Способ получения биомассы микроорганизмов

 

Использование: биотехнология, микробиологическая промышленность. Сущность изобретения: способ заключается в том, что биомассу выращивают в питательной среде, содержащей источники углерода, азота, необходимые минеральные соли и стимулятор роста клеток, при этом в качестве стимулятора роста клеток используют N-трис/гидроксиэтил/аммониевую соль парахлорфенилтиоуксусной кислоты, а в качестве дополнительного стимулятора роста клеток используют комплексный препарат гибберсиб, получаемый на основе культуральной жидкости, образующейся при выращивании гриба Fusarium moniliforma, в количестве 1·10^-12 - 1·10^-6%. Использование предлагаемого способа обеспечивает повышение выхода биомассы от заданного источника углерода на 10 -15% при одновременном увеличении в биомассе содержания белка; при этом в 10³ - 10⁶ раз снижается расход N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли хлорфенилтиоуксусной кислоты.

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и может быть использовано в процессе выращивания биомассы, например, при получении биомассы кормовых дрожжей, в частности при производстве биомассы дрожжей на очищенных парафинах нефти.

Интенсификация роста микроорганизмов является одной из наиболее актуальных проблем технологии получения биомассы микроорганизмов.

Известны способы выращивания биомассы с использованием стимуляторов для интенсификации роста клеток.

В качестве стимуляторов могут быть использованы как индивидуальные вещества, такие как витамины, аминокислоты, микроэлементы, поверхностно-активные вещества, пуриновые или пиримидиновые основания, так и смеси сложного состава, главным образом, отходы соответствующих производств.

Стимуляторы роста дрожжей в процессе получения биомассы на средах с парафинами используют как при периодическом, так и при непрерывном культивировании. Использование стимуляторов приводит к более полной утилизации субстрата, однако их применение экономически не всегда целесообразно.

Известен способ выращивания дрожжей в условиях аэрации на минеральных питательных средах, содержащих источник углерода, азота, фосфора, и микроэлементов с использованием в качестве стимуляторов роста дрожжей одной или нескольких α-аминокарбоновых кислот, входящих в состав натуральных полипептидов, особенно аргинина, лейцина и лизина, а также одного или нескольких витаминов группы В, особенно пантотеновой кислоты и ее солей и пиридоксина /см. патент Франции N 1538957, кл. C 12 C/. Одновременное добавление 0,2 вес. к объему среды комплекса из аминокислот и витаминов /аргинина, пиридоксина и пантотеновой кислоты/ или 0,25% аминокислот и 0,10% витаминов к объему среды приводит к интенсификации процесса получения биомассы дрожжей. Однако широкое применение известного способа в крупнотоннажном производстве биомассы микроорганизмов невозможно, поскольку как индивидуальные аминокислоты, так и отдельные витамины достаточно дороги, кроме того, они имеют самостоятельную пищевую ценность, а производство их сравнительно ограничено.

Описан также способ выращивания дрожжей с использованием в качестве стимулятора роста вещества, выделенного из отработанной культуральной жидкости с помощью полярного растворителя, в качестве которого используют этиловый спирт /авт. св. СССР N 258225, кл. C 12 N 1/26, бюл. изобр. 1987 N 40, c. 184/.

По этому способу дрожжи выращивают на питательной среде, содержащей парафин, минеральные соли, стимулятор роста дрожжевой автолизат и дополнительно вводят стимулятор роста, выделенный из отработанной культуральной жидкости с помощью этилового спирта. Дрожжи выращивают в колбе на качалке в течение 24 ч на водно-минеральной среде с использованием в качестве источника углерода углеводородов и в качестве стимулятора роста - дрожжевого автолизата и кубового остатка, получаемого обработкой культуральной жидкости и равным объемом этилового спирта и последующей отгонкой растворителя. Применение описанного комплекса стимуляторов позволяет повысить выход биомассы. Существенным недостатком известного способа является значительный расход автолизата дрожжей, а также использование значительных количеств спирта, который имеет самостоятельную пищевую ценность, и при этом незначительное увеличение выхода биомассы.

