Транспортная среда для патогенных псевдомонад

 

Использование: медицина, микробиология, транспортировка материала, транспортная среда. Сущность изобретения: в транспортную среду для патогенных псевдомонад (возбудителей сапа и мелиоидоза), содержащую глицерин и дистиллированную воду, дополнительно вводят гидролизин, хлористый натрий, ампициллин, полимиксин В и генцианвиолет, рН 6,7 - 6,9, при следующих количественных соотношениях компонентов (г/л): глицерин - 100,0 - 200,0, гидролизин - 0,5 - 0,6, хлористый натрий 4,5 - 5,5, ампициллин - 0,01 - 0,015, полимиксин В - 0,002 - 0,003, генцианвиолет - 0,002 - 0,003 и дистиллированная вода до 1 л. Использование предлагаемой транспоpтной среды для патогенных непигментированных псевдомонад по сравнению с известной увеличивает срок сохранения материала, зараженного этими возбудителями. В процессе транспортировки через 2 - 3 суток происходит постепенное отмирание посторонних микроорганизмов - контаминантов, затрудняющих выделение искомых патогенных возбудителей. 4 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к микробиологии особо опасных инфекций, проблеме транспортировки материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителями сапа или мелиоидоза, в лаборатории особо опасных инфекций.

Известны следующая среда, используемая для транспортировки псевдомонад, наиболее близкий аналог стерильный 30% раствор глицерина (Коляков Я.Е. //Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях/ Под ред. Г.Я.Синай, О.Г.Биогер. М. Медгиз, 1949. С. 409 417).

Недостатком среды-прототипа является сохранение в процессе транспортировки всех сопутствующих микроорганизмов-контаминантов, что делает невозможным выделение искомых патогенных микроорганизмов-возбудителей сапа или мелиоидоза.

Целью настоящего изобретения является увеличение срока сохранения патогенных псевдомонад (возбудителей сапа или мелиоидоза) в процессе транспортировки материала, зараженного этими возбудителями и контаминированного посторонней банальной микрофлорой, на большие расстояния.

Поставленная цель достигается тем, что в транспортную среду для патогенных псевдомонад (возбудителей сапа и мелиоидоза), содержащую глицерин, дистиллированную воду, дополнительно вводят гидролизин, хлористый натрий, ампициллин, полимиксин В и генцианвиолет рН 6,7 6,9 при следующих количественных соотношениях компонентов г/л: 1. глицерин 100,0 200,0 2. гидролизин 0,5 0,6 3. хлористый натрий 4,5 5,5 4. ампициллин 0,01 0,015 5. полимиксин B 0,002 0,003 6. генцианвиолет 0,002 0,003 7. дистиллированная вода до 1 л Использование предложенного соотношения компонентов в транспортной среде позволяет сохранить до 7 суток возбудитель сапа или мелиоидоза в процессе транспортировки материала, зараженного этими возбудителями и избавится от посторонних сопутствующих микробов-контаминантов, обычно находящихся в окружении человека и животных, что увеличивает высеваемость патогенных псевдомонад, даже когда они имеются в незначительном числе в среде, где количество посторонней микрофлоры значительно их превосходит и придает заявке изобретательский уровень.

Примеры конкретного применения.

Пример 1. Оптимальный состав среды.

Среду готовят следующим образом: в 850 мл дистиллированной воды вносят 150 мл глицерина, тщательно перемешивают, вносят 5,0 г хлористого натрия и 0,55 г гидролизина сухого, кипятят до растворения компонентов, устанавливают рН 6,7 6,9 с помощью 4%-ного раствора едкого натра или 4%-ного раствора соляной кислоты. Разливают мерно по флаконам и стерилизуют при 110^oC в течение 30 минут.

В охлажденную после автоклавирования среду ex temporae вносят ингибиторы роста посторонней микрофлоры г/л: ампициллин 0,012
полимиксин В 0,0025
генцианвиолет 0,0025
Тщательно перемешивают и разливают по 5,0 мл в пробирки.

