Способ получения каталазы из эритроцитов крови человека

 

Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии. Цель изобретения - интенсификация способа. Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем отмывку эритроцитов донорской крови физраствором и центрифугированием, проводят одновременно и осаждение гемоглобина, и стабилизацию катализы смесью хлороформа и пропанола в соотношении 5 : 3, к полученному после центрифугирования супернатанту добавляют равный объем воды и растворяют сернокислый аммоний из расчета 535 - 540 г на 1 л экстракта до полного растворения соли. После формирования осадка проводят центрифугирование.

Изобретение относится к технологии получения ферментов из сырья животного происхождения, в частности эритроцитов человека, и может быть использовано в фармацевтической промышленности и энзимологии.

Целью изобретения является интенсификация способа за счет сокращения числа и длительности операций.

Способ осуществляется следующим способом.

5 л эритроцитов донорской крови человека отмывают 0,85-1,0%-ным физиологическим раствором и центрифугируют 15 мин при 2500g, обрабатывают осадок эритроцитов равным объемом дистиллированной воды в течение 4 ч при температуре 4^оС. Осаждение гемоглобина проводят обработкой гемолизата эритроцитов смесью пропанола-2 и хлороформа в соотношении 5:3 соответственно при непрерывном помешивании в течение 40-60 мин при температуре -4^оС. Затем центрифугируют 15-20 мин при 2500g, удаляют осадок гемоглобина. К полученной надосадочной жидкости (рН 7-7,2) добавляют равный объем дистиллированной воды в соотношении 1: 1, смесь перемешивают в течение 30-40 мин и к ней добавляют сернокислый аммоний из расчета 535-540 г на 1 л экстракта при тщательном перемешивании до полного растворения сернокислого аммония при температуре 25^оС.

Процесс высаливания целевого продукта с последующим формированием осадка фермента проводят в течение 10-12 ч при 4^оС. Осадок фермента отделяют центрифугированием при 2000g в течение 20 мин, растворяют в 50-70 мл дистиллированной воды. Раствор фермента диализуют против дистиллированной воды в течение 24 ч, подвергают стерилизующей фильтрации через мембраны "Миллипор" с диаметром пор 0,2 мкм.

Целевой продукт лиофильно высушивают под вакуумом в присутствии стабилизатора сахарозы в концентрации 0,5% в течение 42 ч.

Молекулярная масса каталазы 250000 Д, электрофоретическая чистота 98-99,9% удельная специфическая активность 35000-40000 Ед, выход 180-200 мг на 1 л эритроцитов крови.

Предложенный способ получения каталазы позволяет сократить число и длительность технологических операций с 8 сут по способу-прототипу до 3 сут 6 ч.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАТАЛАЗЫ ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА путем отмывки эритроцитов физиологическим раствором, центрифугирования, обработки осадка эритроцитов равным объемом дистиллированной воды, осаждения гемоглобина из гемолизата эритроцитов органическими растворителями при непрерывном перемешивании, удаления осадка гемоглобина, очистки целевого продукта в присутствии сернокислого аммония с последующей лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью интенсификации способа за счет сокращения числа и длительности операций, гемолизат эритроцитов обрабатывают смесью пропанола-2 и хлороформа в соотношении 5 3, центрифугируют, к надосадочной жидкости добавляют равный объем дистиллированной воды в соотношении 1 1, в 1 л которой растворяют 535-540 г сернокислого аммония.