Ближайшим решением к предлагаемому способу получения биомассы по технической сущности и достигаемому эффекту является способ выращивания дрожжей /ж. Прикл. биохимия и микробиология, 1974, т. Х, вып. 1, с. 161 - 165/. Согласно известному способу предусматривается выращивание микроорганизмов, например дрожжей Saccharomyces cerevisae с использованием в качестве питательной среды источника углерода и энергии и компонентов минерального питания пивного сусла. В начале выращивания м/о в культуральную среду в качестве стимулятора роста добавляют препарат гиббереллин /производства Курганского завода/ в количестве 1,2·10^-3 M /2·10^-2% 100 мг/л/. При этом дрожжи наиболее интенсивно размножались в первые трое суток.

Увеличение концентрации биомассы в среднем составило 20 25% Недостатком известного способа является недостаточно высокий выход биомассы, значительная длительность выращивания биомассы /до нескольких суток/, высокий удельный расход стимулятора, который является индивидуальным гиббериллином, для выделения которого используется дорогостоящая очистка, в связи с чем он является достаточно дорогим препаратом, что снижает эффективность процесса в целом.

Технический результат предлагаемого изобретения заключается в увеличении выхода биомассы от заданного источника углеродного питания и снижении расхода стимуляторов.

Данный технический результат достигается тем, что при выращивании микроорганизмов в условиях аэрации в питательной среде, содержащей источники углерода и азота, необходимые минеральные соли и стимулятор роста клеток в виде композиции из продукта жизнедеятельности гриба Moniliforma гибберсиба у синтетического препарата N-трис/гидроксилэтил/аммониевой соли n-хлорфенилтиоуксусной кислоты.

Предлагаемый способ заключается в следующем: микроорганизмы, например дрожжи рода Candida, выращивают в условиях аэрации на водной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода углеводороды, например очищенные жидкие парафины или нефтяные дистилляты, или глюкозу, или этанол, а также источник азота в виде сернокислого аммония, фосфора в виде фосфорной кислоты или суперфосфата, минеральные источники калия, магния, железа и марганца в виде соответствующих сернокислых или хлористых солей этих металлов. Выращивание дрожжей проводят периодически или непрерывно при pH 3,5 6,0, при температуре 32 38^oC и скорости разбавления среды 0,1 0,3 ч^-1.

На стадии выращивания в питательную среду вводят композиционную смесь стимуляторов, состоящую из продукта жизнедеятельности гриба Fusarium moniliforma гибберсиба и синтетического препарата N-трис /гидроксиэтил/-аммониевой соли n-хлорфенилтиоуксусной кислоты, в количестве 1·10^-6 1·10^-12 мас. и соотношении компонентов /1: 1/ - /2:1/, при этом оба стимулятора вводят в процесс выращивания микроорганизмов одновременно или поочередно.

Препарат Гибберсиб /ТУ-59.05.01 81/ представляет природный комплекс гиббереллинов и состоит из 60 с лишним гиббереллинподобных веществ, вырабатываемых грибами рода Fusarium.

Для получения гибберсиба сумму гиббереллинов из культуральной жидкости грибов рода Fusarium осаждают гидроксидом железа, затем осадок обрабатывают раствором обычной питьевой соды, т.е. кислого углекислого натрия, в результате чего из осадка органические кислоты переходят в водорастворимую форму. Раствор гиббереллиновых кислот осторожно выпаривают в вакууме. Получающаяся в виде буроватого кристаллического осадка смесь натриевых солей гиббереллиновых кислот и кислого углекислого натрия и представляет собой гибберсиб. Гибберсиб легко растворим в воде, достаточно устойчив при хранении, совершенно безвреден для человека.

Препарат /ТУ 15-87/ N-трис /гидроксиэтил/аммониевую соль n-хлорфенилтиоуксусной кислоты получают взаимодействием n-хлорфенилтиоуксусной кислоты с триэтаноламином в среде абсолютного этилового спирта. Структурная формула Брутто-формула C₁₄H₂₂Cl NO₅, М. В. 351,70, белый с кремовым оттенком кристаллический порошок. Легко растворим в 90% спирте и воде /допускается легкая опалесценция в водных и спиртовых растворах/. Температура плавления 76 80^oC.

