Способ получения сложных эфиров 16,17-ацетальзамещенной андростан-17 @ -карбоновой кислоты

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!>5 С 07 F 3/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 4iJitlldl@P

)О Ц у "" :,.- . P

ЛИОТЯКА (ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ ойъ

СО

0 сй и т.

Х2 (21) 4027252/04 (22) 03.04.86 (46) 15.02.93. Бюл. N 6 (31) 8501693-9 . (32) 04.04,85 (33) SE (71) Актиеболагет Драка (SE) (72) Пол Хакан Андерссон, Пер Тур Андерссон, Бенгт Ингемар Аксельссон, Брор Арне

Тален и Ян Вилльям Трофаст (SE) (56) Патент Великобритании hL 1384372, кл, JC 2 U, 1975.

Патент Великобритании N 1438940, кл.

С 2 U, 1976.

Fhalen and Brattzand, Arznelm. — Forsch.

29, 1687 90, 1979, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЛОЖНЫХ

ЭФИРОВ 16,17-АЦЕТАЛЬЗАМЕЩЕННОЙ

АНДРОСТАН-17 Р -КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ (57) Изобретение касается производных стероидов, в частности получения сложных эфиров 16,17-ацетальзамещенной андростан-17 Р -карбоновой кислоты общей ф-лы

l OR3

C=O

0 й1й

Изобретение относится к способу получения новых производных стероидов, сложных эфиров 16,17-ацетальзамещенной андростан-17/3-карбоновой кислоты общей формулы I:

„„Я „„1795972 АЗ где Xi= H, F; Xz = H,F, RI=- Н, С>-С4-алкил;

R2= Н, С1 С5-алкил, R3 = а) СВ4В5-О-С(0)-йв, б) СВ485 — О-C(0) — Y — Вв при R4 = H, C> — Сь-алкил,фенил; Rg. СНз, Н-: йв = Н,н — или изостроения насыщенная или ненасыщенная фтором, фенил, бенэил, -СН2-СН = СН-СН=

= СН-О, причем положение 1,2 — насыщенное или означает двойную связь, У = кислород, при условии если R2 = Н, то

R>= C>-С4-алкил, обладающих физиологической активностью, что может быть использовано в медицине. Цель — создание новых более эффективных стероидов, Синтез ведут реакцией соответствующей кислоты (без группы Яз) или ее 20(R)- или 20(S)-эпимера с соединением ф-лы ll 2 — CR4Rs-О-C(0)-R6 или ф-лы П1 2-CR4Rg — Π— С{О) — Y йв, где 2 = галоген, с последующим, при необходимости, хроматографическим разделением полученной смеси на отдельные эпимеры.

Новые вещества имеют сродство к глюкостероидному рецептору. 4 табл.

1795972 где X) — водород или фтор, X2 — ВОДОРОД или фтор:

R> — водород или С1 С4-алкил, R2 во дород или С -С -алкил;

Кз — г руп и а С РЛ5ОСОRe, ил и

CR4RgQCORs. где R4 — атом водорода, С>-С5апкил или фенил;

Rs — водород или метил;

Вв — водород или линейная или разветвленная насыщенная или ненасыщенная цепь С1-Сз. С1 — С4-апкил, замещенный фтором, фенил или бензил, или.радикал

1,2-положение является насыщенным или означает двойную связь;

Y — атом кислорода, при условии, если

Rz — водород, то В1 — C> — C4-алкил, обладающих ценными фармакологическими свойствами, Цепь изобретения --получение новых стероидных производных, имеющих преимущества перед известными структурными аналогами;

Цель достигается описываемым способом, заключающимся в том. что соединение общей формулы 11;

ОН

C.О .с"

-----о

О

Х, или его 20R эпимер

-.--о р

cr 2

---о -Р

1 или его 20S эпимер

---о ц с

Г

---О т где В1 Rz.Х1 и Х2 имеют вышеуказанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы 111: 4

<-C-0C0-q

,5 где Р4; Вв и Вв имеют вышеуказанные значения, или общей формулы 111а

R(, z-с-.О-СО- (- R

6

1 5 где В4,В5 Rr и Y имеют вышеуказанные значения, а 2 — атом галогена с последующим при необходимости хроматографическим разделением полученной эпимерной смеси на отдельные эпимеры.

В примерах„при проведении опытов препаративной хроматографии применяют объемную скорость движения потока

2 -1

2,5 мл/см ч . Во всех примерах молекулярные веса определены посредством электронной ударной масс-спектрометрии. Точки плавления измерены на микроскопе с обогреваемым столиком фирмы

"Leitz" Ветцлар, ФРГ. Все анализы HPLC (KPLC = высокоэффективная жидкостная .хроматография) проведены с колонкой

"Watersè Bondarak - С1а" (300 х 3,9 мм внутренний диаметр) при объемной скорости потока 1,0 мл/мин и смесью этанола с водой в соотношении от 50:50 до 60:40 в качестве подвижной фазы. при отсутствии особых указаний, 20 Пример 1. Получение (22RS)-, (22R)- и (22S)-11Р-16а-17а-, 21- тетрагидроксипрегна-1,4-диен-3,20-дион-16 а, 17 а -ацеталей.

Приготовление (22RS-). (22R)- и (22$)16а, 17а- бутилидендиокси-6 а, 9а -дифтор1 1ф 21-дигидроксипрегна-1,4- диен-3,20диона.

А . К суспензии 1,0 г ба,9 а-дифтор-11р, 16а, 17а, 21- тетрагидроксипрегна-.1,4-диен3,20-диона в 500 мл метиленхлорида добавляют0,32 мл свежеперегнанного н-бутаналя и 2 мп 727;-ной хлорной кислоты. Реакционную смесь оставляют стоять при комнатной температуре и при перемешивании на 24 ч.

