Производные дипептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способы их получения, антигипертоническая фармацевтическая композиция

 

Использование: в медицине для лечения гипертонии. Сущность изобретения - производные дипептидов общей формулы I: , включая таутомерные формы, где n = 0 или 1; R = галоген, OH, SH, SR₄, OR₄, где R₄ - низший алкил или фенил, NHR₅-, где R₅ - фенил или ацетил, ди/низший алкил/ амино, COOH или COO /низший/ алкил; R₁ = OH; /низший/ алкоксил, R₂ = низший алкил, R₃ = галоген, NO₂, (низший) алкил, арил /низший/ алкил или их фармацевтически приемлемые соли, 2 варианта способа их получения; A/ путем взаимодействия соединения II: с дипептидом формулы III: в присутствии N,N-дициклогексилкарбодиимида с последующей в случае необходимости конверсией соединения I, где R = Cl, в соединение I, где R = SH и при необходимости гидролизом, солеобразованием эфиров или диэфиров, таким образом полученных; B/ путем взаимодействия соединений II': , где X = галоген, остальные значения указаны выше, кроме R = SH, с дипептидом III, процесс ведут в присутствии органического основания, если R₁ = OH, то в присутствии неорганического основания и в случае необходимости с последующим превращением соединений I, где R = Cl, в соединение I, где R = SH, и при необходимости гидролизом и/или солеобразованием эфиров или свободных кислот при этом полученных; и - антигипертоническая фармацевтическая композиция, включающая в качестве активного компонента I в эффективном количестве. 4 с. и 6 з.п. ф-лы, 6 табл.

Изобретение относится к новым N-( α -замещенным пиридинил)кар6онил-дипептидам, которые обладают активностью в качестве ингибиторов фермента, способствующего превращению ангиотенсина. Указанные новые производные могут входить наряду с пригодными для фармацевтического использования носителями в состав фармацевтических композиций, которые можно использовать при лечении гипертонии и других сердечно-сосудистых заболеваний, патофизиология которых включает систему ренин-ангиотенсин-альдостерон.

В 70-х годах в фармацевтической терапии повышенного артериального давления наметились значительные успехи, связанные с разработкой средств, обладающих прямым воздействием на системы ренин-ангиотенсин и калликрен-кинин, и в особенности после синтеза первых соединений, эффективно ингибировавших ферментативное превращение декапептида ангиотенсина I в мощный вазопрессор (средство сужения сосудов) ангиотенсин II, т.е, соединений, действующих в качестве ингибиторов фермента, способствующего превращению ангиотенсина (АСЕ, ФПА). Подобные важные с физиологической точки зрения ферменты также способствуют распаду сосудорасширяющего пептида брадикинина. При экспериментах на животных и человеке обнаружено, что некоторые ингибиторы ФПА могут ингибировать сосудосуживающее воздействие введенного внутривенно ангиотенсина I и обладают активностью против повышенного давления при испытаниях на животных моделях и пациентах, страдающих гипертонией. Продемонстрирована также их пригодность для лечения хронических заболеваний сердца.

В патенте США [1] описаны N-ацилпроизводные альфа-аминокислот, являющиеся эффективными ингибиторами ФПА, которые в этом качестве могут быть полезными для лечения гипертонии. Более конкретно указанные соединения являются меркапто-производными N-ацил-L-пролина, включая в качестве наиболее представительного члена данного ряда, например, D-3-меркапто-2-метилпропаноил-L-пролин или каптоприл, первое противогипертоническое средство, основанное на ингибировании ФПА и пригодное для орального применения, ставшее всемирно распространенным лекарством.

Вторым важным успехом в данной области, хотя и основанном на совершенно другом подходе, является разработка соединений, описанных в европейской патентной заявке [2] которые представляют собой карбоксиалкил-дипептидные производные, наиболее характерными представителями которых являются эналаприл и лизиноприл.

Более полное понимание структуры ФПА и соответствующих существенных структурных особенностей потенциальных ингибиторов, а также интерес к получению новых соединений, обладающих различной активностью, кинетикой и/или токсичностью, привели к разработке новых классов ингибиторов ФПА. Из ряда исследований соотношения между активностью и структурой был сделан вывод о том, что эффективное ингибирование фермента может быть достигнуто только в случае молекулы, которая содержит по меньшей мере три отчетливо характерных области или зоны, отвечающие приведенной ниже общей структуре:
Зона A обычно содержит карбоксильную группу в альфа-положении, которая прочно связывается с катионной зоной структуры фермента. В ряде исследований обнаружено, что L-пролин является оптимальной структурой для этой области или части, хотя возможно также присутствие его пирролидинового кольца в модифицированном виде.

Зона B должна содержать функциональную группу со специфической активностью в отношении связывания с катионом Zn++ расположенном в "активной зоне" фермента. Группа связывания цинка, обычно кислотного характера, может являться меркапто-группой (как в случае каптоприла и его аналогов) или карбоксильной группой (как в случае эналаприлата, лизиноприла и их аналогов), а также любой группой-предшественником, которая может давать активную группу при метаболическом превращении. В число примеров ингибиторов ФПА с группами-предшественниками входят ацилтио-производные алацеприл и пивалоприл и карбоксильные сложные эфиры эналаприл и периндоприл. Некоторые классы ингибиторов содержат другие кислотные группы в зоне B, например такие как -P(O)(OH)- или -P(O)(OH)-O- как в свободной форме, так и в форме сложных эфиров. В любом случае все известные лиганды для цинка обязательно связываются с алкильной группой или в некоторых случаях с циклоалкильной группой, но никогда не являются частью ароматической структуры (М.Дж. Вайврэт, А.А. Пэтчетт, "Medicinal Research Reviews", 6, 483-531, 1985).

Зона C играет роль мостика между активными областями зон A и B и несомненно должна удовлетворять определенным стереохимическим требованиям, поскольку наиболее активные соединения содержат звено, производное от L-аминокислоты (например, L-аланина или L-лизина) в соответствующей дипептидной структуре. В группе типа каптоприла аналогичная стереохимическая структура может существовать при атоме C-2 2-метилпропаноильного звена.

Подобная упрощенная общая модель применима к практически всем различным структурам известных ингибиторов ФПА, хотя специальные или дополнительные требования должны удовлетворяться для каждого из конкретных химических вариантов. В этом контексте наиболее известны соотношения между структурой и активностью для рядов меркапто-ацил-аминокислота (группа каптоприла) и карбоксиалкил-дипептид (группа аналогов эналаприла/лизиноприла). Хотя для каждой из указанных трех структурных частей осуществлены системные изменения, следует отметить, что для обоих из указанных общих рядов различные попытки найти связывающие цинк-группы, отличные от меркапто- или карбоксильных групп, приводили к получению вообще неактивных соединений или по меньшей мере к значительной потере активности получаемых соединений. В частности, в классе дипептидных производных, эффективных в качестве ингибиторов ФПА, использование N-замещенных карбоксамидов или тиоамидов в качестве лигандов для цинка согласно имеющемуся уровню техники не предусматривается.

Настоящее изобретение предусматривает новые дипептидные производные, обладающие активностью в отношении ингибирования ФПА и имеющие в качестве основной и отличительной характеристик структуру, состоящую из пиридинового кольца, с которым связана функциональная группа, обладающая потенциальной возможностью к связыванию цинка, конкретно в качестве альфа-заместителя, например группа OH, SH₃, NH₂ и COOH или функционально связанная с ними группа или группа-предшественник. Подобная альфа-замещенная пиридиновая структура, связанная через карбоксильную группу с концевой аминогруппой дипептида, располагается в части общей структуры, соответствующей обсужденной выше зоне B. В качестве зоны A выбрана подструктура L-пролина, при наличии аминокислоты, например L-аланина в связующей зоне C.