Пример 1.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-899 /ЦМПМ-У-262/ выращивают в колбах на качалке с объемом питательной среды 100 мл на минеральной среде следующего состава, г/л: NH₄H₂PO₄ 10 K₂HPO₄ 10 MgSO₄·7H₂O 0,7 FeSO₄·7H₂O 0,093 ZnSO₄·7H₂O 0,042 MnSO₄·5H₂O 0,0105 В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов и стимуляторы роста: гибберсиб 10^-11% и N-трис/гидроксиэтил/аммониевую соль парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-11% Выращивание дрожжей проводят при температуре 32 34^oC, pH среды 5,5 в течение 20 ч. В результате получают дрожжи с концентрацией биомассы 5,8 г/л. В контрольном опыте, т.е. без добавок стимуляторов, концентрация биомассы составила 4,1 г/л, при добавлении лишь 1·10^-11% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты концентрация биомассы составила 4,3 г/л, при добавлении лишь 1·10^-11% гибберсиба концентрация биомассы составляет 5,3 г/л. Прирост биомассы при подаче лишь N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты составил 4,8% при подаче лишь гибберсиба - 29,2% при совместной подаче стимуляторов прирост биомассы составляет 41,4% а сумма приростов биомассы при раздельной подаче стимуляторов составляет 34%
Пример 2.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-899 /ЦМПМ-У-262/ выращивают по примеру 1 в течение 17 ч. В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов, 1·10^-10% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты и 1·10^-10% гибберсиба. В результате получают дрожжи с концентрацией биомассы 4,3 г/л. При добавлении лишь 1·10^-10% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты концентрация биомассы 3,1 г/л, лишь 1·10^-10% гибберсиба 3,3 г/л. В контрольном опыте, т.е. без добавок стимуляторов концентрация биомассы составляет 3,1 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составил 39% сумма приростов при раздельной подаче стимуляторов 6%
Пример 3.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-899 /ЦМПМ-У-262/ выращивают по примеру 1 в течение 20 ч. В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов, 1·10^-10% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты и 1·10^-10% гибберсиба. Концентрация биомассы составила 5,8 г/л, при подаче лишь N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты /контроль по прототипу/ 5,2 г/л, при подаче лишь гибберсиба 5,0 г/л. В контрольном опыте /без добавок стимуляторов/ 4,4 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составил 32% сумма приростов при раздельной подаче составила 28%
Пример 4.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-569/ЦМПМ-У-262/ выращивают по примеру 1 в течение 17 ч. В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов, 1·10^-9% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты и 1·10^-9% гибберсиба. В результате получают дрожжи с концентрацией биомассы 5,0 г/л; при добавлении лишь N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты /контроль по прототипу/ 2,9 г/л, лишь гибберсиба 4,0 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составил 61,2% сумма приростов биомассы при раздельной подаче составила 54,8% по сравнению с контрольным опытом, в котором концентрация биомассы составляет 3,1 г/л.

Пример 5.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-777/ЦМПМ-У-194/ выращивают по примеру 1 в течение 20 ч. В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов, 1·10^-9% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты и 1·10^-9% гибберсиба. В результате получают дрожжи с концентрацией 6,0 г/л. Концентрация биомассы составила: при добавлении лишь N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты 5,2 г/л; лишь гибберсиба 5,1 г/л; в контрольном опыте /без добавок стимуляторов/ 4,4 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составил 36% сумма приростов биомассы при раздельной подаче 30%
Пример 6.

Дрожжи Candida tropicalis ВСБ-928 /ЦМПМ-У-503/ выращивают по примеру 1 в течение 20 ч. В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов, в качестве стимулятора роста композицию веществ гибберсиба в количестве 1·10⁷% и N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-7% Концентрация биомассы составила 5,8% г/л; при подаче лишь 1·10^-7% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты /контроль по прототипу/ 5,0 г/л, при подаче лишь 1·10^-7% гибберсиба 4,4 г/л, в контрольном опыте 4,1 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составил 41,4% сумма приростов биомассы при раздельной подаче стимуляторов 29,3% /21,0 и 7,3% соответственно/.

Пример 7.

