Способ определения активности комплемента по альтернативному пути
Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования системы .комплемента. Цель изобретения - повышение точности способа. У обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, вносят ее в объеме 0,1 мл в термостатированную кювету и добавляют, эритроциты кролика. После завершения лигнина эритроцитов добавляют вновь эритроциты кролика и определяют активность комплемента по альтернативному пути по скорости их лизиса. По сравнению с прототипом способ позволяет определить активность комплемента по альтернативному пути в присутствии двухвалентных металлов , в том числе и при отравлении ими.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (s>)s G 01 N 33/53
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
B ЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4816876/14 (22) 23.04.91 (46) 28.02.93. Бюл. ¹ 8 (71) 1-й Ленинградский медицинский инсти-„ тут им;акад.И.П, Павлова (72) И,Г. Щербак. Л.B. Галебская и Е.В. Рюмина (56) Халяпин Б.Д. и Прокопьев А,А. Иммунология, 1986, 3, 66-69. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА ПО АЛЬТЕРНАТИВНОМУ ПУТИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования системы
Способ относится к медицине, а именно к медико-биологическим способам исследования комплемента человека при различных заболеваниях, а также.для изучения влияния на него каких-либо факторов, Целью изобретения является повышение точности способа при определении АПК в сыворотках крови при отравлениях двухвалентными катионами.
Способ осуществляют следующим образом. B термостатированную при 370С кювету спектрофотометра помещают 0,1 мл сыворотки крови, мединаловый буфер (рН
7,4), содержащий 5 мМ и стандартное количество эритроцитов кролика (3К) (1,5 10
Кл/мл). Конечный обьем .инкубационной смеси 0,8 мл. Регистрируют лизис по убыли оптической плотности при 800 нм по методу
Халяпина и Прокопьева. После завершения лизиса эритроцитов добавляют следующую равную порцию эритроцитов и вновь опре„„. Ж„„1798695 А1
2 комплемента. Цель изобретения — повышение точности способа. Y обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, вносят ее в объеме 0,1 мл в термостатированную кювету и добавляют, эритроциты кролика, После завершения лигнина эритроцитов добавляют вновь эритроциты кролика и определяют активность комплемента по альтернативному пути по скорости их лизиса. По сравнению с прототипом способ позволяет определить активность комплемента по альтернативному пути в присутствии двухвалентных металлов, в том числе и при отравлении ими. деляют скорость лизиса. Активность АПК рассчитывают по формуле:
Активность АПК = 0,3x0,6, где х — ско1вость лизиса второй порции 3К.
Пример 1. В кювету помещают 0,1 мл донорской сыворотки, до 5 мМ концентрации в мединаловом буфере, 0,1мл стандартйой взвеси эритроцитов кролика.
Конечный объем инкубационной смеси составляет 0,8 мл. После завершения лизиса первой порции эритроцитов, добавляют вторую равную порцию и вновь определяют скорость лизиса, которая составила 16,2.
Значение активности АПК составило:
0,3х16,2 + 0,6 = 5,46. B этой же сыворотке определили активность АПК по прототипу, Значение активности АПК, определенное по прототипу. равно 5,5. В табл,1 приведены (средние из 15 опытов) данные определения активности АПК по прототипу и по изобретению, 1798695
Т а б л и ц а 1
Таблица 2
= 5"=
10 ЛЕК
0 й2,1
Составитель В.Литовченко
Техред M,Ìîðãåíòàë . Корректор Н.Слободяник
Редактор
Заказ 768 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Данные табл,1 показывают отсутствие существенных различий между этими величинами. По литературным данным (прототип) средняя активность АПК доноров равна (6,2 +. 0,2)10 ЛЕК/мл, т.е. по значению близка нашим данным, Пример 2, Регистрировали лизис второй порции эритроцитов кролика сывороткой крови II при отравлении солью двухвалентного ме галла Со. По формуле рассчитывали активность АПК. Значение активности АПК соста вило 2,2. Активность
АПК для этой же сыворотки, определенная по прототипу равна 6,0. B табл,2 представлены средние (n = 7) значения активности
АПК при отравлении солями двухвалентных металлов (NI и Со),определенные по прототипу и по изобретению, По данным табл,2 видно, что в присутствии ЭГТА (и рототип) не обнаруживается эффекта двухвалентных катионов на АПК. По изобретению выявлено значительное снижение АПК, что согласуется с клиническими данными о снижении иммунореактивности у пациентов при отравлениях такого рода (Ю.А.Ершов, Т.В.Плетенева, Механизмы токсического действия неорганических соединений, 1989 г„ст.131-137), Использование способа позволяет — удешевить исследование за счет иск, лючения применения ингибитора классического пути активации комплемента— импортного реактива ЭГТА, — повысить точность определения активности АПК при отравлении двухвалентными катионами.
Ф о р м ул а и з о б р е те н и я
Способ определения активности комп15 лемента по альтернативному пути, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее с эритроцитами кролика с определением активности комплемента по скорости лизиса эритроцитов, о т л и ч а ю20 шийся тем, что, с целью повышения точности способа в крови при отравлениях двухвалентными катионами, перед инкубацией сыворотку крови дополнительно инкубируют с эритроцитами кролика до их полного лизиса.
