Инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

 

Использование: получение безвредной, высокоиммуногенной вакцины, обеспечивающей создание напряженного иммунитета у крупного рогатого скота к инфекционному ринотрахеиту. Сущность изобретения: вакцина включает концентрированный антиген вируса ИРТ из штамма Herpesvirus bovis1 "Щапово", полученного в культурах клеток крупного рогатого скота и представляет собой, об. %: концентрированный антиген вируса ИРТ 50-90, маслянный адъювант - остальное. Вакцину вводят внутрикожно по 0,2 - 0,4 мл или подкожно по 2,0 - 6,0 мл двукратно с интервалом 14 - 21 день телятам в возрасте от 30 дней и старше. Вакцина апробирована в экспериментальных условиях с положительными результатами. Вакцина найдет применение в животноводческих хозяйствах как откормочного направления, так и репродуктивного, а также на станциях искусственного осеменения. 2 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и бактериологии, в частности к получению вакцины для специфической профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

Вирус инфекционного ринотрахеита является основной причиной массовых респираторных заболеваний крупного рогатого скота, преимущественно телят, а у взрослых животных патологии воспроизводства.

Вирус ИРТ широко распространен среди поголовья крупного рогатого скота в нашей стране и во многих странах мира. Заболевание наносит значительный экономический ущерб, складывающийся из-за недополучения продукции и приплода, снижения привесов, отхода молодняка за счет гибели и выбраковки животных, низкой оплодотворяемости коров.

Известна инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, включающая вируссодержащий материал из штамма N 4016 в 0,5% растворе гибролизата лактальбумина на растворе Хенкса с титром 10^7,0-7,5 ТЦД_50/мл (72-74 об.), инактиватор этиловый спирт (15-15,5 об.), стабилизатор нейтральный глицерин (2,8-3,0 об.) и борную кислоту (3,0-3,2 об.) и адъювант, состоящий из сапонина 0,1-0,2% и 6% гидроокиси алюминия, а также смеси антибиотиков на мл вакцины: пенициллин 100-200 ЕД, стрептомицин 100-200 мкг и нистатин 50-100 мг [1] Вакцину вводят животным подкожно в дозе 5,0-10,0 мл.

Известна также инактивированная вакцина для профилактики респираторных болезней крупного рогатого скота, включающая концентрированный вируссодержащий материал вируса ИРТ штамм "ТК-А (ВИЭВ)-В2", вируса ВД-БС штамм "ВК-1 (В-1) N 28" и суспензию хламидий Chlamidia abortus ovis, инактивированные формалином и масляный адъювант [2] (прототип).

Вакцину вводят животным подкожно двукратно с интервалом 14-21 день в дозе 2,2-2,3 мл телятам, 4,5-5,0 коровам.

Известна также живая моновакцина против ИРТ, изготовленная из штамма "ТК-А (ВИЭВ)-2", включающая вируссодержащий материал в 0,5% растворе гидролизата лактальбумина на растворе Хенкса, защитную среду из сахарозы 4% и желатина 2% взятую в соотношении к вирусному материалу 1:9 [3] Вакцину вводят животным двукратно подкожно по 1,0-2,0 мл.

Цель работы получение безвредной высокоиммуногенной вакцины, обеспечивающей создание напряженного иммунитета у крупного рогатого скота к инфекционному ринотрахеиту.

Намеченная цель достигнута тем, что в качестве антигена используется вирус инфекционного ринотрахеита, штамм (полевой) Herpesvirus bovis 1 "Щапово" с активностью 10^7,5-8,5 ТЦД_50/мл [4] Предлагаемую вакцину готовили следующим образом.

