Противолучевое средство

 

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам для лечения лучевой болезни. Сущность состоит в том, что предложен ферментный комплекс, выделенный из культивируемых клеток женьшеня и полисциаса. Применение указанного средства увеличивает выживаемость организма в 2 раза при дозе облучения 5,5 Гр. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к противолучевым средствам.

Для лечения и профилактики лучевых поражений используются различные лекарственные средства. Профилактические средства применяют при угрозе лучевого поражения, при лучевой терапии онкологических больных, при работе с радиоактивными веществами, называют их радиозащитными. Для лечения общих проявлений лучевой болезни используют, как правило, лекарственные средства соответствующего фармакологического профиля [1].

Известны различные серусодержащие соединения, проявляющие противолучевую активность - полиаминотиолы [2], обладающие радиозащитным действием - несимметричные органические дисульфиды [3]. Однако все известные противолучевые средства синтетического происхождения имеют значительные недостатки: побочное токсическое действие, ограниченный срок применения.

Поэтому ведется активный поиск средств такой активности среди веществ природного происхождения. Предлагаются различные растительные композиции, обладающие противолучевой активностью: содержащие экстракт листьев Gingo bilobo [4], содержащие отвары женьшеня [5]. Однако они не обладают достаточно высокой активностью.

Внимание многих исследователей привлекает фермент супероксиддисмутаза, выделяемый из различных природных источников. Описана [6] дермофармацевтическая композиция для лечения кожи, поврежденной облучением (α, β, γ), которая содержит супероксиддисмутазу, полученную из дрожжей, в чистом виде или в смеси с белками, нуклеиновыми кислотами, витаминами, гормонами, каталазами. Известно [7] средство с СОД-активностью, полученное из штамма Streptococcus lactis, снижающее побочное действие онкологических лекарственных средств, таких как цис-платина, этот же препарат обладает радиозащитным действием. Радизозащитное действие изучалось на мышах, подвергнутых общему излучению 300 рад, оно оценивалось по влиянию на иммунологическую реакцию облученных животных. Противолучевая активность не описана.

Известен ферментный комплекс (ФК) [8] на основе супероксиддисмутазы, каталазы и пероксидазы. Он имеет следующую активность: - супероксиддисмутаза: (20,0±1,8) усл.опт.ед. Д₄₆₀ /мг белка, - каталаза: (0,14±0,02) мМ H₂O₂/ мг белка, - пероксидаза: (0,6±0,03) усл.опт.ед. Д₄₃₅ /мг белка.

Комплекс несложными приемами выделяют из биомассы культивируемых клеток женьшеня и полисциаса папоротниколистного. ФК стабилен - активность его сохраняется более года, у него отсутствует иммунотоксичность, он обладает высокой противовоспалительной активностью. Неизвестна его противолучевая активность.

Задача изобретения создать эффективное малотоксичное противолучевое средство, расширить ассортимент таких средств.

Поставленная задача реализуется путем применения ферментного комплекса из биомассы культивируемых клеток женьшеня и полисциаса папоротниколистного в качестве противолучевого средства.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Изучение острой токсичности ферментного комплекса.

Опыты проведены на половозрелых белых беспородных мышах-самках массой 20,0 г. В экспериментах использовано 48 животных. Применялись два пути введения: внутрибрюшинный и пероральный. Использованный раствор ФК в физиологическом растворе - 10% ФК в дозах 500 - 4000 мг/кг при внутрибрюшинном введении и 5000 мг/кг при пероральном введении не вызывает гибели животных. Дальнейшее наращивание доз не производилось вследствие невозможности введения больших объемов. Следует отметить, что вводимые дозы не вызывали никаких токсических эффектов у животных. Через 14 дней после введения ФК все животные были взвешены и забиты, а затем подвергнуты патологоанатомическому вскрытию. На вскрытии ни в одной из исследуемых групп видимых изменений во внутренних органах обнаружено не было.

Таким образом, можно сделать следующий вывод: средство, содержащее ФК, при однократном внутрибрюшинном и пероральном введениях мышам отличается крайне низкой токсичностью. По этой причине введение мышам летальных доз средства оказалось невозможным и СД₅₀ не определена, больше 5000 мг/кг.

