Способ выявления самрylовастеr pyloridis в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта

 

Изобретение относится к области медицины , а именно к микробиологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что из биоптата слизистой желудочно-кишечного тракта готовят цитологический препарат. Затем его фиксируют в течение 5-7 мин в 1-1,5%-ном растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты. А окрашивают в составе, содержащем азур И, глицерин и воду. Бактерии на препарате имеют вид палочковидных структур или спирилл . Способ позволяет быстро и качественно выявить бактерии. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4848873 (22) 09.07.90 (46) 07,02.93. Бюл. ¹ 5 . (71) Киевский научноисследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии (72) Е.B.Måäâåöêèé, Е,П.Тумасова и

3.B. Гершевикова (73) Киевский НИИ клинической и экспериментальной хирургии (56) Gnarpe Н. et al., "APmts", 1988, 96, № 2, р.128. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ Campylobacter

pyioridls В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

Способ относится к области биологии и медицины предназначен для экспрессвыя вления микроорганизмов Campylobacter

pyloridis в биопсийном материале слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.

Известно несколько прямых и косвенных способов обнаружения Campylobacter ру!ог! сИз в биопсий ном материале желудочнокишечного тракта человека; выявление фермента уреаэы, как маркера колонизации бактериями слизистой оболочки желудка культуральный метод, гистологический метод и электронно-микроскопический метод.

Наиболее близким по технической сущности и принятым за прототип является бактериоскопический способ выявления

Campylobacter pyloridis, который представляет собой модифицированную окраску по

Граму включает фиксацию препарата, окрашивание и бактериоскопию.

Основным недостатком этого способа является низкая точность выявления

Campylobacter pylorldls и техническая слож- ность исследования, обусловленная испольБЦ„„1794245 А3 (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии. Целью является повышение точности способа.

Цель достигается тем, что из биоптата слизистой желудочно-кишечного тракта готовят цитологический препарат. Затем его фиксируют в течение 5-7 мин в 1 — 1,57-ном растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты. А окрашивают в составе, содержащем азур И, глицерин и воду. Бактерии на препарате имеют вид палочковидных структур или спирилл. Способ позволяет быстро и качествен- но выявить бактерии; 1 табл. зованием многократной окраски и обесцвечивания.

Целью изобретения является повышение точности, сокращение времени и упрощение техники исследования.

Указанная цель достигается тем, что в способе выявления Campylobacter pylorldls в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта; включающем фиксацию препарата. окрашивание и бактериоскопию, согласно изобретению, фиксацию осуществляют в 11,5 -ном растворе фосфорновольфрамовой кислоты, окрашивание .выполняют над открытым огнем, при этом в качестве красителя используют состав содержащий Азур И и глицерин в следующих соотношениях, мас. Я:

Азур П 0,8-1,5

Глицерин 30-40

Вода Остальное

Способ выполняют следующим образом.

Готовят отпечатки биопсии слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта на 1794245 чистых предметных стеклах. Высушивают. микроорганизмы Campylobacter pyloridls

На препараты наливают 1-1Я-ный рас- обнаруживали в препарате в виде темно-ситвор фосфорновольфрамовой кислоты, че- них изогнутых палочек или.спирилл. рез 5-7 мин сливают, промывают водой. Пример 2. Биопсийный материал в

Покрывают препараты красящей смесью со- 5 виде кусочка слизистой оболочки кишечнистоящей из. мас.7;: ка отпечатывали на сухие предметные стекАзур И 0,8- 1,5 ла, высушивали, На препараты наливали

Глицерин 30-40 1, -ный раствор фосфорновольфрамовой

Вода Остальное . кислоты. через 5 мин сливали, промывали

Проводят стекло 15-20 раз над пламе- 10 водой; Покрывали красящей смесью состоянем газовой или спиртовой горелки до noes-. щей из, мас, : ления паров, Дают стеклу остыть втечение Азур И 0,8

1 мин. Осторожно. держа предметное Глицерин 30 стекло горизонтально. поливают водой,: Вода Остальное смывая таким образом краситель. Препа- "5 Проводили стекло над газовой горелкой 15 рат высушивают и рассматривают под раз до появления паров, 1 мин стекло остымикроскопом. .:: вало. Держа стекло горизонтально, промыПриэтомсмесьпрепаратовготовятсле- вали водой, смывая краситель. Препарат дующим образом .: : высушивали и изучали под микроскопом.

