Способ оздоровления селекционных сортов картофеля от заражения х-вирусом

 

Использование сельское хозяйство, фитопатология , картофелеводство, семеноводство Сущность изобретения: свободные от вирусов растения, устойчивые к заражению, получают путем поэтапной клоновой селекции , предусматривающей предварительный отбор безвирусных клонов методом иммуноферментного анализа, искусственное их заражение путем натирания листьев сокогл растений, зараженных Х-вирусом, отбор непораженных клонов, повторное заражение путем прививки зараженных Х-вирусом черенков и повторный отбор непораженных растений После этого полученные растения размножают 2 табл I - сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ И СТИЧЕ С К ИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 Н 1 /04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4786917/13 (22) 30.01.90 (46) 07.07.92, Бюл. ¹ 25 (71) Институт генетики и цитологии АН

БССР (72) А.Н.Палилова и Н.Г.Даниленко (53) 631:042.14(088.8) (56) Букасов С.М„Камераз А.Я. Селекция и семеноводство картофеля, — Л.; Колос, 1972.

Кеглер Х., Шпаар Д. Борьба с вирусными- болезнями у культурных растений.Картофель. В кн.: Борьба с вирусными болезнями оастений. М„1986,с.150-182.

Бульба. Энциклопедический справочник о картофеле. Мн„1988, с. 273 — 274(прототип), . Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений, Известен способ селекции сортов картофеля на вирусоустойчивость, осуществляемый по определенной схеме, в основу которой положены следующие принципы: подбор форм. для скрещивания, одна из которых несет признак крайней устойчивости (иммунности); искусственное инфицирование гибридов вирусами с последующей их диагностикой; отбор высокоустойчивых продуктивных форм.

Данный способ включает длительный процесс отбора и испытаний (до 9 лет), требует больших экономических затрат. Недостатком его является вероятность вырождения созданного сорта, т.е, сниже,50., 1745161 А1 (54) СПОСОБ ОЗДОРОВЛЕНИЯ СЕЛЕКЦИОННЫХ СОРТОВ КАРТОФЕЛЯ ОТ ЗАРАЖЕНИЯ X-ВИРУСОМ (57) Использование: сельское хозяйство, фитопатология, картофелеводство, семеноводство. Сущность изобретения: свободные от вирусов растения, устойчивые к заражению, получают путем поэтапной клоновой селекции, предусматривающей предварительный отбор безвирусных клонов методом иммуноферментного анализа, искусственное их заражение путем натирания листьев соком растений, зараженных X-вирусом, отбор непораженных клонов, повторное заражение путем прививки зараженных X-вирусом черенков и повторный отбор непораженных растений. После этого полученные растения размножают; 2 табл, ние урожайности и товарных качеств клубней за счет потери вирусоустойчивости.

Наиболее близким к предлагаемому является способ борьбы с вирусным вырождением картофеля, заключающийся в. освобождении посевного материала от ви- ° русной инфекции, при котором верхушечную меристему вычленяют из этиоли- а рованных ростков, а у зеленых растений— из пазушных почек, Полученные изоляты высаживают на питательную среду с послед дующей пересадкой меристемы каждый на свежую среду до получения регенерантов. В течение 2 — 6 мес. меристемы регенерируют ростки, которые снимают и высаживают на новую питательную среду для ускорения и образования растений.. Меристемные растения многократно проверяются на пред1745161 водится отбор безвирусного потомства 30 (клонов).

45 уровне за счет выбраковки неустойчивых ге- 50 нотипов.

Предлагаемый способ реализуют следующим образом, Пример 1. Двести клубней сорта

Адретта проращивали в сосудах при 20 С и 55 в фазе 3 — 4 недельных проростков оценивали индивидуально методом иммуноферментного анализа на присутствие Х, F, М, S-вирусов, Отобрали 70 безвирусных растений и сразу же заразили их методом натимет обнаружения вирусов. Безвирусные растения, размноженные в культуре in vitro иэ пробирок, пересаживают затем в питомники размножения для получения клубневого потомства.

Недостатки способа — быстрое повторное заражение оздоровленного материала вирусами, возможность утраты сортовых характеристик, повышенная чувствительность к грибным инфекциям, Цель изобретения — повышение устойчивости селекционных сортов картофеля к заражению Х-вирусом.

Цель достигается тем. что культивируемый устойчивый сорт, проявляющий первые признаки вирусного вырождения, подвергают клановой селекции, осуществляемой в несколько этапов.

