Способ отсроченного определения гликемии

 

Использование: относится к медицине, а именно к судебной медицине. Цель изобретения - повышение точности. Сущность изобретения: в сухом пятне крови трупа определяют содержание гликированного гемоглобина и при увеличении его содержания в 2-3 раза по сравнению с нормой определяют гликемию. Положительный эффект: изобретение позволит определить уровень гликемии за истекшие 3-4 месяца жизни..

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si)s 6 01 N 33/46

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

О

Cd

О (л) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4890527/14 (22) 14,11,90 (46) 07.04.93. Бюл. М 13 (71) Совместное советско-германское предприятие "Константа" (72) Н. Н. Качина, Г, Г. Ковалева, В. Н, Крюков и В. Е. Формазюк (56) Авторское свидетельство СССР

N- 1581023, кл, G 01 N 33/46, 1988. (54) СПОСОБ ОТСРОЧЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКЕМИИ

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине, Цель изобретения — повышение точности. Пример 1, Женщина 60 лет. смерть наступила от кровоизлияния в желудочки мозга в результате закрытой черепно-мозговой травмы. Кровь берут шприцам из бедренной вены и исследуют через 1-1,5 часа после изъятия следующим образом, Сначала определяют концентрацию общего гемоглобина методом, применяемым в клини ко-диагностической лаборатории и переведенную в моль/л. Для этого в/йл трансформирующего раствора. состоящего из ацетоциангидрина -0,5 мл, калия желеэистосинеродистого — 200 мг, натрия двууглекислого — 1 г и дистиллированной воды до

1 л добавляют 10 мкл цельной жидкой трупной крови, дают постоять 20 мин и затем колориметрируют на спектрофотометре

СФ-26 против холостой. пробы при длине волны 540 нм. Зкстинкция общего гемоглобина равна 0,350, затем по калибровочному графику находим концентрацию общего гемоглобина, она равна 13,1 г %, что соответствует при переводе в моль/л — 2,03 10 з, „„ .Д „„1807393 А1 (57) Использование: относится к медицине, а именно к судебной медицине. Цель изобретения — повышение точности. Сущность изобретения: в сухом пятне крови трупа определяют содержание гликированного гемоглобина и при увеличении его содержания в 2 — 3 раза по сравнению с нормой определяют гликемию. Положительный эффект, изобретение позволит определить уровень гликемии за истекшие 3 — 4 месяца жизни.

Затем определяют концентрацию гликированного гемоглобина, Для этого в пробирку наливают 0,1 мл цельной трупной крови, добавляют 0,9 мл дистиллированной воды и

0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кис- . лоты, Пробирку закрывают резиновой проб- . кой. в которую вставлена иньекционная игла. Пробу перемешивают и ставят в штатив-, помещенный в кипящую водяную баню, Через 10 мин иглы вынимают. Пробу нагревают еще 50 мин (общее время нагрева 60 мин}. Затем пробу вынимают и после охлаждения к ней добавляют 0,5 мл 40%-ного раствора трихлорукс.усной кислоты (для осаждения белков), После перемешивания пробу центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин, Затем в обычную пробирку аккуратно отбирают 1 мл надосадочной жидкости и добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и 1 мл 0,02 м раствора тиобарбитуровой кислоты, Пробу перемешивают, пробирку закрывают стеклянной пробкой

"слезкой" и инкубируют 6 мин на кипящей водяной бане. После инкубации измеряют величину экстинкции окрашенного комп-. лекса при длине волны 432,5 нм. Окраска стабильна в течение 1 ч. Контрольная проба

1807393 фику и переведенная в моль/л равна 1,57 .

Для определения концентрации гликиро-. ванного гемоглобина в пробирку набирают

0,2 мл раствора крови, добавляют 0,8 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кислоты. Далее исследование. идет по выше указанной методике, Содержание гликированного гемоглобина в крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина. Величина гликированного гемоглобина по калибровочному графику соответствует концентрации 2,52 10 моль/л, Далее подставляют в формулу, параллельно определяют количественное содержание глюкозы в растворе крови глюкозооксидазным методом, для чего в центрифужную rtpoбирку наливаем 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 мл 0,3 н раствора едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 100 мкл раствора крови.