Вследствие указанных специфических структурных отличий дипептидные производные не могут быть включены и не попадают ни под одну из категорий общих классов или любых конкретных химических рядов, описанных к настоящему времени согласно имеющемуся уровню техники в качестве ингибиторов ФПА.

В пределах общего класса дипептидов соединения обладают отчетливым отличием от карбоксиалкильных дипептидов, поскольку последние содержат арилкарбонилдипептидную структуру. Указанная структурная группировка является весьма необычной для области природных или синтетических ингибиторов ФПА. Кроме того,(альфа-замещенный пиридинил) карбонильные производные дипептидов не описаны и даже не предполагаются в литературе согласно имеющемуся уровню техники, что можно установить, например, из классических обзоров в этой области, составленных Э. В.Петрилло и М.А.Ондетти ("Medicinal Research Reviews", 2, 1-41, 1982) и отмеченной выше работы М.Дж.Вайврэта и А.А.Пэтчетта.

Далее с практической точки зрения следует принять во внимание, что карбоксиалкильные дипептидные ингибиторы согласно имеющемуся уровню техники содержат асимметрический атом углерода (в зоне B) в дополнение к двум асимметрическим атомам углерода в дипептидной структуре, что делает их синтез очень сложным и/или приводит к получению низких выходов вследствие необходимости разделения оптических изомеров неочищенных продуктов. Поскольку соединения согласно настоящему изобретению не имеют подобных дополнительных асимметрических атомов углерода, они могут быть легко получены с хорошими выходами посредством введения пиридинильного карбонильного остатка в целевой дипептид через его концевую группу NH.

В самом широком аспекте настоящее изобретение относится к новым производным дипедтидов общей формулы (I):

включая таутомерные формы,
где n представляет собой 0 или 1;
R представляет собой OH, SH, галоген, OR₄, SR₄;
где R₄- низший алкил или фенил, NHR₅, где R₅- фенил, ацетил, и (низший алкил)амино; COOH, COO(низший)алкил;
R₁ представляет собой OH, (низший)алкоксил,
R₂ низший алкил;
R₃ галоген, NO₂, (низший)алкил, арил-(низший)алкил или их фармацевтически приемлемым солям.

R₃ в формуле (I) может занимать любое свободное положение в пиридиновом кольце.

Аналогичным образом замещенное пиридиновое кольцо может быть связано с карбонил-дипептидной подструктурой через альфа-, бета- или гамма-положения пиридинового кольца, одно из альфа-положений которого уже занято группой R.

В число пригодных для фармацевтического использования солей соединений общей формулы (I), например для случая, когда R₁ представляет собой OH и/или R представляет собой COOH, входят соли щелочных металлов, например натрия или калия, или соли щелочно-земельных металлов, например кальция. В их число входят также соли аммония, например соли с гидратом окиси аммония, замещенных аминов или основных аминокислот.

Как хорошо известно специалистам в области азотсодержащих гетероциклов, производные пиридина, альфа-замещенные по гидроксилу или меркапто-группам, обычно существуют в таутомерных формах, т.е. в виде 2-пиридинонов и 2-пиридинтионов соответственно, т.е. в виде особых типов циклических карбоксамидов и тиоамидов. С этой точки зрения следует понимать, что соединения общей формулы (I), в которой R представляет собой OH или SH, могут также проявлять таутомерию, при которой соответствующие амидные формы являются обычно основными.

Соединения общей формулы (I) являются ингибиторами фермента, способствующего превращению ангиотенсина, и могут использоваться в качестве средств понижения давления (противогипертонических средств) при лечении млекопитающих, включая человека. Их можно использовать также при лечении хронических заболеваний сердца и других заболеваний, имеющих патофизиологическую связь с системой ренин-ангиотенсин-альдостерон. Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения включает фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение общей формулы (I) в комбинации с одним или несколькими пригодными для фармацевтического использования носителями или эксципиентами и возможно дополнительно добавками и/или дополнительными компонентами и т. п. в жидкой или твердой форме и предпочтительно в виде единичных дозировок. Композиции согласно настоящему изобретению наиболее удобно использовать при пероральном способе введения, хотя возможны также и другие способы, например парэнтеральный, ректальный или введение посредством ингаляций, которые в некоторых случаях могут быть даже более предпочтительными. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены в соответствии с обычными способами, например, в результате простого смешивания компонентов желаемой композиции. В число подходящих носителей или эксципиентов входят обычные агенты подобного рода, хорошо известные для специалистов в данной области. Перроральное введение наиболее предпочтительно осуществляется с использованием композиций в виде таблеток (с покрытием или без покрытия), капсул или жидкостей, например растворов, сиропов или суспензий. Твердые рецептуры для перорального использования могут быть как рецептурами обычного типа, т.е. быстрого действия, так и обладать характеристиками пролонгированного действия.

С целью лечения гипертонии и/или возможно других заболеваний, для лечения которых может оказаться полезной биологическая активность указанных новых соединений согласно настоящему изобретению, уровень дозировки лежит в пределах от 2 до 1000 мг/сут на пациента, в виде одиночных или дробных доз, хотя индивидуальная дозировка для каждого пациента зависит от активности конкретного используемого соединения, от типа и степени развития заболевания, а также от таких индивидуальных особенностей пациента, как вес тела и пол, а также от прочих факторов, обычно понятных специалисту в данной области. При лечении гипертонии доза предпочтительно лежит в пределах от 5 до 500 мг/сут на пациента.

Соединения согласно настоящему изобретению можно применять также в комбинации с другими активными с фармацевтической точки зрения соединениями, например с противогипертоническими средствами или другими средствами, применяемыми при сердечно-сосудистой терапии, например с диуретиками или бета-адренергическими блокирующими средствами. Указанные прочие активные соединения могут также быть введены в состав фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению вместе с новыми соединениями общей формулы (I).

Соединения общей формулы (I) могут быть получены в соответствии с одним или несколькими из числа описанных ниже способов. Для специалиста в данной области очевидно, что можно адаптировать для этой цели также и другие синтетические способы, хорошо известные в области пептидной химии.

Первый способ (способ A) включает проведение реакции сочетания карбоновой кислоты общей формулы (IIa) с дипептидом общей формулы (III):

в которых R, R¹ R² и n имеют тот же смысл, что и ранее, но за исключением COOH в случае R и OH в случае R¹, в присутствии предпочтительно эквимолярного количества подходящего агента сочетания, например карбодиимида и особо предпочтительно N,N'-дициклогексилкарбодиимида (ДЦК). Обычно реакцию осуществляют в подходящем органическом растворителе основного характера при комнатной температуре.

Дипептид общей формулы (III) предпочтительно используют в форме сложного эфира, например сложноэфирного производного низшего алкила. Свободная аминная группа может быть при желании переведена в соль, например,посредством соляной кислоты. В число примеров подходящих основных органических растворителей входят пиридин и смеси третичных алифатических аминов (например, триэтиламина) с инертным, предпочтительно галогензамещенным растворителем (например хлороформом или хлористым метиленом). Исходя из предпочтительного этерифицированного дипептида получают целевое соединение общей формулы (I) в виде моноэфира (в L-пролиновой подструктуре) в случае, когда R представляет собой группу, отличную от COOR4, или в виде диэфира, когда используют соединение общей формулы (IIa), для которого R= COOR4, (R4 алкил, арил).

