Способ депарафинирования и подготовки гистологических препаратов к заключению в бальзам рыжавского

 

Использование: в медицине, в частности в гистологии и может применяться для депарафинирования и заключения в бальзам гистологических препаратов. Сущность изобретения: срезы депарафинизируют, окрашивают, дегидратируют и удаляют спирт, после чего их заключают в бальзам, при этом депарафинизацию проводят в течение 8 - 18 ч, а удаление спирта осуществляют последовательно смесью 100^o этилового спирта и растительного масла, взятых в соотношении 1 : 1 - 1 : 3, а затем растительным маслом. Способ позволяет получить качественные препараты и резко снизить воздействие на людей экологически вредных веществ.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано при окраске и заключении в бальзам гистологических препаратов.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, состоящей в исключении воздействия на сотрудников гистологических патоморфологических, судебно- медицинских лабораторий вредных для здоровья веществ продуктов перегонки нефти, используемых в процессе окраски парафиновых срезов.

Известно, что в процессе окраски парафиновых срезов различными красителями используются продукты перегонки нефти: ксилол, толуол, бензол (Ромейс Б. Микроскопическая техника. М. Иностранная литература, 1954, с. 718. Практикум по гистологии, цитологии и эмбриологии./. Под ред Н. А. Юриной, А. И. Радостиной. М. Изд-во унив. дружбы народов, 1989, с. 253; Х. Луппа. Основы гистохимии. М. Мир, 1980, с. 343; Г. Я. Видершайн, Я. Е. Хесин. Ксилолы. БМЭ, Т. 12, с. 117. 1980).

Эти вещества используются для депарафинирования среза и перед заключением в бальзам для окончательной дегидратации и удаления спирта, сначала карбол-ксилол, затем ксилол (или толуол или бензол). Недостатком данного способа является то, что эти вещества оказывают сильно выраженное неблагоприятное воздействие на организм.

Цель изобретения разработка безопасного для людей способа обработки срезов в процессе их окраски и заключении в бальзам, т. е. на одном из этапов приготовления гистологического препарата.

Цель достигается тем, что предлагаемое изобретение содержит следующие признаки: парафиновые срезы, наклеенные на предметные стекла по стандартной методике, для депарафинизации помещают в плотно закрывающийся сосуд с хлороформом, после этого последовательно в этиловый спирт (100, 96, 70^о), затем в дистиллированную воду на несколько минут. Затем срез погружают в краситель на время, требуемое методиками окраски. Затем срез промывается дистиллированной водой, для дегидратации обрабатывается этиловым спиртом. После этого для удаления спирта и последующего заключения в бальзам на срез наносится несколько капель смеси 100^о спирта и растительного масла. Предметное стекло при этом покачивают. После этого смесь спирта и растительного масла сливается, а на срез наносится несколько капель растительного масла, затем предметное стекло тщательно вытирается вокруг среза, на срез наносится бальзам, а поверх него покровное стекло.

По отношению к прототипу у заявляемого изобретения имеются следующие отличительные признаки: для депарафинирования среза гистологический препарат помещают в герметично закрытый сосуд с хлороформом и не используют ксилол, толуол, бензол. Для удаления спирта и последующего заключения в бальзам на срез наносится смесь спирта и растительного масла, через несколько минут смесь сливается, на срез наносится растительное масло, излишки его удаляют, затем наносят бальзам и покровное стекло.

Между отличительными признаками и целью изобретения существует причинно-следственная связь: гистологический препарат обрабатывается веществами, которые не содержат продукты перегонки нефти ксилол, толуол, бензол, тем самым исключается воздействие на сотрудников лаборатории экологически опасных, вредных для здоровья веществ.

Полученные препараты по качеству не уступают изготовленным традиционным методом, в них не обесцвечиваются красители и не меняется цвет примененных красителей. Способ не требует дополнительной аппаратуры.

В качестве растительных масел могут использоваться рафинированные коммерческие подсолнечное, соевое, касторовое и др. масла. Смесь растительного масла и спирта, а также масло могут быть использованы многократно. Применение способа исключает необходимость использовать принудительную вытяжную вентиляцию.

Способ осуществляют следующим образом.

Парафиновые срезы, наклеенные на предметные стекла по стандартной методике, для депарафинизации помещают на 8-18 ч (на ночь) в плотно закрывающийся сосуд с хлороформом. Затем они одномоментно, для уменьшения времени контакта с хлороформом, извлекаются и помещаются последовательно в этиловый спирт крепостью 100, 96, 70^о, дистиллированную воду по 3-5 мин (время может быть при необходимости увеличено). После этого срез помещают в краситель на время, требуемое методиками окраски. При окраске гематоксилином-эозином, после окраски эозином препарат промывают дистиллированной водой. Для дегидратации срез обрабатывают 70, 96 и 100^о этиловым спиртом. Для удаления спирта и последующего заключения в бальзам на срез наносят 3-4 капли смеси 100^о спирта и растительного масла в соотношении 1:3. Предметное стекло при этом покачивают в течение 1-3 мин. После этого смесь сливается во флакон, а на срез наносится 1-2 капли растительного масла. Через 1-3 мин масло сливается во флакон, предметное стекло тщательно вытирается вокруг среза салфеткой для удаления масла, на срез наносится бальзам, а поверх него покровное стекло. Слитые смесь спирт-масло, а также масло могут использоваться многократно.

Согласно данным проведенных экспериментов заявляемое изобретение может быть использовано в медицине и в сравнении с другими способами обладает следующими преимуществами: резко уменьшается вредное воздействие экологически опасных веществ на человека, качество препарата не снижается, имеется экономический эффект, так как отпадает необходимость в использовании вытяжной вентиляции и вытяжных шкафов; применяемые для удаления спирта масла экологически чисты и доступны.

Предлагаемое изобретение представляет значительный интерес для народного хозяйства, так как позволяет получать качественные препараты и резко снизить воздействие на людей экологически вредных веществ, не оказывает отрицательного воздействия на состояние окружающей среды.

Формула изобретения

Способ депарафинирования и подготовки гистологических препаратов к заключению в бальзам, включающий депарафинизацию срезов, их окраску, дегидротацию и даление спирта с последующим заключением их в бальзам, отличающийся тем, что депарафинизацию срезов проводят хлороформ в течение 8 - 18 ч, а удаление спирта осуществляют последовательно смесью 100-градусного этилового спирта и растительного масла, взятых в соотношении 1 : 1 - 1 : 3, а затем растительным маслом.