, что у тестируемого соединения присутствуют донорные свойства.

Пример 1. Установление наличия донорных свойств у восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН).

В кювету люминометра вносят 250 мкл

0,1 М фосфатного буфера, рН 8,0, и 50 мкл

5 10 М раствора пероксидазы хрена. Запускают реакцию введением 200 мкл 5 10

М раствора люминола, содержащего 7.10

М перекиси водорода. Записывают кинетику реакции вплоть до ее полного завершения. Светосумму свечения принимают за

100, Записывают кинетику реакции в присутствии 1 10 М раствора НАДФ . Определяют, что светосумма свечения составляет 65,9 от контрольной. Снижение светосуммы свечения в реакции пероксидазного окисления люминола в присутствии тестируемого соединения позволяет говорить о наличии у него донорных сВойстВ, Пример 2. Установление наличия донорных свойств у окисленной формы никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ):

В кювету люминометра вносят 250 мкл

0,1 Мфосфатного буфера,,рН 8,0, и 50 мкл

5 10 М раствора пероксидазы хрена. Запускают реакцию введением 200 мкл 5 10

М раствора люминола, содержащего 7 10

М перекиси водорода, Записывают кинетику реакции вплоть до ее полного завершения и принимают светосумму свечения за

100 . Записывают кинетику реакции в присутствии 1 10 М раствора НАДФ.. Определяют, что светосумма свечения не изменилась и составляет по прежнему

100 . Делают вывод об отсутствии у тестируемого соединения донорных свойств, Пример 3. Установление наличия донорных свойств у вновь синтезированного соединения.

В кювету люминометра вносят 250 мкл

5 0,1 М фосфатного буфера, рН 8,0, и 50 мкл

5 10 М раствора пероксидазы хрена. Запускают реакцию введением 200 мкл 5 10

М раствора люминола, содержащего 7 10

М перекиси водорода. Записывают кинети10 ку реакции вплоть до ее полного завершения и принимают светосумму свечения за

100 . Записывают кинетику реакции в присутствии 5 10 М тестируемого соединения.

Определяют, что светосумма свечения со15 ставляет 41,8о от контрольной. Исходя из снижения светосуммы свечения в реакции пероксидазного окисления люминола в присутствии тестируемого соединения, делают вывод о наличии у него донорных свойств, 20

Спссоб экспресс-анализа биологически активных соединений с подвижным атомом

25 водорода, включающий введение в тестируемое вещество гемсодержащего соединения, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и сокращения времени анализа, в качестве гем30 содержащего соединения используют пероксидазу, проводят реакцию пероксидазного окисления люминола, в процессе которой регистрируют сопровождающее ее свечение вплоть до завершения реакции, 35 проводят реакцию пероксидазного окисления в присутствии тестируемого соединения, определяют светосумму в первом и втором случаях, светосумму в первом случае принимают за 100 и, если светосумма во

40 втором случае меньше 100, считают, что у тестируемого соединения присутствуют дон ор н ы е свойства.