Следует уяснить, что в случае, когда исходный дипептид имеет дополнительную аминогруппу, т.е. когда R2 представляет собой амино(низший алкил), указанная дополнительная аминогруппа должна присутствовать в защищенной форме, например, ее можно защитить посредством бензилоксикарбонильной группы или с применением любой другой группы, которую можно легко удалить впоследствии согласно стандартным методикам, известным специалисту в данной области.

Согласно варианту способа A можно использовать практически ту же методику, но с заменой дипептида общей формулы (III) на этерифицированную аминокислоту общей формулы HN-CH(R2)-COR1. Полученный таким способом сложный эфир N-(альфа-замещенный пиридинил)-карбониламинокислоты можно гидролизовать и ввести получающуюся при этом свободную аминокислоту в реакцию со сложным эфиром L-пролина по типу ДЦК или согласно любому другому способу, обычно используемому для осуществления реакции сочетания аминокислот.

Определенные соединения общей формулы (Ia), для которых R5 представляет собой низший алкил, также могут быть получены в соответствии со способом А или его разновидностями. В этом случае в качестве исходного продукта используют соответствующую 1-алкил -1, α -дигидро- a -(оксо или тиоксо)пиридинкарбоновую кислоту.

Соединения общей формулы (I) могут быть получены также в результате реакции ацилгалогенида общей формулы (IIb) с дипептидом общей формулы (III) или, например, его хлоргидрата (способов B):

где X представляет собой галоген, например хлор, а R, R1, R2, R3 и n имеют тот же смысл, что и ранее. В случае, когда R1 имеет значение, отличное от OH, реакцию предпочтительно осуществляют в присутствии органического основания, например триэтиламина, тогда как в случае, когда R1 представляет собой OH, используют неорганические основания, например гидраты окислов или карбонаты щелочных металлов или их смеси.

В случае, когда исходный дипептид общей формулы (III) имеет произвольную карбоксильную группу и используется органическое основание (способов B-a), реакцию обычно осуществляют в подходящем неполярном растворителе, например хлороформе, хлористом метилене или диоксане. В случае, когда указанный дипептид содержит свободную карбоксильную группу (способов B-b ), предпочтительным является использование двухфазовой системы. Указанная двухфазовая система обычно содержит водный раствор неорганического основания и раствор ацилгалогенила в соответствующем органическом растворителе, например ацетонитриле, в качестве второй фазы.

В случае, когда исходные соединения общей формулы (IIa) или (IIb) имеют две вицинальных группы COOH или производные от указанных групп, т.е. когда R представляет собой COOH или COOR4, и COOH или COX занимают положение 3, способы A и B могут приводить к образованию циклических имидов, если условия реакции (температура, время проведения реакции) подобраны таким образом, что они благоприятствуют внутримолекулярной циклизации продуктов реакции. Предпочтительными являются мягкие условия реакции, в особенности низкие температуры, поскольку они сводят к минимуму появление побочных продуктов циклизации.

Как и в случае способа A, когда способ B применяют для дипептида общей формулы (III), где R2 представляет собой амино-низший алкильную группу, указанная дополнительная аминогруппа должна быть предварительно защищена посредством легко удаляемой группы.

Способ B (a или b) можно также использовать для получения соединений общей формулы (Ia), где R5 представляет собой низший алкил. В этом случае дипептид общей формулы (III) вводят в реакцию с соответствующим 1-алкил-1, α -дигидро- a -(оксо- или тиоксо) пиридинкарбонилгалогенидом.

Специфические представители подгруппы N-( a -меркаптопиридинил)карбонил- дипептидов, т. е. соединения общей формулы (I), в которой R представляет собой SH (или общей формулы (Ia), в которой A представляет собой серу и R5 представляет собой водород), также могут быть получены с высокими выходами посредством способа C, который включает нагревание соединения общей формулы (I), в которой R представляет собой галоген, в присутствии тиосульфата натрия в подходящей водно-спиртовой среде, например в смесях воды и 1,2-пропилен-гликоля.

В случае любого из описанных выше способов A-C, когда новые соединения согласно настоящему изобретению получают в виде моноэфиров (в пролиновом остатке) или диэфиров (альфа-замещенных по пиридиновому кольцу карбоксильной сложноэфирной группой), т. е. соединений общей формулы (I), в которой либо только одна COR1, либо как COR1, так и R представляет собой сложноэфирные группы карбоновой кислоты, причем указанные соединения могут быть переведены в соответствующие свободные моно- или дикарбоновые кислоты посредством гидролиза, например, гидратом окисла щелочного металла в полярной среде. Типичные гидролитические условия включают использование гидрата окиси калия, растворенного либо в самом по себе низшем алифатическом спирте (например, содержащем от 1 до 3 атомов углерода), либо в его смеси с водой.

Предпочтительным спиртом является этанол.

Пиридинкарбоновые кислоты общей формулы (IIa), в особенности те из них, для которых R галоген, являются промышленными продуктами или же могут быть получены в соответствии с хорошо известными синтетическими способами. Галогенангидриды кислот общей формулы (IIb) могут быть легко получены согласно стандартным способам исходя из соответствующих кислот общей формулы (IIa).

Исходные дипептиды общей формулы (III) также являются промышленными продуктами или же могут быть синтезированы согласно способам, применяемым в химии пептидов.

Конкретные варианты согласно настоящему изобретению иллюстрируются приведенными ниже примерами, не ограничивающими формулу изобретения.

Спектры ЯМР H-1 и C-13 регистрировали соответственно при 199,975 и 50,289 мГц соответственно, на спектрофотометре "Вариан ХР-200". Значения химических сдвигов приведены в единицах "б" относительно тетраметилсилана, использованного в качестве внутреннего стандарта. Анализ методом тонкослойной хроматографии проводили с использованием пластинок с силикагелем "Мерк" 60 F-254 с предварительно нанесенным покрытием, пятна регистрировали при помощи УФ-излучения. В тонкослойной хроматографии (ТСХ) использовали следующие растворители: А:этилацетат, B: смесь этилацетат-ацетон 3:1;С: ацетон, D: абсолютированный этанол, E: уксусная кислота в этаноле, 3% F: уксусная кислота в этаноле, 5% конкретный тип растворителя указан в скобках в каждом из случаев.

Пример 1. Синтез этилового эфира N-[(6-хлор-2-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-лина ( соединение 1).

Раствор хлоргидрата этилового эфира L-аланил-L-пролина (6 г, 0,024 моль) и триэтиламина (7,4 мл) в безводном хлористом метилене (120 мл) охлаждают на бане со льдом. К раствору добавляют по каплям при перемешивании раствор 6-хлор-2-пиридинкарбонилхлорида (5,1 г, 0,029 моль) в 30 мл безводного хлористого метилена. После завершения введения компонентов раствор перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре и разбавляют реакционную смесь 400 мл хлористого метилена. Полученный раствор промывают трижды порциями по 200 мл 10%-ного водного раствора бикарбоната натрия и дважды порциями по 200 мл воды. Органический слой сушат над безводным сульфатом магния и отгоняют растворитель при пониженном давлении, получая указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла (выход 99%).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,24 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,47 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂ из пролина), 3,70 (мультиплет, 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,15 (квартет, J 7,2 Гц, 2H₃, CH₂ из этилового эфира), 4,50 (мультиплет), 1H, CH из пролина), 4,90 (мультиплет, 1H, CH из аланина, превращающийся в квартет с J 6,8 Гц после встряхивания с дейтерированной водой), 7,40 (двойной дублет, J1 7 Гц, J2 1 Гц, 1H, ароматический), 7,75 (двойной дублет, J1 J2 7 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,02 (двойной дублет, J17Гц, J2 1 Гц, 1H, ароматический), 8,50 (широкий дублет, 1H, NH, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой).

