Способ дифференциальной диагностики системной красной волчанки и ревматизма

 

Использование; медицина, ревматология . Цель изобретения - повышение точности способа. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют связывающую способность сывороточного иммуноглобулина G с пролином и при ее уровне 0,6 г/л и более диагностируют системную красную волчанку, а менее 0,6 г/л - ревматизм. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (и)э G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4856460/14 (22) 01.08.90 (46) 30.10.92. Бюл, ¹ 40 (71) Киевский медицинский институт им.

А,А. Богомольца (72) А.А. Замулко, В.Н, Федорович, Е.H. Амосова, Л.Л, Сидорова и А.И. Скрипка (56) Тер, архив, 1980, т. 52, № 6, с. 64-67.

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики красной волчанки и активного ревматизма.

Известен способ дифференциальной диагностики системной красной волчанки и ревматизма путем определения уровня иммуноглобулинов сыворотки крови. Однако, известный способ не точен и не специфичен, так как повышение уровня 1 наблюдалось как при ревматизме, так и при системной красной волчанке, а частота обнаружения повышенного их уровня составляла 58.37ь.

Известен способ дифференциальной диагностики системной красной волчанки и ревматизма путем определения количественного и функционального состояния Т- и

В-систем иммунитета. Однако, известный способ трудоемок, дорогостоящий и длителен по времени, Наиболее близким по техническому решению к заявляемому является способ дифференциальной диагностики системной

<о> !Ж ао 1 772757 А 1 (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКИ И РЕВМАТИЗМА (57) Использование; медицина, ревматология. Цель изобретения — повышение точности способа. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют связывающую способность сывороточного иммуноглобулина G с пролином и при ее уровне 0,6 г/л и более диагностируют системную красную волчанку, а менее 0,6 г/л — ревматизм. 2 табл. красной волчанки и ревматизма, который заключается в определении в крови больного содержания иммунобластов.

Недостаток способа заключается в том, что он является недостаточно точным, так как повышенное содержание иммунобластов в периферической крови наблюдалось у 607ь больных СКВ и 20 больных ревматизмом.

Известный способ отличается также большей трудоемкостью, поскольку требует специального выделения лимфоцитов.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Цель достигается тем, что в сыворотке крови пациента определяют связывающую способность Ig G с пролином, при ее уровне 0,6 г/л и более диагностируют системную красную волчанку, а менее 0,6 г/л — ревматизм.

Способ осуществляется следующим образом.

В две пробирки (опытную и контрольную) наливают по 0,15 мл сыворотки крови.

В опытную пробиркудобавляют0,05 мл про1772757 лина в физ. растворе фирмы йеапа1 (ВНР)—

82,5 мг/мл, не обладающим комплементарными, антикомплементарными и гемолитическими свойствами, а в контрольную— такое же количество изотонического раствора хлорида натрия, Содержимое пробирок перемешивают, инкубируют в течение одного часа в термостате при 37 С, Затем опыт и контроль раскапывают микрошприцем в лунки агар-агара, как это делается при определении иммуноглобулинов радиальной иммунодиффузией по методу Манчини (1965). Пластину инкубируют во влажной камере при температуре 4 Свтечение24ч. По окончании инкубации измеряют диаметр колец преципитации. Расчет связывающую способности Ig G с пролином производят по формуле;

Ig — AT = K — On, где Ig — AT — связывающая способность Ig 6 с пролином;

К вЂ” количество tg G в смеси сыворотки крови с пролином.

On — количество 1 g G в смеси сыворотки крови с пролином, Разведения моноспецифической сыворотки производят в соответствии с "Наставлением по применению моноспецифических сывороток против иммуноглобулинов человека".

Используют преимущественно моносыворотки, титр которых на ампуле составлял

1:20, 1:25, 1;32. Разведения антисыворотки делают на 0,1 М веронал-мединаловом буфере следующим образом

При титре 1:20 сухое содержимое ампулы растворяют e t мл дистиллированной воды, затем полученную антисыворотку разводят 9,5 мл веронал-мединалового буфера.

Стеклянные пластины покрывают слоем смеси; агар (9,5 мл) и моноспецифическая сыворотка(9.5 мл), разведенная как описано выше, т.е, в соотношении 1:1. Приготовление моноспецифических сывороток с титрами на ампуле 1;25 и 1:32 осуществляется аналогично в соответствии с указанными титрами.