В дистиллированной воде {60 мл) рас- 20 Микроорганизмы Cimpylobacter pylorldis творяют азур Н до полного растворения, за- обнаруживали в препарате в виде палочкотем добавляют глицерин, доводят обьем до вйдных структур или спирилл, 100 мл дист.водой. . П ри м eр1. Предназначенныйдля выяв- Для доказательства возможности доления микроорганизмов Cainpylobacter 25 стижения положительного эффекта был ucpylorldls биопеийный материал слизистой .. следован биопсийный материал слизистой оболочки желудка был отпечатан на сухиЕ. оболочкижелудочно-кишечноготрактау220 предметные стекла, айсушен. Фиксирован . больных предлагаемым слособом и спосов 1,57;-ном растворе фосфорновольфрамо- бом-прототипом, Положительный результат вой кислоты в течение 7 мин, промыт водой. 30 был получен при исследовании 205 биопсий

Затем покрыт красящей смесью состоящей с помощью заявленного способа и у 183 из. мас., : ... полученных способам-прототйпом.

Азур П 1,5 .:, .-По предложенному способу выявляеГлицерин 40 " . мость сосгавила 93 Д, время одного исслеВода Остальное 35 дования 5-7 мин., в сравнении с прототипом, Проводят над газовой горелкой 20 : раз до . -где выявляемость 837, время одного исслепоявления паров, 1 мин стекло остывало.: дования 15-29 мин, Держа стекло горизонтально, поливали во- Изобретение обладает высокой достодой, смывая краситель. Препарат высуши- верностью и позволяет сократить время одвали и рассматривали под микроскопом, 40 ногоисследования в 2-3 раза.

Ф о р м у л а и з о 6 р е т е н и я: в качестве фиксатора используют 1,0-1.5 $"

Способ выявления Савру1оЬастег ный раствор фосфорно-вольфрамовой кис.

pylorldls в слизистой оболочке желудочно- лоты, а окрашивание проводят в составе. кишечного тракта путем фиксации биоптата содержащем азур Н. глицерин и воду, в слес последующим приготовлением гистологи- 50 дующем соотношении компонентов, мас.,: ческого препарата. его Окрашиванием и выявлением бактерий по пвлочковидным азур И - 0,8-1,5; структурам, отличающийся тем, что, . глицерин 30-40, с целью повышения точности способа, фик- вода . Остальное. сацию проводят в течение 5-7 мин, при этом 55

1794245

Зависимость качества окраски от концентрации фосфорновольфрамовой кислоты и Азура II в красящем растворе.

Результат изображения под микроскопом

Кон ент а ия аство ов

Аруз-П

Фосфорно-вольфрамовая кислота

1,8

2,0

1,8

2,0

Составитель Е. Тумасов

Техред М.Моргентал Корректор А,Мотыль

Редактор Г. Федотов

Заказ 532 Тираж Подлисное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москве, Ж-35, Раушская наб;, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород. ул. Гагарина, 101

2

4

6

0;5

0.6

0.7

ОЯ

1,2

1,5

1,6

0,5

0,6

0,7

1,0

1,2

1,5

1.6

Низкий контраст

Низкий контраст

Умеренный контраст

Нормальный контраст

Нормальный контраст

Нормальный контраст

Контрас 4овышен, окрашивается окружающая микроорганизмами среда

Плотность окраски высокая, выявление бактерий из-за интенсивного окрашивания окружаю ей мик оо ганизмы с е ы зат нено