Реакционную смесь промывают 107ь-ным водным раствором карбоната калия и водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают, Остаток растворяют в этилацетате и осаждают петролейным эфиром. Остается

883 мг (22RS)-16а, 17а-бутилидендиокси40

6а, 9а -дифтор-11Р, 21- дигидроксипрегна1,4-диен-3,20-диона. НР1 С-анализ показывает 99%-ную чистоту и соотношение 16:84 у 22S и 22R эпимеров. Молекулярный вес: 466. (Вычислено 466,5), (22RS) эпимерную смесь хроматографируют на колонке "Стефадекс LH20" (76 х 6,3 cM) с применением гептан: хлороформ: этанол.

20:20:1 в качестве подвижной фазы, Фракции 12315-13425 мл (А) и 13740 — 15690 мл (В) собирают, выпаривают, остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром. Фракция (А) дает 62 мг (22$)-, а фракция В-687 мг (22R) 16а, 17а-бутилиден55 диокси-6а, 9а-дифтор -11P, 21-дигидроксипрегна-1,4-диен-3,20-диона. (22R)-эпимер: моле куля рн ый вес 466 (вычислено 466,5). т.пл. 196-200"С. (22S)-эпимер: молекулярныи вес 466 (вычислено 466,5), т,пп.: 169

172 С.

1795972

В, К раствору 1,0 г ба, 9а-дифтор-11Р, 2 1-дигидрокси-16а,17а-//1-метилэтилиден/бис/окси//и регна-1,4-диен-3,20-диона в 500 мл метиленхлорида добавляют 0,30 мл свежеперегнанного н-бутаналя и 2 мл

72 -ной хлорной кислоты, Реакционную смесь оставляют стоять 24 ч при 33 С перемешивании, экстрагируют водным раствором карбоната калия и водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром, получая 848 мг (22RS)-16а, 17а-бутилидендиокси-ба, 9а.дифтор-11 j3 дигидроксипрегна-1,4-диен3,20-диона, HPLC-анализа показал 93 ную степень чистоты и отношение 12/88 между 22S- и 22R-эпимерами, В!. К суспензии 4,0 г 6а, 9а-дифтор11Р 21-дигидрокси-16а, 17а -//1-метилэтилиден/бис/окси//прегна-1,4-диен-3,20-диона в 100 мл гептана добавляют 1,2 мл свежеперегнанного н-бутаналя и 3;8 мл 72 /ной хлорной кислоты. Реакционную смесь оставляют стоять при комнатной температуре на 5 ч при интенсивном перемешивании, экстрагируют водным карбонатом калия и водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают, Получают 4,0 г (22RS)-16а, 17а -бутилидендиокси-ба, 9а -длфтор-11/3, 21-дигидрокси-прегна-1;4- диен-3,20-диона.

НР С-анализ показал 98,5 -ную чистоту и отношение между 22S и 22R-эпимерами

3/97. После 2-х перекристаллизаций из смеси хлороформа с петролинейным эфиром получено 3.1 г 22R-эпимера, содержащего всего лишь 1,1 22S-эпимера и 1,3 / других загрязняющих примесей, С, Подобным же образом, следуя процедуре. изложенной в примере, при замене 6а, 9а-дифтор-11/3. 16а, 17а, 2 1-тетраоксипрегна- 1,4-диен-3,20-диона

1 1Р, 16а, 17а, 21-тетра гидро к си и регн а-1,4

-диен-3,20- дионом получают 9 а -фтор- и 6 а -фтор-11Р, 16а, 17а, 21-тетрагидроксипрегна-1,4-диен-3,20-дион или соответствующие 16а, 17а -ацетониды нефторированные и фтори рован н ые н есим метр ич н ы е (22 R S)(22R) и (22S)-1 1Р, 16а, 17а, 21-тетраоксипрегна-1,4- диен-3,20-дион 16а. 17а -ацетали из ацетальдегида, пропаналя, бутаналя, изобутаналя, пентаналя, 3-метилбутаналя; 2,2-диметилпропаналя, гексаналя, гептаналя, октаналя, ионаналя и додеканаля.

П ример2.

А. Преднацинолон 16а, 17а-ацетонид (250 мг; 0,6 ммоля) растворяют в 75 мл метиленхлорида. Добавляют н-бутанал (130 мг;

1,8 ммоля) и 70 /-ную хлорную кислоту

55 (0,025 мл}. Раствор пвремешивают при ЗЗ С в течение 15 час. Желтый раствор промывают 2 х 10 мл 10/-ного раствора карбоната калия и 4 х 10 MJI воды, высушивают и выпаривают, Выход; 257 мг (97,7 /,), HPLC показал 91,1 /-ную чистоту, Содержание непрореагировавшего ацетонида составило

7,4 / загрязнений. Соотношение эпимеров

14,6/85,4.

В. Триамцинолон 16а, 17 а -ацетонид (0,5 r, 1,1 ммоль} растворяют в 150 мл метиленхлорида, Добавляют н-бутаналь (260 мг;

3,6 ммоля) и 70 -ную хлорную кислоту(0,22 мл). Смесь перемешивают при 33 С 16 ч, В делительную воронку помещают метиленхлорид и колбу, в которой проводили реакцию, промывают несколько раз 10 мл карбоната калия и метиленхлоридом соответственно. Затем раствор промывают

2 х 10 мл 10/О-ного К2СОз и 4 х 10 мл воды, высушивают и выпаривают. Выход: 438 мг (84,9 / ), Н PLC показала 80,2 / -ную степень чистоты, Соотношение эпимеров 19/81, С, Флюцинолон 16а, 17а -aöåòîíèä (0,5 г; 1 ммоль) растворяют в 150 мл метиленхлорида, Добавляют и-бутаналь (260 Mã; 3,6 ммоля) и 70 /-ную хлорную кислоту (0,22 мл), Смесь перемешивают при 33 С 24 ч.