Спектр ЯМР C-13 (CDCl₃): 13,9 (CH₃ этилового эфира), 17,7 (CH₃ аланина, 1 24,8 (N-CH₂-CH₂ пролина), 28,8 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 46,7 (CH аланина и N-CH₂ пролина), 58,9 (CH пролина), 61,1 (CH этилового эфира), 120,9 (ароматический C-3), 127,2 (ароматический C-5), 139,9 (ароматический C-4), 150,2 (ароматический), 150,4(ароматический), 162,5 (CO), 171,0 (CO), 172,1 (CO).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,46.

Аналогичным образом синтезируют следующие соединения: этиловый эфир N-[(2-хлор-3-пиридинил)карбонил]-L-аланина-L-пролина (соединение 2).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,28(триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,54 (дублет J 6,8 Гц, С 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂ из пролина), 3,73 (мультиплет 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,19 (квартет J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,54 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,96 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,34 (двойной дублет, J1 7,7 Гц, J2 4,8 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,55 ( широкий дублет, 1H, NH), 8,05 (двойной дублет, J1 7,7 Гц, J2 2 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,47 (двойной дублет, J1 4,8 Гц, J2 2 Гц, 1H, ароматический C-6).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,37.

Этиловый Эфир N-[(2-хлор-4-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролина (соединение 3).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,27 (триплет J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,50 (дублет, J 6,9 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,77 (мультиплет с 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,22 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,57 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,91 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,51 (двойной дублет, J1 5,1 Гц, J2 1 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,66 (дублет, J 1 Гц, 1H, ароматический C-3), 8,09 (дублет, J 1 Гц, 1H, NH), 8,43 (дублет, J 5,1 Гц, 1H, ароматический C-6).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,47.

Этиловый эфир N-[(6-хлор-3-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролина (соединение 4).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,27 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,48 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,15 (мультиплет, 4Н, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,70 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,17 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,54 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,94 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,32 (дублет, J 8,4 Гц, 1H, ароматический C-5), 8,03 (двойной дублет J1 8,4 Гц, J2 2,4 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,78 (дублет, J 2,4 Гц, 1H, ароматический C-2).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,46.

Пример 2. Синтез этилового эфира N-[(1,2-дигидро-2-тиоксо-4-пиридинил)-карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 5).

К раствору этилового эфира N-[(2-хлор-4-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 3) (4,5 г, 0,013 моля) в 45 мл смеси 10:1 1,2-пропиленгликоль: вода добавляют 15,2 г тиосульфата натрия и нагревают полученную смесь при кипении с обратным холодильником в течение 15 ч. Полученную реакционную смесь разбавляют 100 мл воды и экстрагируют 4 порциями по 100 мл хлористого метилена. Органический слой промывают трижды порциями по 100 мл воды, сушат над безводным сульфатом магния и отгоняют растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток очищают кристаллизацией из смеси ацетон:петролейный эфир, получая указанный в заголовке продукт в виде твердого желтого цвета (выход 85%).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,27 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,68 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,75 (мультиплет, 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,28 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,55 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,75 (мультиплет, 1H, CH из аланина, превращающийся в квартет с J 6,8 Гц, после встряхивания с дейтерированной водой), 6,78 (двойной дублет, J1 6,6 Гц, J2 1,6 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,31 (дублет, J 6,6 Гц, 1H, ароматический C-6), 7,88 (дублет, J 166 Гц, 1H, ароматический C-3), 8,70 (широкий дублет, 1H, амидный NH, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой).

Спектр ЯМР С-13 (CDCl₃): 13,9 (CH₃ этилового эфира), 15,5 (CH₃ аланина), 24,7 (N-CH₂-CH₂ пролина), 28,7 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 46,8 (N-CH пролина), 48,1 (CH аланина), 59,2 (CH пролина), 61,2 (CH этилового эфира), 111,8 (ароматический C-5), 130,9 (ароматический C-3), 137,1 (ароматический C-6), 139,7 (ароматический C-4), 165,0 (CO), 171,7 (CO), 172,9 (CO), 178,7 (CS).

Тонкослойная хроматография (С): Rf0,50.

Аналогичным образом синтезируют следующие соединения.

Этиловый эфир N-[(1,2-дигидро-2-тиоксо-3-пиридинил)-карбонил] -L-аланин-L-пролина (соединение 6).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,21 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,54 (дублет, J 6,9 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,75 (мультиплет 2H, N-CH₂ из пролина), 4,12 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,55 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,85 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 6,72 (двойной дублет, J1 6,1 Гц, J2 7,6 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,65 (двойной дублет J1 6,1 Гц, J2 18,7 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,46 (двойной дублет J1 7,6 Гц, J2 1,7 Гц, 1H, ароматический C-6), 11,150 (широкий дублет, 1H, NH).

Тонкослойная хроматография (С): Rf 0,47.

Этиловый эфир N-[(1,2-дигидро-6-тиоксо-3-пиридинил)-карбонил] -L-аланин-L-пролина (соединение 7).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,17(триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,51 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,72 (мультиплет, 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,13 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,50 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,72 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,19 (дублет, J= 9,0 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,56 (двойной дублет, J1 9,0 Гц, J2 1Гц, 1H, ароматический C-4), 7,83 (дублет, J 2Гц, 1H, ароматический C-2), 8,27 (широкий дублет, 1H, NH).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,55.

Пример 3. Синтез этилового эфира N-[(2-этоксикарбонил-2-пиридинил)-карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 8).

К раствору 4,31 г(0,022 моль) 6-этоксикарбонил-2-пиридинкарбоновой кислоты в 100 мл безводного пиридина добавляют при перемешивании 5,5 г (0,022 моль) хлоргидрата этилового эфира L-аланил-L-пролина и 4,6 г N,N'-дициклогексилкарбониимида. Раствор перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре, объемный остаток дициклогексилмочевины отфильтровывают и промывают ацетоном. Растворитель из фильтрата и промывной фракции отгоняют при пониженном давлении и полученный неочищенный продукт подвергают очистке хроматографированием на колонке с силикагелем с использованием смеси хлороформ: ацетон (10:1) в качестве элюента. Выделенный твердый продукт кристаллизуют из смеси ацетон-изопропиловый эфир-петролейный эфир, получая 4,27 г указанного в заголовке продукта в виде игольчатых кристаллов (выход 53%).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,28 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из алифатического эфира), 1,46 ( дублет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из ароматического эфира), 1,55 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,15 (мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,75 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,21 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из алифатического сложного эфира), 4,48 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из ароматического сложного эфира), 4,53 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 5,00 (мультиплет, 1H, CH из аланина, превращающийся в квартет с J 6,8 Гц после встряхивания с дейтерированной водой), 7,99 ( двойной дублет, J1 J2 7,6 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,22 (двойной дублет, J1 7 Гц, J2 1 Гц, 1H, ароматический), 8,33 (двойной дублет, J1= 7,6 Гц, J2 1 Гц, 1H, ароматический), 8,70 (широкий дублет, 1H, амидный NH, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой).

Спектр ЯМР C-13(CDCl₃): 14,1 (CH₃ этилового эфира), 14,2 (CH этилового эфира), 17,8 (CH₃ аланина), 24,9 (N-CH₂-CH₂ из пролина) 29,0 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 46,9 (CH аланина и N-CH₂ пролина), 59,3 (CH пролина), 61,3 (CH этилового эфира), 62,4 (CH₂ этилового эфира), 125,5(ароматический, 127,6 (ароматический), 138,7 (ароматический C-4), 147,6 (ароматический), 150,1 (ароматический), 163,5 (CO), 115,0 (CO), 171,2 (CO), 172,4 (CO)
Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,63.