Пример 2. Возможны низшие пределы концентрации ингредиентов. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты используют в следующих количествах г/л:
1. глицерин 100,0
2. гидролизин 0,5
3. хлористый натрий 4,5
4. ампициллин 0,01
5. полимиксин В 0,002
6. генцианвиолет 0,002
7. дистиллированная вода до 1 л
pH 6,7 6,9
Пример 3. Возможны высшие пределы концентрации ингредиентов. Готовят среду по примеру 1, но ингредиенты используют в следующих количествах г/л:
1. глицерин 200,0
2. гидролизин 0,6
3. хлористый натрий 5,5
4. ампициллин 0,015
5. полимиксин B 0,003
6. генцианвиолет 0,003
7. дистиллированная вода до 1 л
pH 6,8 6,9
Пример 4. Практическое использование среды для транспортировки материала, зараженного возбудителями сапа или мелиоидоза и загрязненного посторонней контаминирующей микрофлорой.

Готовят транспортную среду в соответствии с примером 1. В качестве контрольной среды используют прототип среду Колякова: 30% стерильный раствор глицерина и также разливают в пробирки по 5,0 мл.

Культуры возбудителей сапа или мелиоидоза вносят в экспериментальную транспортную среду и контрольную из такого расчета, чтобы в 1,0 мл этой среды содержалось 10³ м.к. (микробных клеток) основного искомого патогенного возбудителя (либо P. mallei 10230 либо P. pseudomallei C-141) и 10⁵ м.к. каждого из четырех представителей контаминирующей микрофлоры (E. coli 02, P. vulgaris 14, P. aeruginosa PAO-1, S. aureus 209). При разведении этих возбудителей использовали "болтушку", содержащую 1,0 г почвы на 100,0 мл забуференного раствора хлористого натрия.

Выдерживают среды в течение 7 суток при комнатной температуре. Высевы делали по 0,1 мл из жидких транспортных сред на чашки Петри с агаром для культивирования возбудителей сапа и мелиоидоза в день посева и в последующие 7 суток хранения транспортных сред при комнатной температуре (АКГ агар готовый на основе кровезаменителей).

При этом отмечалось, что при высеве из транспортных сред и опытной и контрольной смеси микроорганизмов с возбудителями сапа или мелиоидоза в день посева на плотные среды наблюдался сплошной рост посторонней микрофлоры. Через 2 3 суток посторонние микроорганизмы-контаминты в транспортной среде постепенно отмирали, их колонии при высеве на АГК были немногочисленными или отсутствовали совсем, и на чашках Петри наблюдался рост только колоний чистой культуры возбудителя сапа или мелиоидоза.

Через 7 сут посторонние микроорганизмы в экспериментальной транспортной среде отмирали, и на чашках Петри с плотной средой отмечался рост только колоний чистой культуры возбудителя сапа или мелиоидоза (контрольный срок наблюдения).

В контрольной транспортной среде, содержащей только 30%-ный раствор стерильного глицерина, спустя 7 сут хранения при комнатной температуре происходило усиленное размножение представителей контаминирующей микрофлоры, и на чашках Петри с плотной питательной средой (АГК) вырастал газон сплошного роста смеси микроорганизмов, из которого выделить отдельные колонии искомых патогенных возбудителей не представлялось возможным.

Таким образом, транспортная среда может быть использована для перевозки материала, зараженного возбудителями сапа или мелиоидоза и загрязненного посторонней контаминирующей микрофлорой, на большие расстояния в пределах 5
7 сут пути.

Использование предлагаемой транспортной среды для патогенных непигментированных псевдомонад по сравнению с известной имеет ряд преимуществ:
1. В процессе транспортировки через 2 3 суток происходит постепенное отмирание посторонних микроорганизмов-контаминантов, затрудняющих выделение искомых патогенных возбудителей;
2. Происходит сохранение единичных микробных клеток возбудителей сапа или мелиоидоза (100 м.к./мл).

Формула изобретения

Транспортная среда для патогенных псевдомонад, содержащая глицерин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит гидролизин, хлористый натрий, ампициллин, полимиксин В и генцианвиолет, pH 6,7 6,9, при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Глицерин 100 200
Гидролизин 0,5 0,6
Хлористый натрий 4,5 5,5
Ампициллин 0,01 0,015
Полимиксин В 0,002 0,003
Генцианвиолет 0,002 0,003
Дистиллированная вода До 1 л

РИСУНКИ

Рисунок 1