Метиленхлоридную фазу переносят в делительную воронку. Колбу для проведения реакции промывают несколько раз 15 мл

10 / -ного К2СОз и метиленхлорида, соответственно, РасТВор промывают 2 х 15 мл 10/ного К2СОз и 4 х 15 мл воды, высушивают и выпаривают, Выход; 513 мг (100 0). HPLC показала 97,4 / -ную степень чистоты. Соотношение для эпимера: 8,6/91,4.

Пример 3. Данный пример иллюстрирует способ получения 11Р -гидрокси-16а, 17а -((1-метилэтилиден)бис(окси))- и (20RS)-, (208}- и (20S)-1 1Р -окси-16а, 17а -алкилметилендиоксинандроста -1,4-диен-З-он-17/1карбоновой и -4-ен-3-он-17ф-карбоновой кислот.

Получение ба, 9а -дифтор-1 1/3 -гидрокси-160;, 17а -((1-метилэтилиден)-бис(окси))андроста-1,4-диен-З-он-17/ — к а р бо н овой кислоты, А. K раствору 1,99 г флюоцинолон 16а, 17а-ацетонида в 120 мл метанола добавляют 40 мл 20 /-ного водного раствора карбоната калия. Через этот раствор барбортируют струю воздуха в течение примерно 20 часов при перемешивании при комнатной температуре. Метанол выпаривают и к остатку добавляют 200 мл воды, Раствор экстрагируют метиленхлоридом.

Водную фазу подкисляют разбавленной хлористоводородной кислотой. Образовав1795972

55 шийся осадок собирают фильтрованием и высушивают, что дает 1,34 г ба, 9а-дифтор11/3 -окси-16а, 17а -((1-метилэтилиден)бис(окси)-андроста-1,4-диен- 3-îí-17Р -карбоновой кислоты, точка плавления 264—

268 С, молекулярный вес 438. Степень чистоты, определенная посредством HPLC, составляет 94,0, Водную фазу экстрагируют этилацетатом. После высушивания растворитель выпаривают, что оставляет дополнительно 0,26 г порцию кислоты. Чистота: 93,7 .

В, Йодную кислоту(15,1 г) в 16,5 мл воды добавляют к раствору флюоцинолон 16а, 17а -ацетонида (5.0 r) в 55 мл диоксана, Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 20 ч, нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и выпаривают. Остаток растворяют в 200 мл метиленхлорида и промывают

8 х 100 мл 10 -ного карбоната калия. Водную фазу подкисляют конц.хлористоводородной кислотой и экстрагируют 6 х 100 мл этилацетата. После высушивания растворитель выпаривают. Остаток растворяют в 400 мл этилацетата и осаждают петролейным эфиром, что дает 3,96 г ба, 9а-дифтор-1 1Р

-гидрокси-16а, 17а -((1-метилэтилиден)бис (окси} )андроста-1,4-диен-З-îí-17Р -Kàðáoновой кислоты, Степень чистоты, определенная НР1 С, составила 99,5 .

С. Аналогичным образом, следуя процедуре, изложенной в примере при замене флюоцинолон 16а, 17а-ацетонида 11Р, 16а, 17а, 21-тетрагидроксипрегна-1,4-диен-3,20диона; 6а-фтор-11ф 16а, 17а, 21-тетрагид- . роксипрегна-1,4-диен-3,20-диона и получают триамцинолон 16а, 17а-ацетонид

11/З-гидрокси-16а, 17а -((1- метилиден)бис (окси) ) андроста-1,4-диен-3-он-17Р карбоновые кислоты.

Пример 4. 1 -Этоксикарбонилоксиэтил ба, 9а-дифтор-11/3 - гидрокси-16а, 17а ((1-метилэтилиден)бис(окси))андроста-1,4диен -3-îí-17Р -карбоксилат.

А. 6а, 9а -Дифтор-1 1 -гидрокси-16

25 (72 х 6,3 см), используя хлороформ в качестве подвижной фазы. Собирают фракцию

1515-2250 мл и выпаривают, что дает 480 мг

1 -этоксикарбонилоксиэтил ба, 9а -дифтор1 1/3 -гидрокси-16а, 17а -((1-метилэтилиден) бис(о кси))-а ндроста-1,4- дие н-3-он-17Р карбоксилат. Степень чистоты, определенная посредством HPLC, составляет 98.10, а соотношение эпимеров А/В, 48/52. Точка плавления: 218 — 227 С. (a)p = + 63,2 (с= 0,214; СН2С12). Молекулярный вес 554, 1 -Этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9адифтор-1 1р -гидрокси-16а, 17а -((1-метилэтил иден) бис(окс и))а ндроста-1,4-дие н-3-он17/3 -карбоксилат (480 мг) хроматографируют на колонке "Сефадекс" LH20" (76 х 6,3 см) с применением смеси гептан;хлороформ:этанол, 20:20:1 в качестве подвижной фазы. Собирают фракцию 2325 — 2715 мл, выпаривают и остаток растворяют в метиленхлориде, осаждают петролейным эфиром, что дает 200 мг соединения (А), имеющего степень чистоты 97,3% (определено HPLC анализом). Точка плавления: 246 — 250 С (а)о = 100,5 (с = 0,214; CHzCI2), Молекулярный вес: 554, Фракция 4140 — 5100 мл дала 250 мл соединения (В), степень чистоты 99,0, Точка плавления, 250 — 255 С (a)p = + 28,5 (С= 0,246 СНгС1 ), Молекулярный вес: 554, Сигнал метина и сложноэфирной группы

0,13 млн.дол. смещен вниз поля в Н-ЯМР спектре В по сравнению с А, между тем как остаточные части спектров почти идентичны.

