Способ получения препарата фермента глюкозооксидазы
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
I8I59l
Союз Советских
Социалистических
Республик .
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 12,Х.1964 (№ 924440/28-13) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 211Ч.1966. Бюллетень ¹ 10
Дата опубликования описания 14Л П.1966
Кл. 6а, 22/04
МПК С 12k
УД К 663.11:576.8.093.33:
:577.154.22(088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Мииистрсв
СССР
Авторы изобретения В. А. Витковская, В. А
С. А. Журавель, Э. С.
А. У. Мамуня, Н, П. Баидаков, Е. А. Никольская и
Украинский научно-исследовательский институт и ликеро-водочной промышленности
P. Г. Дегттфь- ., l спиртовой,,„... --- v
" ь .;,:, 4
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ФЕРМЕНТА
ГЛ ЮКОЗОО КСИДАЗЫ
В связи с организацией промышленного производства фермента глюкозооксидазы вопрос разработки эффективного способа получения препарата этого фермента приобретает актуальное значение.
В лабораторных условиях препараты фермента глюкозооксидазы получают поверхностным способом выращивания особого штамма пенициллина Реп. vitale. Однако промышленное производство глюкозооксидазы поверхностным способом требует больших площадей, громоздкого оборудования, трудно поддается механизации.
Способ получения препарата фермента глюкозооксидазы путем глубинного выращивания ее продуцентов на сахаросодержащей . питательной среде так ке известен. Причем при работе по известному способу добавляют стимуляторы роста и осуществляют аэрацию, а затем, получив культуральную жидкость, выделяют из нее препарат ферментов одним из известных приемов.
Предлагаемый способ получения препарата фермента глюкозооксидазы путем глубинного выращивания предупреждает инактивацию ферментов. Следовательно, такой способ эффективнее известного глубинного и обеспечивает выход фермента, близкий к выходу при поверхностном способе, суть которого заключается в том, что аэрацию при выращивании фермента ведут только в начальной стадии роцесса. Причем аэрировать следует преимущественно в течение 12 час при общей продолжительности процесса около 60 — 72 час. Количество воздуха целесообразно постепенно сокращать с 0,75 объема в минуту на 1 объем среды в первые часы до 0,25 объема в минуту в последующие часы процесса аэрации.
Посевной материал выращивают в посевных аппаратах на среде, в которую в качестве стимуляторов роста вводят биологически активные вещества, например кукурузный экстракт, в количестве от 0,5 до 0,75% (в пересчете на сухое вещество). В этом случае становится возможным уменьшить количество сахара в среде на 25% . Затем посевной материал передают в ферментаторы. Процесс ферментации ведут при аэрировании в течение первых
12 час, количество поступающего при этом воздуха постепенно сокращают с 0,75 объема его (в минуту) на 1 объем среды в первые часы до 0,25 объема воздуха на 1 объем среды в последующие часы аэрирования. Дальнейшую ферментацию ведут без доступа воздуха при механическом перемешивании и заканчивают спустя 60 — 72 час с момента внесения в ферментатор посевного материала.
Из культуральной жидкости, полученной по предлагаемому способу, может быть выделено
30 из 1 л среды до 80 мг-препарата фермента с
181591
Составитель М. И. Андреева
Редактор В. Ф. Чулкова Техред Л. К. Ткаченко Корректоры. С. Н. СоколоВа и В. В. Крылова
Заказ 1626/2 Тираж 676 Формат бум. 60X90 /8 Объем 0,13 изд. л. Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 содержанием белка 95 — 100 /о и активностью
»о Qо, 220000 — 250 000, что соответствует содержанию в 1 г препарата 185 000 — 195 000 ед. фермента.
Выделяют ферменты из культуральной жидкости и очищают одним из известных способов.
Предмет изобретения
1. Способ получения препарата фермента глюкозооксидазы путем глубинного выращивания ее продуцентов на сахаросодержащей питательной среде с добавлением стимуляторов роста и осуществлением аэрации и последующего выделения препарата из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью предупреждения инактивации фермента, аэрацию ведут только в начальной стадии процесса, а окончание процесса выращивания проводят в анаэробных условиях.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что аэрацию проводят преимущественно в течение
12 час при общей продолжительности процесса около 60 — 72 час.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество воздуха, подаваемого в процессе аэрации, постепенно сокращают с 0,75 объемов в минуту на 1 объем среды в первые часы до 0,25 объемов в минуту в последующие ча15 сы процесса аэрирования.