1) Индивидуальная оценка клубней на присутствие вирусов с помощью иммуноферментного анализа, основанного на взаимодействии диагнос-.ической сыворотки (антител) с соком проверяемых растений, в котором вирусный белок является антигеном. О степени зараженности растения судят по окраске субстрата, обусловленной ферментативной активностью конъюгата (комплекса антитела с ферментом), преобразующего субстрат. На основе оценки про2) Выращивание клонов и их оценка на вирусоустойчивость при искусственном заражении: натирании листьев соком растений, содержащих Х-вирус в высоком титре;

3) Повторный отбор.и размножение устойчивых клонов на фоне тяжелой инфекции — прививок инфицированных вирусами черенков на здоровые растения;

4) Размножение и иммунодиагностика отселектированных вирусоустойчивых клонов.

В отличие от известного в предлагаемом способе не используется дорогостоящая, требующая специального оборудования и недостаточно эффективная культура апикальных меристем. Способ позволяет длительное время поддерживать вирусоустойчивость исходного сорта на высоком

25 рания соком растения, пораженного ХВК.

Спустя 3 недели, методом растения достигали стадии бутонизации, повторно оценивали их на присутствие ХВК (ЭЛИЗА-тест) и отбирали устойчивые. Клубневое потомство тринадцати отобранных устойчивых к ХВК растений (77 клубней) первого этапа отбора высаживали в сосуды и проращивали при

20 С. В фазе полных всходов (3-4 недельные растения) заражали ХВК прививкой с целью отбора иммунных форм, Через 3 недели проводили иммуноферментный анализ на присутствие вируса в подвое. Иэ 77 инфицированных растений только 2 были свободны от ХВК, что составило 3; от числа испытанных клонов.

Результаты сведены в табл. 1.

Пример 2. Аналогичную процедуру двухэтапного отбора на устойчивость к ХВК применили к сорту Лошицкий, В отличие от первого примера. опыты на сорте Лошицкий проведены в полевых условиях. В первом цикле отбора при натирании листьев соком больного растения устойчивость к ХВК составила 88 (35 клонов из 40), Потомство отобранных устоичивых клонов заражали методом прививки в течение двух лет ("тяжелая инфекция") с целью отбора иммунных форм. В первый год прививок выделили 32 устойчивых клона из 81, которые вновь высадили и в фазе полных всходов прививали повторно. Методом иммуноферментного анализа провели отбор безвирусных растений (иммунных). Средний уровень устойчивости отобранных клонов составил при заражении прививкой 79 с варьированием по семьям от 100 до 66 . Всего было выделено 257 иммунных клонов.

Результаты представлены в табл,1, Пример 3, Сто клубней сорта Сафир выращивали в поле и 3-4 недельные проростки инфицировали соком растения, больного ХВК, Методом иммуноферментного анализа оценивали индивидуально каждое растение. Ни в одном из испытанных клонов

Х-вирус не обнаружен, Клубневое потомство анализируемых растений йнфицировали прививкой в течение двух лет, после чего оценивали методом иммуноферментного анализа на присутствие ХВК. Все растения испытанных клонов были свободны от ви русных частиц, т.е, были иммунными (табл

1), Испытания на урожайность отобранны. контрастных по устойчивости клонов расте ний сорта Лошицкий проведены в течение

1989. 1990 гг. в полевых условиях на делян ках размером 12.5 м в четырехкратной по.

2 вторности при площади питания 70х70 см.

1745161

Формула изобретения

Способ оздоровления селекционных сортов картофеля от заражения Х-вирусом, Таблиц41

Слособ за вменил

Тил устойчивести

Натирание соком оление

Количество $ устоичиустойчивых аосты расрастений, тений шу"

Сорт

Число рас тений шт

Число рас- Кол тоний нмм рас

1чест нных тени

77

13

Устойчивый

Высокоустойчивый

Иммунный

Имм нный

Адретта

Лошицкий

79

100

257

100

100

328

1.00

32

17

153

81

137

153 .

88

100

Сафир

Сан

Таблица 2

Составитель Н.Даниленко

Техред М,Моргентал КоРРектоР В.Гирняк

Редактор М.Янкович

Заказ 2335 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Данные представлены в табл. 2, из которой видно, что двухэтапный отбор на вирусоустойчивость приводит к повышению продуктивности устойчивых клонов на 30 ( по сравнению с поражаемыми клонами.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повышать уровень устойчивости районированных сортов, фиксировать наступление вирусного вырождения сорта, повышать продуктивность оздоровленного сорта. предусматривающий получение свободных от вирусов и устойчивых к заражению растений и последующее их размножение, о тличающийся тем,что,с цельюповыше5 ния устойчивости сортов к заражению, свободные от вирусов растения получают поэтапной клоновой селекцией, включающей предварительный отбор безвирусных клонов методом иммуноферментного ана10 лиза, искусственное их заражение путем натирания листьев соком зараженных

X-вирусом растений, отбор непораженных клонов. повторное заражение путем прививки зараженных X-вирусом черенков и по15 вторный отбор непораженных растений,