Способ выявления углеводородокисляющих микромицетов
Использование: биотехнология, индикация биоповреждений нефтяных топлив. Сущность изобретения: для выявления углеводородокисляющих микромицетов отбирают пробу нефтяного топлива, водного отстоя из топлива или этанольного экстракта из материалов, контактирующих с жидкой фазой, и по наличию в пробе циклогексанкарбоновой, фенилуксусной, фенилпропионовой и толуиловой кислот выявляют микромицеты класса Deltromycetes.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (5I)5 С 12 0 1/04
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ. (21) 4898151/13 (22) 02.01.91 (46) 07.01.93, Бюл, ¹ 1 (72) А.С.Костин, В,Б.Скрибачилин, T,С.Они ценко, Е.И.Бордукова, Г.А,Осипов и T.Ï,Íåдорезова (56) Canadian Journal of Microbiology, 1976, ч. 22, р. 1209 — 1213. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ MMKPOMMLIETOB
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выявления углеводородокисляющих микромицетов, повреждающих нефтяные топлива.
Известен способ выявления микроорганизмов-деструкторов неионогенных поверхностно-активных веществ (ПАВ), заключающийся в приготовлении питательной. среды, содержащей минеральные соли и ионогенные ПАВ в качестве единственного источника углерода и энергии, выращивании на ней культур испытываемых микроорганизмов и определения активных форм деструкторов по зоне просветления вокруг выросших колоний, Недостатками способа являются грудоемкость и длитеЛьность анализа, а также его низкая чувствительность и достоверность.
Наиболее близким к изобретению является способ определения биодеградации нефти, по которому образцы нефти контаминируют микроорганизмами, экспонируют в течение 7...14 сут, а затем с помощью массспектрометрического метода определяют содержание в них различных компонентов.
Способу присущи длительность испытаний и недостаточная точность.
„„ Ы„„1786069 А1 (57) Использование; биотехнология, индикация биоповреждений нефтяных топлив.
Сущность изобретения; для выявления углеводородокисляющих микромицетов отбира- ют пробу нефтяного топлива, водного отстоя из топлива или этанольного экстракта из материалов, контактирующих с жидкой фазой, и по наличию в пробе циклогексанкарбоновой, фенилуксусной, фенилпропионовой и толуиловой кислот выявляют микромицеты класса Deltrornycetes.
Цель изобретения — сокращение-времени определения и повышение точности способа.
Цель достигается тем, что в известном способе выявления углеводородокисляющих микромицетов, повреждающих нефтя- Я ные топлива, отбирают пробы топлива, водного отстоя из топлива или этанольного экстракта из материалов, контактирующих с а жидкой фазой, и определяют в них наличие с,, органических кислот, являющихся продук- Ср тами метаболизма углеводородокисляющих 0 микромицетов, с помощью хроматомассспектроскопического метода.
В основу предлагаемого способа поло- 0 жен установленный экспериментально факт, что при наличии углеводородокисляющих микромицетов в топливе, водном отстое из топлива и этанольном экстракте из в материалов, контактирующих с жидкой фазой, присутствуют органические кислоты, являющиеся продуктами метаболизма микромицетов.
Так, например, в составе образцов водного отстоя и этанольного экстракта из герметика У-ЗОМЭС-5, контактировавшего с топливом, зараженным микроскопическими
1786069 грибами родов Cladosporium resinae (Lindau) de Vries, f, avellaneum, Penlcllllurn
nalgiovensis Laxa, Acremonium КИ, Огмз, обнаружены циклогексанкарбоновая, толуиловая, фенилпропионовая и фенилуксусная кислоты, которые являются строго специфическими продуктами метаболизма чистых культур, Предлагаемый способ осуществляют в следующей"последовательности: отбирают пробу водного отстоя или этанольного экстракта; отобранную пробу подкисляют серной кислотой до рН 2„,3; проводят экстрагирование водной фазы диэтиловым эфиром; упаривают экстракты и обрабатывают их силилирующим агентом; вводят пробы в испаритель хроматографа: производят запись хроматограмм и масс-спектров исследуемых проб; индикацию углеводородокисляющих микромицетов проводят по наличию на хроматограммах и масс-спектрах пиков и линий, принадлежащих циклогексанкарбоновой, толуиловой, фенилпропионовой и фенйлуксусной кислотам.