Дрожжи Candida tropicalis ВСБ 928/ЦМПМ-У-503/ выращивают в колбах на качалке на минеральной питательной среде следующего состава, г/л:
сульфат аммония 3,5
ортофосфорная кислота 0,72
хлористый калий 0,48
сернокислый магний 0,29
сернокислое железо 0,055
сернокислый цинк 0,012
сернокислый марганец 0,006
В питательную среду добавляют 1 об. очищенных жидких парафинов, 1·10^-8% гибберсиба и 1·10^-8% трис/2-гидроксиэтил/ аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты. Выращивание дрожжей проводят в течение 36 ч при температуре 40 42^oC. В результате получают дрожжи с концентрацией биомассы 4,4 г/л. В контрольном опыте, т.е. без добавок стимуляторов концентрация биомассы составила 3,3 г/л, при добавлении лишь 1·10^-8% гибберсиба 3,6 г/л, при добавлении лишь 1·10^-8% трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты 3,4 г/л. Суммарный прирост биомассы составляет 33% Сумма прироста биомассы при раздельной подаче стимуляторов составляет 12%
Пример 8.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-744 /ЦМПМ-У-808/ выращивают по примеру 1 в течение 22 ч. В питательную среду добавляют в качестве стимулятора роста гибберсиб в количестве 1·10^-10% и N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-10% В результате получают дрожжи с концентрацией биомассы 5,87% г/л. При подаче лишь гибберсиба в количестве 1·10^-10% получают дрожжи с концентрацией биомассы 5,18 г/л; при подаче лишь N-трис/2-гидроксиэтил/ аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-10% концентрация биомассы составляет 5,07 г/л. В контрольном опыте /без подачи стимуляторов/ концентрация биомассы составляет 4,81 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составляет 22,03% Арифметическая сумма приростов биомассы при раздельной подаче стимуляторов составляет 9,97%
Пример 9.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-744 /ЦМПМ-У-808/ выращивают по примеру 1 в течение 22 ч. В питательную среду добавляют в качестве стимулятора роста: гибберсиб в количестве 1·10^-12% и N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевую соль в количестве 1·10^-12 мас. В результате получают дрожжи с концентрацией биомассы 5,23 г/л. В контрольном опыте, т.е. без подачи стимуляторов концентрация биомассы составляет 4,81 г/л. При подаче лишь 1·10^-12% гибберсиба концентрация биомассы составляет 4,97% г/л, а при подаче лишь 1·10^-12% N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли в количестве 1·10^-12% концентрация биомассы составляет 4,95 г/л. Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составляет 8,73% при подаче лишь 1·10^-12% гибберсиба 3,32% а лишь 1·10^-12% N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли 2,91%
Пример 10.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-744 /ЦМПМ-У-808/ выращивают по примеру 1 в течение 22 ч. В питательную среду добавляют в качестве стимулятора роста гибберсиб в количестве 1·10^-13 мас. и N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевую соль в количестве 1·10^-13% Концентрация биомассы составляет 4,87 г/л; при подаче лишь 1·10^-13% гибберсиба 4,84 г/л, при подаче лишь 1·10^-13% N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли 4,83 г/л; без подачи стимуляторов - 4,81 г/л; т.е. во всех случаях подачи стимуляторов концентрация биомассы примерно на уровне контроля.

Пример 11.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-899 выращивают при периодическом режиме в аппарате, снабженном эжекционной мешалкой, работающей со скоростью 1200 об/мин, рабочим объемом 5 л, при pH 4,0, температуре 32^oC.

