Способ получения -интерферона
Использование: медицинская биотехнология. Сущность изобретения: в культуру человеческих лейкоцитов вносят фаговую двухспиральную РНК (Ларифан) в концентрации 100 - 500 мкг/мл с последующим инкубированием клеток и сбором интерферона. Изобретение позволяет повысить выход конечного продукта, улучшить его качество, упростить технологию.
Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть использовано в производстве человеческого лейкоцитарного альфа-интерферона. Целью предлагаемого способа является увеличение выхода конечного продукта, улучшение его качества и упрощение технологического процесса получения интерферона. Указанная цель достигается тем, что в способе получения интерферона в качестве индуктора предлагается использовать природную двухцепочную РНК бактериофага Г-2 в концентрации 100-500 мкг/моль (коммерческое название препарата "Ларифан"), имеющую разрешение фармкомитета МЗ СССР для местного применения (протокол N 13 от 3.07.87) и для внутримышечного введения людям (протокол N 4 от 2.10.87). Положительный эффект состоит в том, что указанные концентрации индуктора обеспечивают получение стандартных титров альфа-интерферона в полуфабрикате (1550-2000 МЕ в 1 мл). Кроме того, применение ларифана позволяет упростить технологический процесс, т. к. полностью исключаются стадии накопления вируса индуктора в развивающихся куриных эмбрионах, удаления неадсорбированного клетками вируса и аллантоисной жидкости, а также инактивации вируса индуктора в целевом продукте. Таким образом, заявляемый новый способ получения альфа-интерферона с помощью нетоксичного и безвредного разрешенного для клинического использования препарата фаговой двухспиральной РНК позволит упростить технологию получения и улучшить качество конечного продукта за счет отсутствия в нем гетерологических для человека примесей аллантоисного происхождения. П р и м е р 1. Ларифан в концентрации 100 мг в 1 мл вносили в культуру лейкоцитов человека в среде 199 с добавлением 4 объем. сыворотки крови человека. Концентрация лейкоцитов 3 млн. кл./мл. Обработанную ларифоном культуру лейкоцитов инкубировали при 37о С в течение 20 ч. По завершении инкубирования культуральную жидкость отделяли от лейкоцитов центрифугированием при 1500 об./мин в течение 30 мин. Осадок отбрасывали, а культуральная жидкость служила целевым продуктом альфа-интерфероном. Выход интерферона составил 1000 МЕ в мл. П р и м е р 2. Выделение и инкубирование лейкоцитов осуществляли, как и в примере 1. Индуктор интерферона ларифон вносили в концентрации 300 мкг в 1 мл. На этапе биосинтеза интерферона клетки культивировали в среде Игла с 4 объем. сыворотки человека. Через 20 ч инкубации титры интерферона составили 2000 МЕ/мл.
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ
-ИНТЕРФЕРОНА, включающий обработку культуры лейкоцитов человека индуктором с последующей инкубацией и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения выхода интерферона, в качестве индуктора используют двухспиральную фаговую РНК (Ларифан) в концентрации 100-500 мкг/мл.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 05.04.1998
Номер и год публикации бюллетеня: 18-2001
Извещение опубликовано: 27.06.2001
