Гидроксиэфиры рапамицина, способ их получения и способы лечения

 

Описываются новые соединения формулы I, где каждый из R¹ и R², независимо, представляет собой водород или -CO(CR³R⁴)_b(CR⁵R⁶)_dCR⁷R⁸R⁹, каждый из R³ и R⁴, независимо, представляют собой водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода; каждый из R⁵ и R⁶, независимо, представляют собой водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода или R⁵ и R⁶ могут вместе образовывать группу X или циклоалкильное кольцо с 3 - 8 атомами углерода; R⁷ представляет собой водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода; каждый из R⁸ и R⁹, независимо, представляет собой водород, алкил, с 1 - 6 атомами углерода, -(CR³R⁴)_fOR¹⁰ или R⁸ и R⁹ могут вместе образовывать группы X или циклоалкильное кольцо с 3 - 8 атомами углерода; R¹⁰ представляет собой водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода, три(алкил) с 1 - 6 атомами углерода силил, три(алкил) с 1 - 6 атомами углерода силилэтил или тетрагидропиранил; X представляет собой 5-(2,2-ди(алкил) с 1 - 6 атомами углерода 1,3 диоксанил, 5-(2-спиро-циклоалкил с 3 - 8 атомами углерода (1,3)диоксанил, 4-(2,2-ди(алкил) с 1 - 6 атомами углерода 1,3-диоксанил, 4-(с-спиро(циклоалкил) с 3 - 8 атомами углерода 1,3-диоксанил, b = 0 - 6, d = 0 - 6; f = 0 - 6, при условии, что R¹ и R² не одновременно являются водородом, а также при условии, что либо R¹, либо R² содержит по меньшей мере один (CR³R⁴)_fOR¹⁰, X или циклоалкил с 3 - 8 атомами углерода, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения, применяемого в качестве иммуносупрессивного, противовоспалительного, противогрибкового, антипролиферативного и противоопухолевого агента. Описываются также способ получения соединений формулы I, обладающих иммуносупрессивной активностью, и способ лечения с использованием соединений формулы I. 5 с. и 17 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к гидроксиэфирам, к способу применения таких соединений для индуцирования иммуносупрессии, а также для лечения отторжения при трансплантации или реакции несовместимости аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, лейкемии/лимфомы взрослых Т-клеток, твердых опухолей, грибковых инфекций и нарушений, связанных с сосудистой гиперпролиферацией.

Рапамицин представляет собой макроциклический триеновый антибиотик, продуцентом которого является Streptomyces hygroscopicus; обнаружено, что рапамицин обладает противогрибковым действием, особенно против Candida albicans, причем как in vivo, так и in vitro. (C.Vezina et al., J.Antibiot. 28, 721 (1975); S.N.Sehgal et al., J.Antibiot 28,727 (1975); H.A. Baker et al., J.Antibiot. 31, 539 (1978); Патент США 3929992; а также Патент США 3993749).

Установлено, что рапамицин (Патент США 4885171) или в сочетании с пицибанилом (Патент США 4401653) обладает противоопухолевой активностью. В работе R.Martel et al., (Can. J.Physiol. Pharmacol. 55, 48 (1977)) указано, что рапамицин продемонстрировал эффективность на экспериментальной модели аллергического энцефаломиелита, на моделях рассеянного склероза, адьювантного артрита, ревматоидного артрита, а также при подавлении образования антител, аналогичных IgE.

Иммуноподавляющее действие рапамицина описано в работе FASEB 3, 3411 (1989). Установлено, что циклоспорин A и FK-506, другие макроциклические молекулы, также эффективны в качестве иммуносупрессивных агентов, и поэтому применяются для предотвращения отторжения трансплантатов (FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R.Y. Calne et al., Lancet 1183 (1978); а также Патент США 5100899).

Установлено, что рапамицин также может применяться для предотвращения или лечения системной красной волчанки (Патент США 5078999), воспаления легких (Патент США 5080899), сахарного диабета с инсулиновой зависимостью (Fifth Int. Conf. Inflamm. Res. Assoc. 121 (реферат), (1990)), клеточной пролиферации гладких мышц и утолщения внутренней оболочки в результате поражения сосудов (Morris, R.J. Heart Lung Transplant 11 (pt 2); 197 (1992)), лейкемии/лимфомы взрослых Т-клеток (Заявка на Европатент 525960 A1), a также глазных воспалений (Заявка на Европатент 532862 A1).

Установлено, что моно- и диацилированные производные рапамицина (эстерфицированные в 28 и 43 положениях) можно использовать в качестве противогрибковых агентов (Патент США 4316885) и используются для приготовления водорастворимых аминоацильных пролекарств рапамицина (Патент США 4650803). Недавно правила нумерации положений в отношении рапамицина были изменены; поэтому в соответствии с Номенклатурой из "Chemical Abstracts" вышеуказанные эфиры будут находиться в 31 и 42 положениях.