Системное прогрессирующее поражение соединительной ткани при ревматизме и СКВ сопровождается нарушением обмена коллагена. Специфической аминокислотой для коллагена является пролин, который не содержится ни в каких других белках организма и является специфической меткой коллагена и продуктов его распада.

На долю пролина приходится около

33 $ аминокислотного состава коллагена.

При достаточной интенсивности и распространенности деструктивных процессов, протекающих в соединительной ткани, 5

45 в крови и моче больных, увеличивается концентрация пролина.

Повышенная связывающая способность t g G с пролином является маркером повышения уровня этой аминокислоты в крови и сохраняется длительное время после нормализации содержания пролина.

Учитывая вышесказанное, в соответствии с целью изобретения была изучена связывающая способность I g 6 с пролином у

17 доноров, 25 больных ревматизмом 1-11 степени активности и 32 больных СКВ 1 — 11 степени активности. Диагноз СКВ у обследованных больных верифицирован на основе общепринятых критериев Американской

Ревматологической Ассоциации, включая наличие Е-клеток и антинуклеарного фактора в диагностически значимых титрах, а ревматизма — на основании критериев

Киселя-Джонса-Нестерова. У всех больных ревматизмом имели место органические поражения сердца, подтвержденные при Эхо-КГ.

Полученные результаты представлены в табл. 1.

При анализе индивидуальных величин исследуемого показателя в группе больных ревматизмом и СКВ оказалось, что у 31 иэ

32 больных СКВ (т,е. 96,8ф,) связывающая способность g 6 с пролином составила 0,6 г/л и более, тогда как у 23 из 25 больных ревматизмом {92.07) значения этого показателя были менее 0,6 г/л, Это дало основание испольэовать численное значение связывающей способности 1 С с пролином

0,6 г/л как дифференциально-диагностический критерий распознавания рассматриваемых заболеваний. При этом точность способа (т.е. процент правильной постановки диагноза у 57 больных СКВ и ревматизмом) составляет 94,77;.

Сопоставление точности способа-прототипа и предлагаемого способа представлено в табл. 2.

Как видно иэ данных табл. 2, точность предлагаемого способа достоверно превышает точность способа-прототипа.

Таким образом, применение способа обеспечивает высокую точность (94,7ь) дифференциальной диагностики СКВ и ревматизма.

Пример 1, Больная К., 22 лет, поступила в стационар с жалобами на периодические ноющие боли в области сердца, сердцебиение и одышку при физической нагрузке; ломоту в суставах, субфебрилитет, пятнисто-папулеэную сырь после приема антибиотиков, похудание 3 кг беэ видимой причины. В анамнезе 3 года назад — тонэиллэктомия, 1772757

20

При объективном обследовании: общее состояние удовлетворительное. Кожные покровы бледные. пятнисто-папулезная сыпь на коже туловища и конечностей. Периферический лимфоузлы не пальпируются. Суставы не изменены. В легких везикулярное дыхание. Тоны сердца ри1мичные, систолический шум на верхушке, Пульс 100 уд. в мин, АД 120/70 мм рт.ст. Живот мягкий, при пальпации безболезненный, Симптом Пастернацкого отрицательный с обеих сторон.

Периферических отеков нет.

Данные объективного обследования не позволяли достоверно диагностировать ревматизм или СКВ, Больная была обследована предлагаемым способом.

Получены следующие результаты.

Связывающая способность

1 9 G с пролином r/ë

В крови больной Нормальная

0,532 0 — 0,10

Учитывая непродолжительный характер заболевания (до 3 месяцев), отсутствие данных, свидетельствующих об органическом поражении клапанов сердца и наличии характерных иммунологических сдвигов, больной был поставлен диагноз; ревматизм актианая фаза, 1 степени акивности, первичный ревмокардит, ХНК 1 ст. Больной был проведен полный курс противоревматической терапии, больная была взята на диспансерное наблюдение. В последующем при дальнейшем наблюдении в течение года были выявлены признаки сформировавшегося митрального стеноза, Пример 2. Больная У., 31 года, поступила в стационар с жалобами на боли в области сердца, одышку при нагрузке, боли в временами легкое припухание мелких суставов кистей, онемение кончиков пальцев рук и ног, субфебрилитет.

Считает себя больной 2 года, когда появились вышеперечисленные жалобы. При обследовании выявлен диастолический шум над аортой, поставлен диагноз ревматизм, аортальная недостаточность.

При поступлении объективно: общее состояние удовлетворительное. Нерезко выраженная гиперемия щек и переносицы.