В. 6а, 9а -Дифтор-1 1р-гидрокси-16а, 17а -((1-метилэтилиден} бис(окси))андроста1.4-диен-3-îí-17Р -êàðáoíoâóþ кислоту (200 мг) растворяют в 25 мл диметилформамида.

Добавляют 1-хлорэтил-этил карбонат (100 мг), бикарбонат калия (70 мг) и 18-кроун-6простой эфир. Реакционную смесь перемешивают при 80 С 3 ч., охлаждают, после добавления 150 мл воды экстрагируют метиленхлоридом„высушивают и выпаривают.

Неочищенный продукт очищают, как указано в процедуре А, причем остается 207 мг

1 -этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9а -дифтор-

11/3 -гидрокси-16а, 17а((1-метилэтилиден)бис(окси)) андроста-1,4-диен-3он-17/3 -карбоксилат. Чистота (HPLC) составляет 98,4% и соотношение эпимеров

А/В = 54/46.

С. 6а, 9а -Дифтор-1 1Р гидрокси-16а, 17а ((1-метилэтилиден) бис(окси))андроста1.4-диен-3-он-17у3-карбоновую кислоту (200 мг) и 1,5-диазабицикло (5,4.0)ундецен-5 (140 мг) суспендируют в 25 мл бензола и нагревают до дефлегмации.

1795972

Добавляют раствор 1-бромэтил-этиЛ- бромметилэтилкарбоната в 10 мл метиленкарбоната (175 мг) в 5 мл бензола и смесь хлорида. Смесь перемешивают при 45 С нагревают2,5ч, Послеохлаждениядобавля- 20 ч, разбавляют IO мл метиленхлорида, ют 50 мл метиленхлорида и раствор промы- выделяют и очищают как указано в процевают водой, высушивают и упаривают. 5 дуре "Е". Получают 254 мг1 -этоксикарбониНеочищенный продукт очищают таким же локсиэтил 6а, образом, как в процедуре А. Получают 207 9а-дифтор-11Р-гидрокси-16а, 17а((1-метиMl 1 -этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9Q диф- лэтилиден)бис,(с си))андроста-1,4-диен-3тор-11Р -гидрокси-16а, 17а((метилэтили- îí-17Р -карбоксилата. Чистота (HPLC):97,4. ден)бис(окси))андроста-1,4-диен-3 -îí-17Р 10 Отношение эпимера А/В = 60/40.

-карбоксилата. Чистота (НР1 С) 96,4, Отно- G, 6а, 9а -Дифтор-1 1Р -гидрокси-16а, шение эпимеров А/B = 44/56. 17а ((1-метилэтилиден)бис (окси))андростаО. К раствору 6й, 9а -дифтор-11Р-гидро- 1,4-диен-3-îí-17j3-карбоновую кислоту (200 кси-16а, 17а((1- метилиден)бис(окси))андро- мг), 1-бромэтилэтилкарбонат (135 мг) и триста-1,4-диен-3-oí-17Р -карбоновой кислоты 15 этиламин (275 мг) растворяют в 20 мл диме(100 мг) в 25 мл ацетона добавляют 175 мг -тилформамида. Смесь перемешивают при а-бромдиэтилкарбоната и 45 мг безводного 80 С 3 ч, разбавляют 200 мл метиленхлорикарбоната калия. Смесь нагревают 6 ч. с да, промывают водой, высушивают и выпаобратным холодильником. Охлажденную ривают. "Сырой" продукт очищают,. как реакционнуюсмесь выливают в150мл воды 20 указано в процедуре А. Получают.69 мг 1 и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракт этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9(x -дифторпромывают водой, высушивают над сульфа- 11/ - гидрокси-16а, 17af(1- метилэтитом натрия и выпаривают. Выход 65мгтвер- лиден)бис (окси))андроста-1,4-диен-3- ондого 1 -этоксикарбонилоксиэтил ба, 9a - 17/ -карбоксилат, Чистота (HPLC) 97,8 и дифтор-11Р-гидрокси-16а, 17а((1-метили- 25 отношение эпимеров А/В = 48/52. ден)бис(окси))андроста- 1,4-диен-3-он-178- Пример 5. 1 -Ацетоксиэтил 6а, 9й карбоксилата, Чистота, определенная -дифтор-11Р-гидрокси-16а, 17а-((1-метилиHPLC, составила 97,6 / и отношение зпиме- ден)бис(окси))андроста-1,4-дйен-З-он-17/3 ров А/В = 49/51. карбоксилат.