Аналогичным образом синтезируют следующие соединения.

Этиловый эфир N-[(2-метоксикарбонил-5-пиридинил)-карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 9).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,26 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из алифатического этилового эфира), 1,51 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,80 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,03 (синглет, 3H, CH₃ ароматического метилового сложного эфира), 4,217 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH из этилового эфира), 4,55 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,99 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 8,12 (дублет, J 8,4 Гц, 1H, ароматический C-3), 8,26 (двойной дублет, J1 8,4 Гц, J2 2 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,43 (дублет, J 7,4 Гц, 1H, NH), 9,12 (дублет, J 2,0 Гц, 1H, ароматический C-6).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,36.

Этиловый эфир N-[(2-метоксикарбонил-3-пиридинил)-карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 10).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1.23 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,50 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,70 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 3,94 (синглет, 3H, CH₂ метилового сложного эфира), 4,15 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH из этилового эфира), 4,50 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,80 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,0 (широкий дублет, 1H, NH), 7,45 (двойной дублет, J1 7,8 Гц, J2 4,7 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,84 (двойной дублет, J1 7,8 Гц, J2 1,7 Гц, 1H, ароматический C-4), (дублет, J 8,4 Гц, 1H, ароматический C-3), 8,70 (двойной дублет, J1 4,7 Гц, J2= 1,7 Гц, 1H, ароматический C-6).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,27.

Этиловый эфир N-[(5-бром-1,2-дигидро-2-оксо-3-пиридинил)-карбонил]-L-аланил- -L-пролина (соединение 11).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,28 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,53 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,75 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,20 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,60 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,88(мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,71 (дублет, J 2,8 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,48 (дублет, J 2,8 Гц, 1H, ароматический C-6), 10,10 (широкий дублет, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (B): Rf 0,76.

Этиловый эфир N-[(1,2-дигидро-2-оксо-4-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 12).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,21 (триплет, J= 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,47 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,75 (мультиплет, 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,12 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,50 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,80 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 6,51 (двойной дублет, J1= 6,7 Гц, J2 1,2 Гц, 1H, ароматический C-5), 6,97 (дублет, J 1,2 Гц, 1H, ароматический C-3), 7,25 (дублет, J 6,7 Гц, 1H, ароматический C-6), 8,46 (широкий дублет, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (D): Rf 0,49.

Этиловый эфир N-[(l,2-дигидро-6-оксо-2-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 13).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,22 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,48 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,57 (мультиплет, 2Н, N-CH₂ из пролина), 4,17 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,48 (мультиплет, 1H, CH из пролина) 4,90 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 6,73 (двойной дублет, J1 9,2 Гц, J2 0,8 Гц, 1H, ароматический C-5), 6,91 (двойной дублет, J1 7,0 Гц, J2 1,0 Гц, 1H, ароматический C-3), 7,44 (двойной дублет, J1 9,0 Гц, J2 7,0 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,46 (широкий дублет, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (С): Rf 0,43.

Этиловый эфир N-[(1,2-дигидро-6-оксо-3-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 14).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,22 (триплет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,40 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,75 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,10 (квартет, J 7,0 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,50 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,85 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 6,34 (дублет, J 9,0 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,80 (дублет, J 8,8 Гц, 1H, ароматический C-4), 7,97 (синглет, 1H, ароматический C-2), 8,65 (дублет, J 6,8 Гц, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (D): Rf 0,50.

Этиловый эфир N-[(2-фенокси-3-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролина (соединение 15).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,15 (триплет, J 7,1 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,30 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 4,30 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,05 (квартет, J 7,1 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,33 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,80 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,21 (мультиплет, 5H, O-фенил), 7,42 (мультиплет, 2H, ароматический), 8,23 (мультиплет, 2H, ароматический), 8,78 (дублет, J 8,0 Гц, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (А): Rf 0,39.

Этиловый эфир N-[(2-фенилтио-3-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролина (соединение 16).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,16 (триплет J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,32 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 1,96 ( мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,69 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,06 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,35 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,72 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,21 (двойной дублет, J1 8,0 Гц, J2 4,8 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,88 (двойной дублет, J1 7,6 Гц, J2 1,8 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,33 (двойной дублет, J1 4,8 Гц, J2 1,8 Гц, 1H, ароматический C-6), 8,87 (дублет, J1 8,0 Гц, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (А) Rf 0,33.

Этиловый эфир N-[(2-фениламино-3-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 17).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,14 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,19 (дублет, J 6,6 Гц,3H, CH₃ из аланина), 1,72 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,70 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,03 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,20 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,56 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,22 (мультиплет, 5H, ароматический), 7,45 (двойной дублет J1 6,0 Гц, J2 4,6 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,60 (дублет, J 8,0 Гц, 1H, 11H), 8,08 (мультиплет, 1H, ароматический), 8,47 (двойной дублет, J1 4,8 Гц, J2 1,4 Гц, 1H, ароматический C-6), 8,91 (синглет, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (А) Rf 0,22.

Этиловый эфир N-[(1,2-дигидро-5-нитро-2-оксо-3-пиридинил)карбонил]-L-аланил- -L-пролина (соединение 18).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,17 (триплет, J 7,1 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,29 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,60 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,12 (квартет, J 7,1 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,32 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,78 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 8,77 (дублет, J 3,3 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,89 (дублет, J3,3 Гц, 1H, ароматический C-6), 10,01 (дублет, J 6,9Гц, 1H, амидный NH).

Тонкослойная хроматография (D): Rf 0,74.

Этиловый эфир N-[(l,2-дигидро-1-метил-2-оксо-3-пиридинил)-карбонил]-L-аланил- -L-пролина (соединение 19).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,16 (триплет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,28 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 ( мультиплет,4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,45 (синглет, 3H, N-CH), 3,60 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,06 (квартет, J 7,2 H Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,31 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,76 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 6,48 (двойной дублет J1 J2 7,0 Гц, 1H, ароматический C-5), 8,06 (двойной дублет, J1 7,0 Гц, J2 2,2 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,29 (двойной дублет, J1= 7,0 Гц, J2 2,2 Гц, 1H, ароматический C-6), 10,23 (широкий дублет, 1H, NH).

Тонкослойная хроматография (D): Rf 0,51.

Этиловый эфир N-[(2-ацетиламино-4-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 20).

Спектр ЯМР-H1 (ДМСО-d6): 1,17 (триплет, J 7,5 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,33 (дублет, J 7,0 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 1,96 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 2,11 (синглет, 3H, CH₃ из ацетиламиногруппы), 3,67 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,07 (квартет, J 7,5 Гц, 2Н, CH₂ из этилового эфира), 4,33 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,72 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,49 (дублет, J 5 Гц, 1H, ароматический C-5), 8,41 (синглет, 1H, ароматический C-3), 8,43 (дублет, J 5 Гц, 1H, ароматический C-6), 8,91 (широкий дублет, 1H, NH, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой), 10,66 (широкий дублет, 1H, NH из ацетиламиногруппы, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой).

Тонкослойная хроматография (В): Rf 0,25.

Пример 4. Синтез этилового эфира N-[(l,2-дигидро-2-оксо-3-пиридинил)-карбонил]-L-аланил-L-пролина (соединение 21).