Увеличены периферические лимфоузлы. Незначительная дефигурация проксимальных межфаланговых суставов кистей рук. В легких везикулярное дыхание. Тоны сердца ритмичные, тахикардия, диастологический шум над аортой. Пульс 100 ударов а мин. АД

130/60 мм рт.ст. В анализе крови; Нв 110 г/л, СОЭ 15 мм/ч. Общий анализ мочи: белок 0,099 г/л, лейкоциты до 10 а поле зрения, эпителий плоский — 8 в и/эр, эритроциты — 5-7 а и/зр. Антинуклеарный фактор и LE-клетки не обнаружены.

Учитывая клиническую картину и объективные данные (нечетко выраженная волчаночная бабочка, лимфаденопатия, стойкость полиартрита с поражением мелких суставов кистей, поражение почек) с Iloследующим подтверждением при лабораторном и инструментальном обследовании диагноз ревматизма был пересмотрен в пользу СКВ.

Для уточнения диагноза больная была обследована предлагаемым способом.

Получены следующие результаты.

Связывающая способность

1 g G с пролином, г/л;

В крови больной Нормальная

3,325 0 — 0,10

Это позволило подтвердить диагноз:

СКВ, хроническое течение. 1 ст, активности с поражением кожи, суставом, сердца, почек, Р3С. Больной было назначено 2 таблетки преднизолона со снижением дозы до 1/2 таблетки и 1 табл. делагила на ночь, отменена бициллинопрофилактика, вызывающая при СКВ сенсибилизацию организма и неблагоприятно сказыаающая на течении заболевания.

Спустя три месяца, после инсоляции (поездка в Крым) у больной резко повысилась температура до 38 С, усилилась гиперемия щек, появилась пятнисто-папулезная сыпь, элопеция, усилилась одышка, тахикардия, увеличилось артериальное давление. При повторном поступлении в клинику и обследовании было обнаружены Е-клетки и антинуклеарный фактор, что позволило подтвердить диагноз СКВ.

Пример 3, Больная PÄ 36 лет, поступила в стационар с жалобами на боли в суставах, в области сердца, недомогание, похудание, субфебрилитет, слабость, Данные клинического, лабораторного и инструментального обследования не свидетельствовали с достаточной достоверностью в пользу активного ревматизма или

СКВ, Больная была обследована согласно предлагаемому способу, получены следующие результаты.

Связывающая способность

1 9 G с пролином, г/n:

В крови больной Нормальная

0,6 0 — 0,10

Был установлен предварительный диагноз: СКВ, хроническое течение, 1 ст. активности с поражением сердца. суставоа, РЭС.

Спустя 2 месяца, после 0Р3 у больной повысилась температура до 38,2 С увеличились периферические лимфоузл ы, 1772757 появилось припухание суставов кистей. При лабораторном обследовании обнаружены

LE-клетки и энтинуклеакрный фактор, что позволило окончательно подтвердить диагноз СКВ, назначить преднизолон 2 таблетки и 1 таблетку делагила на ночь.

Таблица 1

Связывающая способность 1 g 6 с пролином (г/л) у здоровых, больных ревматизмом и СКВ

П р и м е ч а н и е: Р— достоверность изменений по сравнению со здоровыми, Р— достоверность изменений по сравнению с ревматизмом.

Таблица 2

Сопоставление точности предлагаемого способа и способа-прототипа

Способ иагн тики

Предлагаемый способ

Способ-и ототип

Точность способа, 94,7

< 0,01

60,0

Редактор А,Бер

Техред M.Моргентал

Корректор Н.Милюкова

Заказ 3844 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Согласно предлагаемому способу было обследовано 25 больных ревматизмом и 32 больных CKB. Полученные результаты были использованы для назначения патогенетической терапии и, тем самым. способствовали уменьшению частоты развития тяжелых осложнений и сокращению сроков пребывания больных в стационаре, что позволяет рекомендовать предлагаемый способ для широкого внедрения в практическое здравоохранение.

Таким образом, способ обладает следующими существенными преимуществами; — более высокая точность по сравнению с прототипом (94,7 против 60, Р<0,01);

5 — способ прост, не требует дорогостоящей аппаратуры и специально обученного персонала, Формула изобретения

Способ дифференциальной диагности10 ки системной красной волчанки и ревматизма, путем исследования крови, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности способа, в сыворотке крови определяют уровень 19 G до и после инкубации с

15 пролином и при его увеличении в шесть раэ и более диагностируют системную красную волчанку, а при увеличении менее чем в шесть раэ — ревматизм.