Е, ба, 9а-Дифтор-11 -гидрокси-16а, 3 6а, 9а-Дифтор-11В-гидрокси-16а, 17а

17а -((1-метилэтилиден) бис(окси))андро- ((1-метилэтилиден)бис (окси))андроста-1,4ста-1,4-диен-З-он-17Д -карбоновую кислоту диен-3-он-17Р-карбоновую кислоту (500 мг) (500 мг) и кислый тетрабутиламмоний суль- и бикарбонат калия (575 мг) растворяют в 40 фат (577 мг) добавляют к 3 мл 1-м гидроокси мл диметилформамида, Добавляют 1-хлорэнатрия. Добавляют также раствор 435 мг 35 тилацетат(1 мл) и реакционную смесь пере1-бромдиэтилкарбоната. в 50 мл метиленх- мешивают при комнатной температуре 40 ч. лорида. Смесь нагревают с обратным холо- Реакционную смесь выливают в 50 мл воды дильником. Происходит разделение на 2 иэкстрагируютметиленхлоридом. Экстракт слоя. Органический слой промывают 2 х 10 промывают водным бикарбонатом натрия и мл воды, высушивают и выпаривают, "сы- 0 водой, высушивают и выпаривают. Остаток рой" продукт очищают хроматографией на хроматографируют на колонке "Сефадекс, колонке "Сефадекс LH-20" (72 х 6,3 см) с LH-20" (72 х 6,3 см), применяя хлороформ применением хлороформа, в качестве по- как подвижную фазу, Фракции 1755-2025 и движной фазы. Собирают фракцию 1545- 2026-2325 мл собирают и выпаривают.

1950 мл, выпаривают и остаток осаждают из 45 Твердый продукт от фракции 1755 — 2025 смеси метиленхлорида и петролейным мл дополнительно очищают хроматограэфиром. Остается 341 мг 1 -этоксикарбо- фией на колонке "Сефадекс LH-20" (76 х 6,3 нилоксиэтил ба, 9а-дифтор-11/ -гидро- см — внутренний диаметр), используя смесь кси-16а, 17а-((1-метилэтилиден)- бис(окси)) гептан-хлороформ-этанол, 20:20:1 в качестандроста -1,4-диен -3- он-1 7/3-карбоксилат. 50 ве подвижной фазы. Фракцию 2505-2880 мл

Степень чистоты, определенная посред- собирают и выпаривают. Остаток растворяcTBoM HPLC: 99,2 . Отношение эпиме- ют в метиленхлориде и осаждают петролейров А/В = 56/44. ным эфиром, причем остается 167 мг

F. 6a, 9а-Дифтор-11/З-гидрокси-16а, твердого продукта (А). Чистота, определен17а.-f(1-метилиден)бис (окси))андроста-1,4- 55 ная НР С = 99,1 . Точка плавления 238— диен-3-он-17Р-карбоновую кислоту (200 мг) 259 С (а )o = + 94 (С = 0,192; СН С) ). и трикаприлметиламмоний хлорид (200 мг) Молекулярный вес = 254. добавляют к 5 мл насыщенного водного би- Твердый продукт из указанной выше карбоната натрия. Добавляюг 100 мг 1- фракции 2026-2325 мл дополнительно очи1795972 щают хроматографией так же, как указано выше, Фракцию 5100-5670 мл собирают и выпаривают, Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают посредством петролейного эфира, что дает 165 мг твердого продукта "В". Чистота, определенная путем

HPLC, составляет 99,4 ь. Т .чка плавления

261 — 265 С (Q)D =+ 34 (С -= 0,262; СН2С!2).

Молекулярный вес = 524, Н-ЯМР спектры А и В являются почти тождественными, за. исключением того, что метиновый квартет от сложноэфирной группы, который сдвинут на 0,16 млн,дол, в нижнюю область соединения В в сравнении с соединением А. Характеристики m/е

А и В в масс-спектре являются идентичными, исключая интенсивности. Такие спектроскопические характеристики А и В показывают, что они являются эпимерами вследствие хирального центра в сложноэфирной группе.

Пример 6-88. Вещества, приведенные в таблицах 1-3. приготовлены, выделены и очищены по способу, аналогичному описанному в примерах 4 и 5.

Примечание к таблице 1.

1) На колонке "Сефадекс 1 Н-20" (76 х 6,3 см); применяя хлороформ- гептан-этанол (20;20. 1), в качестве подвижной фазы;

2) На колонке "Сефадекс LH-20" (87,5 х х 2,5 см), применяя хлороформ-гептан-этанол (20:20:1) в качестве подвижной фазы.

3) На колонке "Сефадекс LH-20" (85 х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

4) На колонке "Сефадекс 1 Н-20" (72,6 х х 3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

5) На колонке "Сефадекс LH-20" (71,5 х х 6,3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы, Примечание к таблице 2.

1) На колонке " Сефадекс ЕН-20" (72 х 6,3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

2) На колонке "Сефадекс LH-20" (83 х 2,5 см), применяя хлороформ в качеСтве подвижной фазы, Примечание к таблице 3, 1) На колонке "Сефадекс LH-20" (76 х 6,3 см), применяя гептан-хлороформ-этанол (20:10:1) в качестве подвижной фазы.

2) На колонке "Сефадекс 0+20" (87,5 х х 2,5 см), применяя гептан- хлороформ-этанол (20;10:1) в качестве подвижной фазы.

3) На колонке "Сефадекс LH-20" (72 х 6,3 см), применяя хлороформ в качестве подвйжной фазы, 50

55 (вес/объем) суспензии декстрана 170 в 20 ммоль Трис, рН 7,4 1 ммоль ЭДТА и 20 ммоль NaMo04 10 мин при 0 С. После этого центрифугируют при 500 х Ig 10 мин, и 230 мкл всплывшего слоя сосчитывают в 10 мл

Insta-Gel в сцинтилляционном спектрофотометре "Packard". Всплывшие слои инкубируют с а) с одним (Н) дексаметазоном, б) (Н) дексаметазоном вместе с 1000-кратным з избытком немеченого дексаметазона и в) 4) На колонке "Сефадекс LH-20" (80 х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы, 5) На колонке "Сефадекс LH-20" (81,5 х

5 х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

Фармокология.