Результат смотрят по калибровочному графику в мг, В данном случае содержание глюкозы в сухом пятне крови равно — 0,0 мг%

Пример 2, Мужчина 60 лет, смерть наступила OT интоксикации в результате рака желудка с прорастанием в поджелудочную железу, Кровь взята шприцом иэ бедренной вены. Исследования проводят соответственно вышеописанным методикам; сначала в жидкой цельной крови, затем через трое суток в сухом пятне крови. Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в жидкой цельной крови, соответственно, было равно. 4,23 и 0,00 мг%.

Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне крови, спустя трое суток после высушивания, соответственно, было равно: 4 3 и 0,00 мг .

Пример 3, Мужчина 41 года, смерть наступила в результате разрушения головного мозга при огнестрельном ранении в голову. Кровь взята шприцом из бедренной вены, Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в жидкой цельной крови, соответственно, было равно: 4,5% и 0,00 мг%.

Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне крови, спустя сутки после высушивэния, соответственно, было равно: 4,59% и 0,00 мг%, Использование изобретения позволит определить уровень глюкозы эа истекшие

3 — 4 месяца жизни.

50 м лением 20 мкл раствора крови, хо

Концентрация его по калибровочному грасодержит 1 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной соляной кислоты 1 мл

0,02 м раствора тиобарбитуровой кислоты, контроль нагревают 6 минут на кипящей водяной бане, 5

Содержание гликированного гемоглобина в крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина, Определение концентрации гликированного гемоглобина проводят по калибровочному графику, построенному по стандартным растворам кетоаминного соединения — фруктозоглицина, величина экстинкции которого соответствует величине зкстинкции гликированного гемоглобина, 15

Величина экстинкции гликированного гемоглобина равна 0,085, что по калибровочному графику соответствует концентрации 3,25 10 моль/л. Далее подставляем в формулу; 20

Нд с(% = 2 СНЬ 100%

100 / 4.0

3,25 10

2,203 10 2 25

Параллельно определяют количественное содержание глюкозы в крови глюкозо-. оксидазным методом, для чего в центрифужную пробирку наливают 0,2 мл

5 -ного раствора сернокислого цинка, 0,2 jp мл 0,3 н раствора едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 50 мкл крови. Центрифугируют 5 мин при 4000 об/мин, отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости и добавляют 2,0 мл рабочего раствора. состо- 35 ящего из I Н ацетатного буфера с рН=4,8. глюкозооксидазы, пероксидазы и 1%-ного раствора ортотолидина в абсолютном спирте. Осторожно перемешивают и проводят исследование через 15 мин. Колориметри- 40 руют при длине волны 620 нм против холостой пробы. Результат смотрят по калибровочному графику в мг%. В данном случае содержание глюкозы в крови равно—

0,0 мг%, 45

Затем высушивают данный образец крови в чашке Петри в эксикаторе, распределив его тонким слоем, в течение суток.

После этого приступают к определению гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне. Для этого навеску сухой крови массой 120 мг помещают в пробирку, растирают стеклянной палочкой и заливают 0,8 мл раствора. Оставляют стоять 50-60 мин,постоянно перемешивая палочкой.

Определение общего гемоглобина проводят по выше укаэанной методике с добавФормула изобретения

Способ отсроченного on ределения гликеии путем биохимического исследования суro пятна трупной крови, о т л и ч а ю щ и й1807393

Составитель Е,Дубовицкая

Редактор С.Кулакова Техред M.Mîðãåíòýë Корректор Л,Пилипенко

Заказ 1316 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 с я тем, что, с целью повышения точности, определяют содержание гликированного гемоглобина и при увеличении содержания его в 2-3 раза по сравнению с нормой определяют гликемию.