Производственный штамм вируса инфекционного ринотрахеита Herpesvirus bovis 1 "Щапово" размножают в первичнотрипсинизированных культурах клеток почки теленка (ПТ) или тестикулов бычка (ТБ) или их субкультурах, можно использовать перевиваемые клеточные линии МДБК, ЛЭК, ТР. Заражение культур клеток проводят вируссодержащей культуральной жидкостью в дозе 1-5 ТЦД/клетка. Зараженные культуры при стационарном или роллерном культивировании инкубируют при 37,0±0,5^оС в течение 24-72 ч, затем вируссодержащую жидкость собирают и используют для изготовления вакцины с активностью 10^6,0-7,0 ТЦД_50/мл. В вируссодержащую культуральную жидкость добавляют ПЭГ-6000 из расчета 8-9% и NaCl 2,5-2,8% тщательно перемешивают до полного растворения ПЭГ, оставляют при 4-8^оС в течение 18-24 ч, далее подвергают центрифугированию при 8-10 тыс. об/мин в течение 40-60 мин. Полученный осадок ресуспендируют в забуференном физиологическом растворе в соотношении 1:10-1:12 и определяют активность концентрированного вируса в культуре клеток. Для изготовления вакцины используют вирус с титром 10^7,5-8,5 ТЦД_50/мл, который инактивируют формалином в конечной концентрации 0,2-0,3% в течение 46-48 часов при 37,0±W0,5^оС при периодическом перемешивании. Далее проводят контроль полноты инактивации вируса в культуре клеток, после чего концентрированный антиген вируса ИРТ помещают в емкость (реактор) и смешивают со стерильным маслянным адъювантом, состоящим из 80-83% минерального масла и 17-20% ланолина; на одну часть антигена добавляют 10-50% адъюванта. Полученную смесь охлаждают до 10-15^оС и эмульгируют, пропуская через коллоидную мельницу при зазоре 00 между трущимися поверхностями и давлении 0,4-0,6 кг/см³, до получения гомогенной массы, которую расфасовывают во флаконы и используют в качестве вакцины.

П р и м е р 1. Для изготовления одного литpа вакцины брали: Концентрированный анти- ген вируса ИРТ штамм Herpesvirus bovis 1 "Щапово" в культуре клеток МДВК с титром 10^7,5 ТЦД_50/мл, конечная концентрация формалина 0,2% 900,0 мл
Масляный адъювант Остальное
П р и м е р 2. Для изготовления одного литpа вакцины брали:
Концентрированный анти-
ген вируса ИРТ штамм
Herpesvirus bovis 1 "Щапово"
в культуре клеток ТБ с
титром 10^8,0 ТЦД_50/мл,
конечная концентрация
формалина 0,25% 750,0 мл
Масляный адъювант Остальное.

П р и м е р 3. Для изготовления одного литра вакцины брали:
Концентрированый анти-
ген вируса ИРТ штамм
Herpesvirus bovis 1 "Щапово"
в культуре клеток ТР с
титром 10^8,5ТЦД_50/мл,
конечная концентрация
формалина 0,3% 500,0 мл
Масляный адъювант Остальное
Полученные серии вакцины вводили телятам внутрикожно двукратно с интервалом 14-21 день в дозе 0,2-0,3 мл, вакцину можно вводить подкожно в дозе 2,0-6,0 мл.

Результаты вакцинации отражены в табл. 1 и 2.

Вакцина, изготовленная таким способом, безвредна и обеспечивает создание иммунитета у 80-93% привитых животных.

Предложенная вакцина апробирована нами с положительными результатами в экспериментальных условиях в 1990-1992 гг.

Отличительной особенностью данной вакцины является использование в качестве антигена высокоиммуногенного полевого штамма вируса ИРТ "Щапово", а также существенное снижение объема вводимой вакцины.

Нами впервые получена безвредная высокоиммуногенная инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, обеспечивающая создание у привитых животных напряженного иммунитета.

Вакцина, полученная предложенным способом, найдет применение в животноводческих хозяйствах как откормочного направления так и репродуктивного, а также на станциях искусственного осеменения. Применение вакцины позволит существенно снизить заболеваемость инфекционным ринотрахеитом, что будет способствовать повышению мясной и молочной продуктивности животных.

Формула изобретения

ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, включающая концентрированный антиген вируса инфекционного ринотрахеита и масляный адъювант, отличающаяся тем, что из антигенов используют вирус инфекционного ринотрахеита штамм Herpesvirus I "Щапово" с титром 10^7,5-8,5 ТЦД_50/мл, об.

Антиген вируса инфекционного ринотрахеита штамм Herpesvirus bovis 1 "Щапово" с титром 10^7,5-8,5 ТЦД_50/мл 50 90
Масляный адъювант Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3