Сродство новых сложных эфиров андростан-17Р -карбоновой кислоты по отноше10 нию к рецептору глюкокортикоида.

Все стероиды, соответствующие насто- ящему изобретению, являются физиологически активными соединениями, Сродство новых сложных эфиров андростан-17Р -кар15 боновой кислоты к глюкокортикоидному рецептору использовано в качестве модели для определения способности к противовоспалительному действию. Их средства к рецептору сравнивают с будезони20 дом//22В/S/-16а, 17а -бутилидендиокси1 1Р, 21-диоксипрегна-1,4-див н-3,20-дион/, гл юкокортикоидом повышенной активности, с благоприятным соотношением между локальным действием, и действием, относя25 щимся к организму в целом (Fhalen and

Brattsand. Arzneim. — Forsch, 29, 1687 — 90 (1979).

Во время всех исследований используют крыс — самцов "Spraqve-Dawley" в возра30 сте 1-2 месяцев. Зобную железу удаляют и помещают в физиологический раствор поваренной соли, охлаждаемый льдом, Ткань гомогенизируют в гомогенизаторе "Potter

EIvehjem" в 10 мл буферного раствора, 35 содержащего 20 ммоль.Трис, рН 7,4 107, (вес-объем) глицерина, 1 ммоль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), 20 ммоль NaMo04, 10 ммоль меркаптоэтанола.

Гомогенат концентрируют 15 мин. при

40 20000х ig, Долислоя, всплывшего при20000 х Ig (230 мкл), инкубируют около 24 ч при 0 С с 100 мкл фенилметилсульфонилфторида (ингибитор эстеразы, конечная концентрация 0,5 ммоль), 20 мкл немеченного "сопер45 ника" и 50 мкл Н-меченого дексаметазона (конечная концентрация 3 нмоль). Связанный и свободный стероиды разделяют инкубированием смеси с 60 мкл 2,57, (вес/объем) активированного угля и 0,25%

1795972

Формула изобретения

Способ получения сложных эфиров

16,17-ацетальзамещенной андростан-17Ркарбоновой кислоты общей формулы 20

Я о, з

c*o

----о

- ся

ОЯ

I с=о о э 1

-о с

Ъц

Ф г или его 20R эпимер 2 с.

-- -0 "R

1 и его 20S эпимер

40 (H) дексаметазоном вместе с 0,03-300кратным избытком "соперника", Неспецифическую связь определяют, когда

1000-кратный избыток немеченого дексаметазона добавляют к(Н)-меченому дексаз метазону. Радиоактивность, связанная с рецептором в присутствии "соперника", разделенная на радиоактивность, связанную с рецептором в отсутствии "соперника" и умноженная на 100, дает выраженную в ф специфическую связь для меченого дексаметаэона. Для каждой ко. центрации "соо

Хг где Х1 и Хг — водород или фтор;

R> —. водород или Ci-C4-алкил;

Rz — водород или С i — С5-алкил;

Вз — груп и а С R

CRqRsOCOYRe, где R4 — водород, С1-Св-алкил или фенил; Вв — водород или метил; Вв— водород или линейная или разветвленная насыщенная или ненасыщенная цепь C<—

Сз, С>-С4-алкил, замещенный фтором, фенил или бензил, или радикал

1,2-положение является насыщенным или означает двойную связь.

Y — кислород, при условии, если Rz— водород. то В1 — С1-С4-алкил. от л и ч а ю щи и с я тем, что соединение общей формулы перника" специфически связанная радиоактивность, выраженная в, наносится на график по отношению к логарифму концентрации "соперника". Кривые сравнивают

5 при 50o ном уровне специфической связи, и относят к будезониду, относительное сродство связуемости (RBA), которого принимают за 1.

Табл.4 суммирует относительное срод10 ство связуемости (RBA) по отношению к глюкостероидному рецептору для. некоторых исследованных соединений, -- — о я

С.

---о =ц

30. г 1 где В1, Вг, Х1 и Х2 имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

",ъ

z-с-осо-н ! Si 5 где Я4-Rg имеют укаэанные значения, или общей формулы

Р», е-сто-со-у-Rg

k S где R4-йв u Y имеют укаэанные значения;

45 Z — галоген, с последующим при необходимости хроматографическим разделением полученной эпимерной смеси на отдельные эпимеры, 1795972

Таблмца1

I)4 0

ОСНВ

О СЛ(з

--о

Нб

840

1 а

СООСОС)(0

С)(80 о..сн, -- -о -сн з а,о соосос((, Ь 0

-о снэ

Х2

Эпнмер 8 к

»н !э нолемулярмкд

c 0,2 е еес

СН Cl к к ем ч. медлено

Эпммер Т.пл., С

Rs

Сахрэмяемк1 обзен (нл) Ор- Х

1 мер к

Еемнл 242 (еес)

221 (dec) Н Н фаннл сн(сн ) сй(сн )

0et5ul

° 1) Нэ Сефадексе LH-20 колонка (76 х 8,3 см) подемм.фаза хлороформ-гептан-зтэнол (20:20:1).

2) Нэ Сефадексе LH 20 колонка (87,5 х 2,5 см) подэмм.фаза хлороформ кентам-ззенал (20:20:1).

3) На Сефадексе LH-20 колами (85 к 25 см) подеакк.фаза — хлороформ.

4) На Сефадексе LH-20 колонка (72 к В 3 см) подэмх.фээа - хлороформ.