К раствору хлоргидрата этилового эфира L-аланил-L-пролина (4,0 г, 0,016 моля) и триэтиламина (8 мл) в 200 мл диоксана добавляют по каплям в течение 1 ч при перемешивании, поддерживая комнатную температуру, суспензию 3,0 г, (0,019 молm) 2-оксиникотинилхлорида в 200 мл безводного диоксана. После перемешивания смеси в течение дополнительных 3 ч растворитель отгоняют при пониженном давлении. Полученный таким способом неочищенный продукт растворяют в 500 мл хлороформа и раствор промывают дважды порциями по 100 мл 5%-ного водного раствора карбоната натрия. Органический слой сушат над безводным сульфатом магния и удаляют растворитель при пониженном давлении, получая указанный в заголовке на роторном испарителе. Твердый остаток кристаллизуют из смеси хлористого метилена и изопропилового эфира, получая 3,4 г указанного в заголовке соединения в виде микрокристаллического твердого продукта (выход 64%).

Спектр ЯМР-H1 (CDCl₃): 1,23 (триплет, J 7,2 Гц, 3H, CH₃ из этилового эфира), 1,47 (дублет, J 6,8 Гц, 3H, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,70 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,18 (квартет, J 7,2 Гц, 2H, CH₂ из этилового эфира), 4,50 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,92 (мультиплет, 1H, CH из аланина,превращающийся в квартет c J 6,8 Гц, после встряхивания с дейтерированной водой), 6,44 (двойной дублет, J1 7,4 Гц, J2 6,2 Гц, 1H, ароматический C-5), 7,65 (двойной дублет, J1 6,2 Гц, J2 2,2 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,48 (двойной дублет, J1 7,4 Гц, J2 2,2 Гц, 1H, ароматический C-6), 10,20 (широкий дублет, 1H, амидный NH, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой).

Спектр ЯМР C-13 (CDCl₃): 13,9 (CH₃ этилового эфира), 17,6 (CH₃ аланина), 24,7 (N-CH₂-CH₂ пролина), 28,8 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 46,9 (N-CH₂ из пролина), 47,1 (CH аланина), 58,9 (CH пролина), 61,0 (CH₂ этилового эфира), 107,4 (ароматический C-5), 120,9 (ароматический C-3), 138,9 (ароматический C-6), 145,1 (ароматический C-4), 163,4 (CO), 163,9 (CO), 171,7 (CO), 172,2 (CO).

Тонкослойная хроматография (С): Rf 0,36.

Пример 5. Синтез N-[(6-хлор-3-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролина (соединение 22).

1,0 г (0,54 ммоль) L-аланил-L-пролина растворяют в смеси 10,8 мл 0,5H раствора гидрата окиси калия и 750 мл (5,4 ммоль) безводного карбоната калия и добавляют к раствору 10 мл ацетонитрила. После охлаждения на бане со льдом к раствору добавляют по каплям при перемешивании раствор 1,2 г 6-хлор-никотиноилхлорида, поддерживая pH смеси в пределах от 12 до 13 посредством добавления при необходимости 1Н раствора гидрата окиси калия. После завершения введения компонентов раствор перемешивают еще в течение 2 ч при комнатной температуре, затем нейтрализуют до pH 6 посредством водного раствора соляной кислоты и отгоняют растворитель при пониженном давлении. Полученный таким образом остаток переводят в суспензию в 50 мл абсолютированного спирта, остаток хлорида калия отделяют центрифугированием и отгоняют из прозрачного раствора растворитель при пониженном давлении. Неочищенный продукт подвергают очистке хроматографированием на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента этанол, получая указанный в заголовке продукт в количестве 700 мг (выход 40%).

Спектр ЯМР-H1 (ДМСО + D₂O): 1,26, 1,32 (два дублета, J 6,8 Гц, CH₃ аланина), 1,90 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,50 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,15 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,70 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,62 (двойной дублет, J1 8,2 Гц, J2 3,0 Гц, 1H, ароматический C-5), 8,32 (двойной дублет, J1 8,2 Гц, J2 1 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,87 (дублет, J 3,0 Гц, 1H, ароматический C-2).

Спектр ЯМР С-13 (ДМСО + D₂O): 16,6, 18,1 (CH₃ аланина), 22,3, 24,78 (N-CH₂-CH₂ из пролина), 29,4, 31,7 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 46,847,6, 48,7 (CH аланина и N-CH₂ пролина), 61,161,9 (CH пролина), 124,8 (ароматический C-5), 129,6 (ароматический C-3), 139,6 (ароматический C-4), 149,9 (ароматический C-2), 153,4 (ароматический C-6), 164,5 (CO-амидная связь пиридиновое кольцо-дипептид), 171,2, 170,7 (OCO-пептидная связь), 175,6 (COOH пролина).

Тонкослойная хроматография (Е): Rf 0,54.

Аналогичным образом синтезируют следующие соединения.N-[(2-метоксикарбонил-5-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролин (соединение 23).

Спектр ЯМР-H1 (ДМСО + D₂O): 1,26, 132,32 (два дублета, J 6,8 Гц, CH аланина), 1,90 (мультиплет, 4H, N-CH-CH-CH из пролина), 3,50 (мультиплет, 2H, N-CH из пролина), 4,15 (мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,70 (мультиплет, 1H, CH из аланина), 7,62 (двойной дублет, J1 8,2 Гц, J2 3,0 Гц, 1H, ароматический C-5), 8,32 (двойной дублет, J1 8,2 Гц, J2 1,0 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,87 (дублет, J 3,0 Гц, 1H, ароматический C-2).

Тонкослойная хроматография (Д): Rf 0,35.

Пример 6. Синтез N-[(6-хлор-2-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролина (соединение 24).

Раствор хлоргидрата этилового эфира L-аланил-L-пролина (4,5 г, 0,013 моль) ( пример 1) в 42 мл этанолового раствора гидрата окиси калия перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Полученную реакционную смесь разбавляют 250 мл абсолютированного этанола и нейтрализуют 6Н этанольным раствором соляной кислоты. Образующийся при этом осадок хлорида калия отфильтровывают, несколько раз промывают абсолютированным этанолом и отгоняют растворитель при пониженном давлении. Остаток подвергают очистке хроматографированием на колонке с силикагелем, используя этанол в качестве элюента и получая указанный в заголовке продукт в виде бесцветного твердого вещества (выход 73%).

Спектр ЯМР-H1 (ДМСО): 1,36, 1,32 (два дублета, J= 6,8 Гц, CH₃ из аланина), 2,10 (мультиплет, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ из пролина), 3,65 (мультиплет, 2H, N-CH₂ из пролина), 4,30 мультиплет, 1H, CH из пролина), 4,51, 4,75 (два мультиплета, 1H, CH из аланина), 7,78 (двойной дублет, J1 7,4 Гц, J2 1,6 Гц, 1H, ароматический), 8,03 (двойной дублет, J1 7,4 Гц, J2 1,6 Гц, 1H, ароматический), 8,10 (двойной дублет, J1 J2 7,4 Гц, 1H, ароматический C-4), 8,70 (широкий дублет, 1H, амидный NH, исчезает после встряхивания с дейтерированной водой).

Спектр ЯМР C-13 (ДМСО): 17,3, 18,6 (CH₃ аланина), 21,8, 24,6 (N-CH₂-CH₂ пролина), 28,6, 30,8 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 46,3, 46,546,7, 46,8 (CH аланина и N-CH₂ пролина), 58,7, 59,3 (CH пролина), 121,5 (ароматический C-3), 127,8 (ароматический C-5), 141,9 (ароматический C-4), 149,6 (ароматический), 150,4 (ароматический), 161,8 (CO-амидная связь пиридиновое кольцо-дипептид), 170,3, 170,9 (CO-пептидная связь), 173,8 (COOH пролина).

Тонкослойная хроматография (Е): Rf 0,55.