Данная индикация может быть проведена и по наличию других соединений, относящихся к производным циклогексана, летучим жирным. дикарбоновым, ароматическим и дикарбоновым ароматическим кислотам, однако указанные органические кислоты дают наиболее достоверный результат.
Примеры конкретного выполнения.
Хроматомасс-спектрометрический анализ, 1. Пробу водного отстоя подкисляют серной кислотой до рН 2...3, Затем к 1...2 мл водной фазы добавляют 0,5„,1,0 мл диэти-. лового эфира и экстрагируют в течение 3...5 . мин при встряхивании. Эфирные экстракты упаривают и обрабатывают 20 мкл бистриметилсилилтрифторацетамида (8STFA) e течение 10...15 мин при 60...65 С, Идентификацию состава пробы проводят методом хроматомасс-спектрометрии на хроматомасс-спектрометре HP-5985В с капиллярной колонкой из плавленого кварца, внутренняя поверхность которой покрыта неподвижной фазой — метилсиликоновая
OV-101. Используют политермический ре. жим анализа при скорости изменения температуры 3...5 град/мин, В качестве газа-носителя используют гелий, скорость потока которого составляет через инжектор
30...35 мл/мин, через колонку в масс-спект20
25 ного и засоренного углеводородокисляю30
50 ба, в качестве исследуемого материала используют нефтяное топливо, водный отстой из
5
15 рометр 1,5...2,0 мл/мин. Запись спектров проводят непрерывно, Наличие продуктов метаболизма микромицетов в водном отстое свидетельствует о загрязнении ими топлива.
2. Пробу материала, контактировавшего с жидкой фазой, измельчают механическим способом. Навеску массой 1,0...3,0 г помещают в аппарат Сокслета, добавляют 150 мл этанола и экстрагируют в течение 6 ч. После окончания экстрагирования экстракт декантируют, Затем 1 мл этанольного экстракта упаривают и обрабатывают 20 мкл BSTFA в течение 10...15 мин при 60...65 С.
Индентификацию состава пробы этанольного экстракта проводят методом хроматомасс-спектрометрии по методике, описанной выше, Наличие продуктов метаболизма микромицетов в этанольных экстрактах материалов, контактировавших с жидкой фазой, свидетельствует о загрязнении ими топлива, 3, Идентификацию состава проб исходщими микромицетами топлив проводят методом хроматомасс-спектрометрии по методике, описанной выше.
Для выделения спектров продуктов метаболизма из мешающего фона компонентов топлива используют метод компьютерной фильтрации, реализуемой с помощью ЭВМ.
Предложенный способ выявления углеводородокисляющих микромицетов, повреждающих нефтяные топлива, обладает более высокой точностью и достоверностью за счет исследования продуктов метаболизма микромицетов на молекулярном уровне.
Кроме того, сокращается время выявления углеводородокисляющих микромицетов (продолжительность определения составляет 50 мин).
Формула изобретения
Способ выявления углеводородокисляющих микромицетов, включающий отбор пробы исследуемого материала и определеwe ее химического состава, о т л и ч а ю щ ий с я тем, что, с целью сокращения времени определения и повышения точности спосотоплива или этанольный экстракт из материалов, контактирую цих с жидкой фазой, непосредственно в исследуемом материале определяют содержание циклогексанкарбоновой кислоты, толуиловой кислоты, фенилпропионовой кислоты и фенилуксусной кислоты и по их наличию выявляют микромицеты класса Oeltromycetes.