Изучение противолучевой активности ферментного комплекса.

Опыты проведены на 54 беспородных крысах массой 180-200 г. Животные подвергнуты общему рентгеновскому облучению в дозе 5,5 Гр (550 рад), при котором возникает тяжелая степень лучевой болезни с преимущественным поражением кроветворной функции (костномозговой синдром) и отмечается гибель примерно половины животных в течение 30 дней. Технические условия облучения: аппарат РУМ-17, напряжение - 200 кВ, сила тока - 15 мА, фильтры 0,5 Cu + 1,0 Al, фокусное расстояние 50 см, мощность доз - 0,77 Гр/мин.

ФК назначался подопытным крысам с питьевой водой, которая употреблялась животными круглосуточно. Два препарата составляла 4,1 - 4,3 мг/кг массы тела животного ежесуточно.

В экспериментах использованы два варианта применения ФК: 1. Профилактическое введение препарата вышеуказанным способом на протяжении двух недель до облучения крыс.

2. Введение препарата с лечебной целью облученным крысам в течение двух недель после облучения. При этом ФК добавлялся к питьевой воде сразу после облучения животных.

Из взятых в опыт 54 крыс 25 животных были контрольными, эти крысы подвергались облучению в дозе 5,5 Гр, не получая препарата, 9 крыс получали препарат профилактически, т.е. две недели до облучения, а 20 крыс были подвергнуты лечению - получали препарат в течение двух недель после лучевого воздействия.

Основным критерием противолучевого действия препарата является выживаемость облученных животных. В качестве дополнительного критерия активности препарата проводилось исследование количества лейкоцитов периферической крови животных - до и после лучевого воздействия (два раза в неделю).

Из табл. 1 видно, что двухнедельное профилактическое введение животным ФК оказало выраженное радиозащитное действие, о чем можно судить по увеличению выживаемости крыс до 77,8% против 44,0% в контроле, т.е. почти вдвое (различия статистически достоверны).

Выраженный противолучевой эффект отмечен у той группы животных, которые получали ФК в лечебном режиме: в этом случае выжило 70% животных против 44% в контроле (различия статистически достоверны).

Гематологические исследования показывают, что применение ФК способствует скорейшей нормализации лейкоцитов крови у крыс (табл. 2).

На основании полученных данных можно выделить два аспекта противолучевой активности ферментного комплекса: 1. Радиопрофилактическое (или радиозащитное) действие. Препарат повышает радиоустойчивость критических органов и тканей (в первую очередь системы кроветворения), поражение которых ответственно за возникновение смертельной лучевой болезни.

2. Радиотерапевтическое (лечебное) действие препарата. Он способствует успешному восстановлению функций критических (радиочувствительных) органов, страдающих в результате облучения.

Ферментный комплекс может быть использован в виде: - лиофилизированного порошка, - гранул, таблеток, - спиртового раствора (1,5 - 2,0% в 40%-ном этаноле), - растворa в фосфатном буфере (0,1 - 10,0%),
- растворa в изотоническом растворе (0,1 - 10,0%).

Доза ФК из-за его малой токсичности может широко варьироваться и будет зависеть от веса больного и цели приема.

Таким образом, ферментный комплекс из биомассы культивируемых клеток женьшеня и полисциаса папоротниколистного показал высокую противолучевую активность и может быть использован как для профилактики, так и для лечения лучевых поражений.

Список литературы
1. Машковский М. Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1993, с. 231-234.

2. Патент США N 5217964, A 61 K 31/66, 1991.

3. Патент США N 4952338, C 07 C 145/00, 1986.

4. PCT N 92/14478, A 61 K 35/78, 1992 N 23.

5. Япония. N 4-81968 от 25.12.92, 60-34948 от 22.02.85, A 61 K 35/78.

6. Патент ГДР N 268157, A 61 K 7/42, 1988.

7. ЕПВ. N 0289667, C 12 N 9/02.

8. Патент РФ N 2046140, 28.07.93.

Формула изобретения

Применение ферментного комплекса из биомассы культивируемых клеток женьшеня и полисциаса папортниколистного в качестве противолучевого средства.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2