Штамм bifidobacterium infantis 73-15, используемый для приготовления бифидосодержащих бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания

 

Штамм Bifidobacterium infantis 73-15 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка. Штамм B.infantis 73-15 активно размножается на питательных средах разного состава, накапливает производственную биомассу к 16 - 24 ч культивирования и содержанием в 1 мл микробных клеток lg 8. Сквашивает молоко к 24 ч культивирования с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами. Продуцирует кислоты и антагонистически активен по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Устойчив к ряду антибактериальных препаратов. 3 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий, который может быть использован для приготовления бактерийных препаратов-эубиотиков и продуктов лечебного питания.

Препараты и продукты, содержащие в своем составе бифидобактерии, предназначены для нормализации микробиоценоза кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате неблагоприятных экологических условий, стрессовых воздействий, перенесенных кишечных заболеваний, длительной антибиотикотерапии, лучевой и химиотерапии и пр.

Известны зарубежные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты - йогурты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B.bifidum, B.longum, B. adolescentis, B. breve (патент 2336886, патент 2411008, Франция; патент 637297, Швейцария; патент 2134179, патент 2421066, ФРГ; патент 05227946, патент 04320642, Япония). Известен препарат, приготовленный из разрушенных клеток бифидобактерий видов B. infantis и B.longum (патент 4645667, США), обладающий антиопухолевым действием.

У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания используются отечественные штаммы бифидобактерий видов B. bifidum N 1, 791,, B.longum, B379M, B.adolescentis MC-42 (авт. св. N 343588, патент 1347221, патент 849779, патент 863639).

В кишечнике человека встречаются 5 видов бифидобактерий - B.bifidum,B. longum, B.adolescentis, B.breve и B.infantis. С наибольшей частотой обнаруживаются виды B.bifidum, B.longum и B.adolescentis (39-75%). У детей грудного возраста в 30% случаев обнаруживаются и бифидобактерии видов B.breve и B. infantis. Эти виды свойственны только детям грудного возраста.

Целью настоящего изобретения штамм Bifidobacterium infantis подвид lactentis 73-15, способный активно размножаться и наращивать микробную массу в питательных средах и сквашивать молоко к 24 ч культивирования и обладающий специфической активностью.

Штамм Bifidobacterium infantis 73-15 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка в 1973 г., хранится в лиофилизированном состоянии и депонирован под N 155 в коллекции микроорганизмов представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

Культурально-морфологические признаки. Клетки представляют собой гр + полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1 - 2 концах, склонные к образованию скоплений. В печеночной среде Блаурокка штамм образует колонии в виде комет. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 ч. В жидких питательных средах растет по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза.

Физиолого-биохимические признаки. Неподвижный, бесспорный облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5 - 38^oC, pH питательных сред 7,2 - 7,4. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L + молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до pH 4,1 - 3,9. Ферментирует лактозу, ксилозу, маннозу, вариабельно - маннит, инулин, не сбраживает арабинозу, целлобиозу, сорбит, салицин. Сквашивает стерильное молоко к 16 - 24 ч с образованием плотного сгустка.

Штамм к первым суткам наращивает микробную массу на питательных средах разного состава, причем активнее на гидролизатно-молочной (ГМ) среде (табл. 1).

Штамм интенсивно размножается к 16 - 24 ч в питательных средах и молоке, что является одним из основных показателей технологичности штамма.

Штамм обладает специфической активностью. При культивировании на питательных средах продуцирует кислоты, наиболее активно - на гидролизатно-молочной (табл. 2).

Штамм подавляет рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов - шигелл Зонне, Флекснера, ЭПКП, стафилококка, протея (табл. 3).

Изучение спектра чувствительности к 14 применяемым антибактериальным препаратам выявило, что штамм 73-15 устойчив к цефалотину, неомицину, канамицину тетрациклину, полимиксину; чувствителен к бензилпенициллину, ампициллину, карбенициллину, оксациллину, олеандомицину, линкомицину, левомицетину, ристомицину, эритромицину.

Из приведенных данных следует, что штамм 73-15 наращивает микробную массу на питательных средах, принятых в производстве бактерийных препаратов, в короткие, 16 - 24 ч, сроки культивирования, содержанием микробных клеток lg 8,06 - 7,8; обладает кислотообразующими и ингибирующими свойствами в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; обладает устойчивостью к ряду антибактериальных препаратов.

Способность штамма 73-15 наращивать микробную массу в питательных средах и сквашивать молоко делает возможным использование его в составе бифидосодержащих бактерийных препаратов и лечебных продуктов питания.

Пример 1. Использование штамма 73-15 для получения бактерийного препарата.

Штамм 73-15 1-2-3-го пассажей культивируют при температуре 37,5 - 38^oC и pH среды 7,2 - 7,4 в течение 16 - 24 ч. К выращенной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% - 10% - 12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл в ампулы или по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при температуре минус 40 - минус 45^oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит 10^7-8 живых клеток бифидобактерий. Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-132 ВС-94) допускается содержание в 1 дозе препарата не менее 10⁷ живых клеток бифидобактерий.

Пример 2. Использование штамма 73-15 в составе закваски для приготовления кисломолочного бифидумбактерина.

2.1 1-й пассаж. Лиофилизированный штамм 73-15 вносят в среду выращивания (печеночную, тиогликолевую, кукурузно-лактозную) из расчета 0,1 г сухой биомассы (1 доза) на 100 мл среды. Посевы инкубируют 24 ч при температуре 37,5 - 38^oC.

2-й пассаж. Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (1 л). Инкубируют 16 - 24 ч при 37,5 - 38^oC.

Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5 - 10% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16 - 24 ч при 37,5 - 38^oC. В данном случае указанным количеством закваски можно получить 20 л продукта.

2.2 1-й пассаж. Лиофилизированный штамм 73-15 0,1 г сухой биомассы (1 доза) титруют методом десятикратных разведений в питательной среде и в объеме 10% посевного материала из разведений 10^-2 - 10^-4 переносят в питательную среду (1 л). Инкубируют 24 ч при 37,5 - 38^oC.

Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16 - 24 ч при 37,5 - 38^oC. В данном случае указанным количеством закваски можно получить 200 л продукта.

Таким образом, предлагаемый штамм 73-15 является технологичным, поскольку активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования; обладает специфической активностью; сквашивает молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами. Штамм можно рекомендовать для использования его в качестве основы при производстве бактерийных препаратов-эубиотиков и продуктов лечебно-диетического питания.

Формула изобретения

Штамм Bifidobacterium infantis (коллекционный N 155 Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н.Габричевского), используемый для получения бифидосодержащих бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания.

РИСУНКИ

Рисунок 1

PC4A - Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 33-2003

(73) Патентообладатель:ООО "Мир биотехнологий [научно-производственное объединение]" (RU)

Договор № 17071 зарегистрирован 11.07.2003

Извещение опубликовано: 27.11.2003