При этом раздвоение сигналов обусловлено наличием z-цис и z-трансизомеров пептидной связи L-аланин-L-пролин.

Аналогичным способом получают перечисленные ниже свободные кислоты из соответствующих сложных эфиров:
N-[(6-хлор-3-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролин (соединение 25), тонкослойная хроматография (E): Rf 0,49.

N-[(2-хлор-4-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролин (соединение 26), тонкослойная хроматография (Е): Rf 0,55,
N-[(1,2-дигидро-2-тиоксо-4-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролин (соединение 27), тонкослойная хроматография (Е): Rf 0,46.

N-[(1,2-дигидро-2-тиоксо-3-пиридинил)карбонил] -L- аланил-L-пролин (соединение 28), тонкослойная хроматография (Е): Rf 0,45.

N-[(1,2-дигидро-6-тиоксо-3-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролин (соединение 29), тонкослойная хроматография (Е): Rf 0,51.

N-[(2-карбокси-6-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролин (соединение 30), тонкослойная хроматография (Д): Rf 0,29.

N-[(2-карбокси-5-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролин (соединение 31), тонкослойная хроматография (Д): Rf 0,25.

N-[(2-карбокси-3-пиридинил)карбонил] -L-аланил-L-пролин (соединение 32), тонкослойная хроматография (Д): Rf 0,18.

N-[(1,2-дигидро-2-оксо-4-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролин (соединение 33), тонкослойная хроматография (Ф): Rf 0,34.

N-[(1,6-дигидро-6-оксо-2-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролин (соединение 34), тонкослойная хроматография (Ф): Rf 0,40.

N-[(1,6- дигидро-6-оксо-3-пиридинил)карбонил] -L-ала- нил-L-пролин (соединение 35), тонкослойная хроматография (Ф): Rf 0,37.

N-[(l,2-дигидро-2-оксо-3-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролин (соединение 36), тонкослойная хроматография (Ф): Rf 0,37.

Структура приведенных выше моно- и дикислот подтверждается соответствующими спектроскопическими данными.

Пример 7. Результаты фармакологических испытаний.

А. Ингибирование сокращений подвздошной кишки у морских свинок, индуцируемых ангиотенсином I (см. табл. 2).

Сегменты по 1,5 см свежевырезанной и промытой концевой части подвздошной кишки переводят в суспензию в 25-миллиметровых сосудах для тканей, содержащих раствор по Тироду при 31^oC, и пропускают через суспензию смесь 95%-ного О₂ и 5%-ного CO₂. Остаточное натяжение ткани после уравновешивания и отзыв на ангиотенсин I или ангиотенсин II (оба в концентрации 100 нг/мл) при начальной нагрузке 1,0 г регистрируют посредством приемника-преобразователя "Илинг" и многоканального самописца "Лектромед". Часть соединений согласно настоящему изобретению тестируют в соответствии с описанным способом, добавляя их в сосуд за 2 мин до ввода соответствующего средства-агониста.

Ингибирующий эффект испытуемых соединений по отношению к индуцируемым ангиотенсином I сокращениям определяют при конечной концентрации в сосуде 10 нг/мл.

Полученные результаты приведены в табл. 1.

Все приведенные в ней значения процента ингибирования представляют собой средние значения, полученные на сегментах подвздошной кишки, отобранных у 5-ти морских свинок. При конечной концентрации в сосуде, равной 1 мкг/мл, ни одно из испытанных соединений не дает сколько-нибудь значительного изменения сокращений, вызываемых ангиотенсином II.

Б. Противогипертоническая активность при испытании на крысах при спонтанном повышении давления (табл. 3 и 4).

В данной известной модели гипертонии используют крыс (массой от 315 до 376 г) при спонтанном повышении у них давления (систолическое кровяное давление (СКД) более 160 мм рт.ст.). Систолическое кровяное давление регистрируют у находящихся в сознании животных посредством способа с использованием хвостовой манжеты и прибора для измерения давления FS 40. Перед производством измерений крыс помещают в изолированный цилиндр, регистрируют исходные значения давления и вводят им испытуемые соединения (включая используемый в качестве сравнительного образца каптоприл) перорально в дозах 30 мг/кг (используя по 5-ти животных в группе). Давление измеряют спустя 1,2,3,4 и 24 ч после введения испытуемых соединений. Контрольную группу (из 18-ти животных) включают в эксперимент для сравнения (табл. 2).

При описанных выше условиях соединения 8, 27, и 21 демонстрируют значительный противогипертонический эффект. Спустя 1 ч после введения среднее уменьшение систолического кровяного давления значительно отличается от контрольной группы для групп, прошедших обработку соединением 27 (28,4 + 3,16 мм рт.ст.), соединением 8 (32,6 ± 7,49 мм рт.ст.) и каптоприлом (17,2 ± 8,49 мм рт.ст.). Уменьшение давления значительно отличается от контрольной группы также спустя 2, 34 и 24 ч в случае использования соединений 8 и 27, тогда как каптоприл становится спустя 24 ч неактивным (по данным теста Дункана-Крамера p<0,05). Средние исходные значения систолического кровяного давления (от 167,2 до 169,0 мм рт.ст.) мало отличались от соответствующих значений в контрольной группе (167,8 ± 0,61 мм рт.ст.).

Соединение 21 в концентрации 30 мг/кг демонстрирует значительное понижение давления только спустя 2 ч, при дозе 45 мг/кг понижение давления значительно также спустя 2, 3, 4 и 24 ч. Противогипертонический эффект в соответствии с описанной выше моделью наблюдается также при пероральном введении соединений 8 и 27 в дозах 7,5 и 15 кг/кг.

Дополнение V.

Синтез натриевой соли N-[(2-хлор-4-пиридил)карбонил]-L-аланил-L-пролина.

Смесь 29,4 г (0,09 моль) N-[(2-хлор-4-пиридил)карбонил]-L-аланил-L-пролина и 3,85 г (0,09 моль) гидроокиси натрия (99%) в 300 мл абсолютного этанола перемешивают при комнатной температуре до полного растворения (1 ч).

Растворитель упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 200 мл ацетона, высаживают диэтиловым эфиром до получения названного соединения в виде бесцветного твердого осадка.

¹H-ЯМР (ДМСО): 1,26, 1,31 (две, д, J 7 Гц, CH₃ аланин), 1.89 (м, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 3,45 (м, 2H, N-CH₂ пролина, 4,10 (м, 1H, CH пролина), 4,70 (м, 1H, CH аланина), 7,85 (м, 1H, ароматический), 7,95 (м, 1H, ароматический), 8,53 (м, 1H, ароматический), 8,98, 9,22 (два шир. д. 1H, амидный NH).

¹³С-ЯМР (ДМСО)": 13,3, 17,3 (CH₃ аланина), 22,0, 24,2 (N-CH₂-CH₂ пролина), 29,1, 31,3 (N-CH₂-CH₂-CH₂ пролина), 48,2, 46,3, 47,3, 47,7 (N-CH₂ пролина и CH аланина), 61,4, 31,7 (CH пролина), 121,5 (C-5 ароматический), 122,5, 122,7 (C-3 ароматический), 144,8, 144,9 (C-4 ароматический) 150,9, 151,0, 151,1, 151,2 (C-2, C-6, ароматические), 133,0, 133,2 (CO амидной связи пиридинового кольца дипептида), 139,8, 170,3 (CO пептидной связи), 175,5, 176,1 (COO^- пролина).

Дублетность сигнала является следствием присутствия изомеров z-цис и z-транс по пептидной связи L-Ala-L-Pro.

Дополнение VI.