5) Нэ Сефедексе СН-20 колонка (71.5.x 0.3 си) поленц,фаза - хлороформ.

ТаОлмца2

1) На Сефэдексе LH-20 колом ко (72 х 5.3 см) одмак.фазе — хлороформ.

2) На Сефадексе LH-20 колонка (83 х 2.5 см) подемм.фаза — хлороформ, 7

Ь

11

12

13

14

16

17

18

19

21 22

23

24

26

27

28

29 . 30

31

32

33

34

ЗЬ

37

38 н н

Р . H

Р. Н

Н

t Н

F Р

F Р

P Р

Р

Р H

Р H

Н Р

Р

F Р

Р Р

Р Р

Р. Р.

Р . Г

t Г

t Р

Р F

t . Р

P Г

Р Р

t t

F Р

Г Г

Р Р

F t фаннл сн, Сн,. сн, сн сн сн сн, сн, сн

Сйз сн

СИ, Снз

Сна сн, снз. сн сн сн

CH сн сн сн сн, си сн сн

Н

H н.

H

Н н и

Н сн„

И

Н

Н н

Н

И

Н

И

Н

Н

Н"

Н

Н

Н

Н

Н

H н сн сн А сй, СН, А ,СН . В сн, А сн в с(сн») А с(си) . в . Ееммл Л

Оеннп 8 сн, О«снз)з А ос(си ) в

ОСН(СНк)к А осн(сн,), в осн, осн в (Сн ) сн а к з

ОСН(снз)к .. А+О . осн(сн,), А

ОСН(СН ) В осн(сн,сн,), . А

ОС»1(СНксйк)4 В оснрй(снуй,), А оснксн(СИ из)е в ос(сн,) мв

ОС (Сна)з А

ОС(СИэ), В осн,с(сн,) мв

ОСНкС(Сна)з А осн,с (сн,) 0

ОСНэСИ, 249

238

262- 70

268-77

224-30

259-67

130-42

184-87

>300

250-53

230-35

235-42

225-33

224-31

227-30

205-28

210-25

242»47

226-28

183-97

217-21

207 10

170-78

177 79

190"92

208-ЗЬ

248-56

22Ь-28

+79

+89

+102

+40

+73

+75

+87

+50

+9Ь

+48

+61

+98

+30

+109

+58

+102

+31

+10Ь

+28

+59

+95

+31

+95

+30

+89

+30

+05

+100

+27

+60

+98

+28

550,7

550,7

534,Ь

534,ь

565,0

566,6

5ЬЬ,6

566,6

500>б

500,6

538,6

504,7

564,7

550,6

550,6

54о,6

540 ° 6

5ьв,б

568,Ь

568,6

568,6

568,6

596,7

596,7

610,7

610,7

582,6

582,6

502,6

596,7

596 ° 7

59Ь,7

508,6

534

534

5ЬВ

568

566

566

58fi

566

5Ь4

564

566

568

568

568

568

596

596

582

582

582

596

596

596

568

1065-1690 "

1891-2175

2325-25ЬО

ЗIЬ5-3555

2040"2355

2895 3285

2190-1505 к)

3525 "3990

2825-2025

4350-4075

1965-2220

235"200з»

525-630з»

1530"1770

2295-2бсО

590-690к»

395-43аз»

410495з»

690-900з» ! 365-1566

400-475э»

625 780*»

1785 2085

3150-3600

1725-1980

3120-3460

1290-1920

255-310з)

650-ВООз»

1605-1995

1845-2130

3270-3750 »

405-460з»

1795972

1 I

1 1

Я 1

z c

Q l

K l

X 1

e x

1 а Е I х, О !О

l oo

1 л

Ъ о О О О

1 l о о

Ch сЧ

М

ОС!

CO

СЧ

С1 СЧ

СЧ сЧ О сО

1.! О и! С С!

О СО О О м -Ф Ф а а СС! Л

С»! О0 о со

СГ\ ф О О ьО л л л сЧ О СО

СС1 О сс

1 О О л л

С»1 СО о со

-Ф! л л л О О

»3 и

О 1 lA! л л

О О0 м сс! ф I

41 сЧ I мф, ЮО 1! 1 и и> и 1 о о о. o o o o

СО Cn N < O 1= М

Л О l О О

+ + + + + + + 1 1

СЭ о л

СЧ в о л

Ch l

СО М т»

С! О л Ч) сО

1 I 1

М СО О М О

СО

СО СГ! б 1 а о а м О 00

О ССЪ

1 I

СЧ 4

О кГ!

СЧ

z а.8. а о

Э 1

E I

S 1

1 I

I 1 I

6 сч

Ц, ц о о о о

G.

S со

I ж

S ф

6 "6

Ъ. Д».

С о г о о

LA л

СЧ. х м

CO л .О х

СЧ

1»»

I

Ot 1

1 — 3

6 6

° Ъ " "Ц

Ц о

С о

И

УО

1 S а а е

l C

Л О л

1 б

СЧ М

»С»С

)S

z а

К с о з Ф

У В

9 с

1 1

I l

I о !

1 Х !

I C0 1

l tf 1

1 з I

I fD I

1 1

) ° I

I X I

1 Б l

1 ф 1! ч о о о

СО

СГ! СГ!

1 СО б

\ л

О1 сч о о

1 о о о СЧ СЧ м л О т ли л и

СЧ

I 1 о о

СЧ б О

C)

СЧ

Б о

У

С.Э

Ю сЧ

Б о

У

С.Э

1795972

Т а б л и ц а 3 ((ф

COt)k04R8

О гс(5$

--ю

С)(3

ИЬО

t в

СООСОСЦ, (((RS ---О снэ

--0 СНЭ

Й,Оп

0 (00C0Ct(Ь!