Питательная среда имеет следующий состав, г/л: H₃PO₄ /70% / 2,6; /NH₄/₂SO₄ /20%/ 8,0; KCl 1,27; MgSO₄·7H₂O 0,91, FeSO₄·7H₂O 0,174; ZnSO₄·7H₂O
0,038; MnSO₄·7H₂O 0,038; парафин 20 г/л. В питательную среду с начальной концентрацией биомассы 2 г/л добавляют 130 мл парафина и в качестве стимулятора добавляют гибберсиб и N-трис/гидроксиэтил/аммониевую соль парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-9 мас. При этом получают биомассу с концентрацией 19,15 г/л, выход биомассы 96,91% удельная скорость роста составляет 0,155 ч^-1, содержание белка 45,5% В контрольном опыте /без добавления стимуляторов/ концентрация биомассы составляет 18,05 г/л; выход биомассы 91,34% удельная скорость роста составляет 0,092 ч^-1, содержание белка в биомассе 37,0% при добавлении лишь N-трис/гидроксиэтил/ аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-9% концентрация биомассы составляет 18,25 г/л, выход биомассы составляет 92,35% удельная скорость роста 0,12 ч^-1, содержание белка 42,0% при добавлении гибберсиба в количестве 1·10^-9% концентрация биомассы составляет 18,67 г/л, выход биомассы 94,48% удельная скорость роста составляет 0,138 ч^-1, содержание белка в биомассе 43,0%
Пример 12.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-899 /ЦМПМ-У-262/ выращивают при непрерывном режиме в аппарате, снабженном эжекционной мешалкой, работающей со скоростью 1200 об/мин, рабочим объемом 5 л, при pH 4,0, температуре 32^oC, на питательной среде по примеру 11. В питательную среду добавляют непрерывно 2,59% парафина и в качестве стимулятора гибберсиб и N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-8 мас. При этом получают биомассу с концентрацией 20,2 г/л. Выход биомассы по парафину составляет 102,6% Содержание белка в биомассе 50,9% В контрольном опыте /без добавок стимуляторов/ концентрация биомассы составляет 18,01 г/л; выход биомассы составляет 91,51% содержание белка составляет 44,4% При подаче лишь 1·10^-8% гибберсиба концентрация биомассы составляет 18,51 г/л /выход биомассы 94,05%/, содержание белка 45,1% При подаче лишь 1·10^-8% N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-8% концентрация биомассы составляет 19,02 г/л /выход биомассы 96,64% /, содержание белка составляет 45,9% Прирост биомассы при совместной подаче стимуляторов составил 12,16% сумма приростов биомассы при раздельной подаче стимуляторов составляет 8,39%
Пример 13.

Дрожжи C. maltosa ВСБ-899 выращивают на минеральной среде по примеру 11. В питательную среду добавляют непрерывно 2,5 об. парафина; в качестве стимулятора роста добавляют гибберсиб и N-трис/2-гидроксиэтил/ аммониевую соль парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-6 мас. Выращивание дрожжей ведут при температуре 32 34^oC, рН 4,0 4,2, со скоростью разбавления среды 0,25 ч^-1. Концентрация биомассы составляет 18,7 г/л, выход биомассы по парафину составляет 98,4% В контрольном опыте /без добавок стимуляторов/ концентрация биомассы составляет 18,2 г/л; выход 95,8% при добавлении лишь 1·10^-6% гибберсиба концентрация биомассы составляет 18,4 г/л, выход биомассы составляет 96,84% при добавлении лишь 1·10^-6% N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли /контроль по прототипу/ концентрация биомассы составляет 18,6 г/л, выход биомассы составляет 97,90%
Пример 14.

Дрожжи С. maltosa ВСБ-899 выращивают на минеральной среде по примеру 11. В питательную среду добавляют 2,5% парафина; в качестве стимулятора роста добавляют гибберсиб и N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевую соль парахлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве по 1·10^-5 мас. Концентрация биомассы составляет 18,0 г/л, выход биомассы составляет 94,73% В контрольном опыте /без добавок стимуляторов/ концентрация биомассы составляет 18,2% г/л; выход биомассы составляет 95,8% При добавлении лишь 1·10^-5% гибберсиба концентрация биомассы составляет 17,5 г/л, выход биомассы составляет 92,1% При добавлении лишь 1·10^-5% N-трис/2-гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты концентраций биомассы составляет 18,7 г/л, выход биомассы составляет 98,42%
Пример 15.

Дрожжи Candida maltosa ВСБ-899 выращивают непрерывно в промышленном ферментере с рабочим объемом 450 м³ при pH 4,0 4,2, при 32 - 34^oC, расходе воздуха 106 м³/м³·ч на среде с очищенным жидким парафином при расходе на 1 т дрожжей следующих компонентов, кг: аммофос 119, калий хлористый 54, магний сернокислый /эпсомит/ 26, железный купорос 7, цинковый купорос 4,5; марганец сернокислый 2,5.