Изучение токсичности выбранных соединений (PCT/EP 92/00400; Ru Appl N 92 016 314.04)
Изучение острой токсичности проводится для некоторых наиболее активных соединений "in vivo" (HP тест, смотри дополнение II), особенно для N 2, 3, 8, 15, 27, так же как и для N 21, наиболее активного соединения "in vitro" (Тест Ангиотензина I, см.дополнение I).

Острая токсичность на мышах.

Оценка ЛД₅₀ на 7-й день наблюдения дает следующие величины, представленные в табл.5.

Специфическое изучение соединения N 3.

A) Сравнительная острая токсичность при введении через рот (р.о.) при внутрибрюшинном введении (в/б).

Через 14 дней наблюдения МДТ (максимальные толерантные дозы) составляли 5000 мг/кг (р.о.) и 2000 мг/кг (в/б).

B) Подострая токсичность для крыс, при введении через рот (р.о.).

Соединение 3 вводят в течение 28 дней в дозе 0 (контроль), 500, 1000, 2000 и 4000 мг/кг/день.

Не наблюдают значительных признаков токсичности и каких-либо смертельных исходов, но во всех группах было похожее прибавление веса.

В образцах печени и почек при гистологическом изучении не обнаружены изменения ни при каких дозах.

Дополнение VII.

Фармкомпозиции.

Так как оральный путь является предпочтительным путем введения и так как многие из этих новых соединений являются активными или очень активными при таком введении, фармацевтические формы для орального введения выбирают в качестве целевых при разработке галеновых препаратов. Из анализа различных препаративных форм некоторые конкретные примеры включены здесь. Они предназначены только для иллюстрации, без ограничения во всяком случае области изобретения.

Препаративная форма в виде таблеток.

При использовании в качестве активного ингредиента соединения N 3, выбранного представителем из этих противогипертонических дипептидных производных, получают следующие препаративные формы или прямым смешением и прессованием (форма A) или мокрым гранулированием (форма B).

6 Количественные составы и методики
Препаративная форма A мг/таблетка
a) активный ингредиент 100
b) авицел PH-102 100
c) двуосновный фосфат кальция 74
d) Ac-Di-Sol 7.4
e) тальк 15
f) стеарат магния 3
g) аэросил 200 0,6 300
Авицел PH-102 является коммерческой микрокристаллической целлюлозой. Ac-Di-Sol является коммерческой карбоксиметилцеллюлозой. натрия (сшитой). Аэросил 100 является коммерческой коллоидальной двуокисью кремния с удельной поверхностью 200 м²/г.

После предварительного смешения ингредиентов d, e, f, g с приблизительно половиной соответствующего количества b и c прибавляют активный ингредиент и остатки b и c перемешивают 30 мин с последующим прессованием.

Препаративная форма B мг/таблетка
a) активный ингредиент 50
b) лактоза 50
c) кукурузный крахмал 33
d) повидон 4
e) Ac-Di-Sol 4
f) тальк 7,5
g) стеарат магния 1,5 150
Эту препаративную форму получают мокрым гранулированием ингредиентов a, b и c с 10%-ным (вес/вес) раствором повидона в воде с последующей сушкой, смешением с другими ингредиентами и прессованием.

II. Характеристики.

И форма A и форма B испытываются для их галоновых препаратов с соответствующими величинами дисперсии, рыхлости и твердости с помощью стандартизованных методов (US P XXII).

Качество этих таблеток показано в табл.6.

Формула изобретения

1. Производные дипептидов общей формулы I

включая таутомерные формы,
где n 0 или 1;
R галоген, ОН, SH, SR₄, OR₄, где R₄ низший алкил или фенил, NHR₅, где R₅ фенил или ацетил, ди(низший алкил)амино, СООН или СОО(низший)алкил;
R₁ ОН или (низший)алкоксил;
R₂ низший алкил;
R₃ галоген, NO₂, (низший)алкил, арил(низший)алкил,
или их фармацевтически приемлемые соли.

2. Производные дипептидов общей формулы I по п.1, где n 0, R хлор, ОН, SH, ОС₆Н₅, SC₆H₅, NHC₆H₅, NHCOCH₃, СООН или СОО(низший)алкил.

3. Производные дипептидов общей формулы I по п.1, где n 1, R хлор, ОН, ОСН₃ или N(CH₃)₂ и R₃ выбран из галогена, в частности хлора, метила или фенилметила.

4. Производные дипептидов общей формулы I по пп.1 3, где R₁ ОН или ОС₂Н₅, R₂ метил.

5. Производное дипептида по п. 1, являющееся этиловым эфиром N-[(2-хлор-4- пиридинил)карбонил]-L-аланин-L-пролина.

6. Производное дипептида по п.1, являющееся этиловым эфиром N-[(2-фенокси-3- пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролина.

7. Производное дипептида по п.1, являющееся N-[(1,2-дигидро-2-тиоксо-4-пиридинил)карбонил]-L-аланил-L-пролином.

8. Способ получения производных дипептидов общей формулы I

включая таутомерные формы,
где n 0 или 1;
R галоген, ОН, SH, SR₄, OR₄, где R₄ низший алкили или фенил, NHR₅, где R₅ фенил или ацетил, ди(низший алкил)амино, -СООН или -СОО (низший)алкил;
R₁ -OН или (низший)алкоксил;
R₂ низший алкил;
R₃ галоген, NO₂, (низший)алкил, арил(низший)алкил,
или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что проводят взаимодействие пиридинкарбоновой кислоты формулы IIa

где n 0 или 1;
R галоген, ОН, SR₄, OR₄, где R₄ низший алкил или фенил, NHR₅, где R₅ фенил или ацетил, ди(низший)алкиламино, -СОО(низший)алкил;
R₃ галоген, NO₂, (низший)алкил, арил(низший)алкил,
с дипептидом формулы III

где R₁ (низший)алкоксил;
R₂ низший алкил,
в присутствии подходящего агента сочетания, например N,N-дициклогексилкарбодиимида, с последующей в случае необходимости конверсией соединения формулы I, где R Cl, в соединение I, где R SH, и при необходимости гидролизом, солеобразованием жиров или диэфиров, таким образом полученных.

9. Способ получения дипептидов общей формулы I

включая таутомерные формы,
где n 0 или 1;
R галоген, ОН, SH, SR₄, OR₄, где R₄ низший алкил или фенил, NH₅, где R₅ фенил или ацетил, ди(низший алкил)амино, СООН или СОО(низший)алкил;
R₁ ОН или (низший)алкоксил;
R₂ низший алкил;
R₃ галоген, NO₂, (низший)алкил, арил(низший)алкил,
или их фармацевтически приемлемые соли,
отличающийся тем, что производное общей формулы II

где n 0 или 1;
Х галоген;
R галоген, ОН, SR₄, OR₄, где R₄ низший алкил или фенил, NHR₅, где R₅ фенил или ацетил, ди(низший алкил)амино, СООН или СОО(низший)алкил;
R₃ галоген, NO₂, (низший)алкил, арил(низший)алкил,
вводят во взаимодействие с дипептидом формулы III

где R₁ ОН или (низший)алкоксил;
R₂ низший алкил,
процесс ведут в присутствии органического основания, если R₁ ОН, то процесс ведут в присутствии неорганического основания и в случае необходимости с последующим превращением соединений формулы I, где R Cl, в соединение формулы I, где R SH, и при необходимости гидролизом и/или солеобразованием эфира или свободных кислот, при этом полученных.

10. Антигипертоническая фармацевтическая композиция, включающая активное вещество и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит производное дипептида общей формулы I по пп.1 7 в эффективном количестве.

11. Композиция по п.10 для орального введения.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4