)Э И С>(3

Эпинер А

Эпинер В

Rg/YNв Элинор Т.пл, С

92 ! к !л (с0,2 >

СИ,С)а) R4

Xtt Ri

Прн не р

1!элеиуллрныд вес охранке>в>д

Ьмм (нл) ° ичисп (наиде

1650-!995 »

1305-1560»

1950-2100 >

2145-2370

1905-217S>

3300-3720

430-490»

630-715>т

2100-2400

2850"3225

2100-2400

2760-3075

1$00-1665

IЬ20-1785

250-29S"I

245-290»

325-370»

2235-2550

+67

Н . К ° (Н

192-97

Ы Н

502

196-200 .81

49

$!

Н Н (нэ и (a)g g

502

+694

+63 (alg)g cN в

Н (СН,),(йэ (CNg)i%7

261-61

255-59

226-31

232-38

S48

548

548

548

582

582

+101

+35

Я

Ю

atg

al си(сн,), сн(сн,), фенил

Н (alg)gala (!Ну) е(йэ ((Нэ)в СН, (CNg)g CNg (CN g) аСК g

5 н (CN g)g CN

Н (си,),сиэ (Юа)лснg (CNg)аCNg н

176-88 +104

Н н

К

Н н

2 !4-19 . 133-35

210"1 2

235-40

151-82 .

140-42

160-65

171-7Ý ! 61-64

203-11

196-209

138-52

+46

*1!0 л44

+75

+75

S6

57

58

59

Р

1>

Р

Н (сна)всиэ

Н аУ к

+77

+69

546

546

61

62 и

+66

+72

564

Р Н

564

+99

+70

+102.

+ЭЗ

+110

+Эб

+92

+27

+107 а39

+103

+31

+95

+t8

+!15

+34

+9$

+26

554

Н э а в

568

532

А+В

300-3 70 > ((Н т)в а)3 (at в)в сиа (cN ),а!э

67

68

69

Н

Л+В .158-91

400-460»

405-41$»

58S-670»

532

5S0

P И

P . Н!

9698

212-14

Н (СК,), СН, (си ) си н

578

578

564

564

518 154-57

345-400»

Н (СН в)в Сйэ (cN ) сн (etta) g си, (а! ) си

71

161-68

485-565»

355-425>!

535-635»

485-570»

255-310

380-430»

540-ЬЭО >

385-4S5»

5Ь5-695»

ЭОО-330 . 365-39$

3720-4 !55

290-340

341-39S

gJ

2 !90-3900

2190-2355

3630-3900

И

72

221-24

212-15

168-71

IN-19

220-22

227-31

И

7 В с(сне), Н

518

564

564

564

564

568

568

$á8

77 т р,И

Н с(си )

С(СИэ)э

18

229-32

24Ь-51

167-70

79

P

Ы (at,),at, (at,),сн, И

Р

И (CN э)к at2 (Снв)койз (Скв)а а!э (atg)g Сйэ (at,), сн, (Сйэ)аatg (CNg) gCNэ!

88-9О

118-96

217-21

211-15

+68>

+105

+32

+67

+96

+37

А+в,83

568

84

568

Н

А+В 198-210

582

582

$82

$82

86

232-31

22S-Э2

385-440> (20:20:1).

1) эта СвфадЕКСЕ LH 20 КОЛОНКЕ (76 К 8,3 СМ) ПОдаИж.фааа твлтаи-КЛОрюфарн-Э кло рм-этенол . (20:20:1).

2) На Сефадексе LH-20 колонке (87.8 х 2.5 см) подвиж.фаза тептан-клороформ-э о рм-этенол

3) H* Сефэдексе LH.20 колонка Р2 к 8.3 см) подвиж.фаза хлороформ.

Л) На Сефадексе LH-20 колонка (80 к 2.5 см) подвиж.фаэа клороформ.

5) t>a Сефадексе LH-20 колонка (81.5 к 2.5 см> подвиж.фаэа клорпформ. э (Н

СК, а!э

СН, Сйл

СНЭ

atJ

Сйэ

СН (Н

Ф тй

CNg

СН ск !. Н снэ сй, a!a а1 сн

СК н с(а! ) н с(си ) н с(си ) н с(сн ) н си н сй н сна к ala N al

К СК н а!в

СН» к ос(сн > н ос(снэ) н ос(сн ) н ос(сн ) н осн сн к осн(а1,), и оа1„cN, Оа>ка!Э

Н ОСК Сй

ОСИасиэ э э

К 0C(CNa), Н 0CN(CN,), н осн(си ) к ос(сн ) н ос(сн ), К ОСКВСИ> к оси (н

OCNga!ó

Оа! ск н о(н,сн, Н 0(Н СН н оси,а1, И ОСИ эalэ к оси сн

К ОСИ((Н ) к оа1(сн,), и ОСИ(СК )

СИ oat at, 502,6

502, 6

548, 7

548, 7

520,6

520,6

520,6

$20,6

548,7

548>7

S82 ° 7

582 ° 7

546,7

546,7

564,7

564,7

554,6

568,6

SÝ2,6

532,6

$$0, 1

5$0> 7

S78>1

578,?

564,7

564 ° 7

578,7

578,7

564,7

364 ° 7

564, 1

564 ° 7

568 ° 6

568,6

568,6

568>6

568,6

582,6

582 ° 6

582 ° 6

SÂ2,5

25

1795972

Таблица 4

Составитель И.Федосеева

Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор Л.Филь

Редактор Т.Иванова

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 441 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобре;ениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5