В качестве стимулятора подают гибберсиб в течение одних суток в количестве 2,5 г/ферментер /1·10^-7%/, а в течение следующих суток подают 1,3 г N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты.

Расход парафина на 1 т дрожжей составляет 917 кг, выход биомассы 109,05% Производительность ферментера составляет 41,0 т/сут. Без подачи стимуляторов расход парафина на 1 т дрожжей составляет 1133 кг, выход биомассы 88,25% производительность ферментера составляет 34,4 т/сут. При подаче лишь 1,3 г/ферментер через сутки N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты расход парафина на 1 т дрожжей составляет 1096 кг, производительность ферментера составляет 36,75 т/сутки.

Пример 16.

Бактерии Pseudomonas desmolyticum ВСБ-578 /ЦМПМ-513/ выращивают в колбах при встряхивании на качалке на питательной среде, содержащей фосфорнокислый калий двузамещенный и фосфорнокислый аммоний однозамещенный в концентрации 3 г/л, сернокислый магний и хлористый натрий 0,2 г/л и микроэлементы: сернокислое железо, марганец, цинк в концентрации 0,006 г/л. В качестве источника углерода используют неочищенные жидкие парафины с содержанием н-алканов C₁₃-C₂₆ /94% / и ароматических углеводородов /1,5%/. В 100 мл питательной среды добавляют 0,5 мл парафина, 1·10^-10 мас. гибберсиба и 1·10^-10 мас. N-трис/гидроксиэтил/ аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты. Бактерии выращивают при температуре 32 - 36^oC, pH 6,6 7,2 в течение 24 ч. Концентрация биомассы достигла 3,9 г/л. Выход биомассы от источника углерода составляет 100% При выращивании этих бактерий в контрольных условиях /без введения стимуляторов/ концентрация биомассы составила 3,41 г/л /выход 87,43%/, при введении лишь 1·10^-10% гибберсиба концентрация биомассы составила 3,48 г/л /выход биомассы 89,23%/, при введении лишь 1·10^-10 мас. N-трис/гидроксиэтил/аммониевой соли парахлорфенилтиоуксусной кислоты 3,57 г/л /выход 91,53%/. Увеличение выхода биомассы при совместной подаче стимуляторов составляет 12,5% сумма увеличения выходов биомассы при раздельной подаче стимуляторов составляет 5,9%
Таким образом, как видно из приведенных выше примеров, введение в среду ферментации микроорганизмов в качестве биостимуляторов композиционной смеси препаратов, состоящей из гибберсиба и N-транс/гидроксиэтил/ аммониевой соли n-хлорфенилтиоуксусной кислоты в количестве 1·10^-12 - 1·10^-6 мас. позволит в среднем увеличить на 10 30% выход биомассы, при этом на 4 5% увеличивается содержание белка в биомассе, а удельный расход стимуляторов снижается в 10³ 10⁶ раз, т.е. при использовании композиционной смеси стимуляторов имеет место синергический эффект (отмечается сверхсуммарный прирост биомассы при резком снижении удельного расхода стимуляторов).

При подаче стимуляторов в количестве меньше 1·10^-12% эффект стимуляции незначителен, подача стимуляторов в количестве, большем чем 1·10^-6% нецелесообразна, т.к. эффект стимуляции существенно не возрастает, но увеличивается удельный расход стимуляторов.

Формула изобретения

Способ получения биомассы микроорганизмов в условиях перемешивания и аэрации в питательной среде, содержащей источники азота и углерода, необходимые минеральные соли и стимулятор роста, отличающийся тем, что в ферментационную среду вводят в качестве стимулятора роста клток композиционную смесь, состоящую из гибберсиба и N-трис(гидроксиэтил)аммониевой соли парахлорфенил тиоуксусной кислоты, в количестве 1·10^-6 - 1·10^-12 мас. и при соотношении соответственно (1 1) (2 1), при этом оба стимулятора вводят в процессе выращивания микроорганизмов одновременной или поочередно.