Настоящее изобретение предлагает производные рапамицина, которые применимы в качестве иммуносупрессивных, противовоспалительных, противогрибковых, антипрофилеративных и противоопухолевых агентов, и которые имеют следующую структуру: где каждый из R¹ и R², независимо, представляет собой водород или -CO(CR³R⁴)_b (CR⁵R⁶)_d CR⁷R⁸R⁹; каждый из R³ и R⁴, независимо, представляет собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-7 атомами углерода, алкинил с 2-7 атомами углерода, трифторметил или -F; каждый из R⁵ и R⁶, независимо, представляют собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-7 атомами углерода, алкинил с 2-7 атомами углерода, (CR³R⁴)_fOR¹⁰, -CF₃, F, или CO₂R¹¹, или R⁵ и R⁶ могут вместе образовывать X или циклоалкильное кольцо с 3-8 атомами углерода, которое может быть моно-, ди- или тризамещенными -(CR³R⁴)_fOR¹⁰; R⁷ представляет собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-7 атомами углерода, алкинил с 2-7 атомами углерода, (CR³R⁴)_fOR¹⁰, -CF₃, -F, или CO₂R¹¹; каждый из R⁸ и R⁹, независимо, представляют собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-7 атомами углерода, алкинил с 2-7 атомами углерода, -(CR³R⁴)_fOR¹⁰, -CF₃, -F, или R⁸ и R⁹ могут вместе образовывать X или циклоалкильное кольцо с 3-8 атомами углерода, которое может быть моно-, ди- или тризамещенным радикалом -(CR³R⁴)_fOR¹⁰; R¹⁰ представляет собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-7 атомами углерода, алкинил с 2-7 атомами углерода, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силил, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силилэтил, трифенилметил, бензил, алкоксиметил с 2-7 атомами углерода, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силилэтоксиметил, хлорэтил или титрагидропиранил; R¹¹ представляет собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-7 атомами углерода, алкинил с 2-7 атомами углерода, или фенилалкил с 7-10 атомами углерода;
X представляет собой 5-(2, 2-ди(алкил с 1-6 атомами углерода))[1,3]диоксанил, 5-(2-спиро(циклоалкил с 3-8 атомами углерода))[1,3]диоксанил, 4-(2,2-ди(алкил с 1-6 атомами углерода))[1,3]-диоксанил, 4-(2-спиро(циклоалкил с 3-8 атомами углерода))[1,3] -диоксанил, 4-(2,2-ди-(алкил с 1-6 атомами углерода))[1,3]-диоксаланил, или 4-(2-спиро(циклоалкил с 3-8 атомами углерода))[1,3]диоксаланил;
b = 0-6;
d = 0-6;
f = 0-6,
при условии, что R¹ и R² не одновременно являются водородом, а также при условии, что либо R¹, либо R² содержит по меньшей мере один (CR³R⁴)_fOR¹⁰, X или циклоалкил с 3-8 атомами углерода, замещенный (CR³R⁴)_fOR¹⁰ или фармацевтически приемлемую соль этого соединения.

Фармацевтически приемлемыми солями являются те соли, которые являются производными таких неорганических катионов, как натрий, калий и т.п.; органических оснований, таких как моно-, ди- и триалкиламины с 1-6 атомами углерода в алкильной группе, и моно-, ди- и тригидроксиалкиламины с 1-6 атомами углерода в алкильной группе, и т.п.

Термины "алкил с 1-6 атомами углерода", "алкенил с 2-7 атомами углерода" и "алкинил с 2-7 атомами углерода" включают в себя соединения с прямой цепью и с разветвленной цепью. Поскольку соединения по настоящему изобретению могут содержать свыше одной группы - (CR³R⁴)_fOR¹⁰, то радикалы R³, R⁴, и R¹⁰ могут иметь одинаковые или различные значения. Аналогично, когда другие описания заместителей повторяются в одной и той же структурной формуле, то эти заместители могут быть одинаковыми или различными.

Для соединения, где R¹ содержит R⁸ и R⁹, вместе образующие X, где X представляет собой 5-(2,2-ди(алкил с 1-6 атомами углерода))[1,3] диоксанил, алкильная группа в X содержит 1 атом углерода, a d = О, R¹ будет иметь следующую структуру:

Аналогично, для соединения, где R¹ содержит R⁸ и R⁹, вместе образующие X, где X представляет собой 4-(2-спиро(циклоалкил с 3-8 атомами углерода))[1,3] диоксанил, циклоалкильная группа в X содержит 6 атомов углерода, a d = O,R¹ будет иметь следующую структуру:

Из числа соединений, содержащих X, предпочтительными являются те соединения, в которых алкильная группа в X, если имеется, представляет собой метильную группу, а циклоалкильная группа в X, если имеется, представляет собой циклогексил.

Когда R¹⁰ не является водородом, алкилом, алкенилом или алкинилом, то подразумевается, что R¹⁰ представляет собой группу, которая может служить спиртозащитной группой. Так, указанные группы являются промежуточными от свободных гидроксилированных соединений, причем они являются биологически активными сами по себе. R¹⁰ включает три(алкил с 1-6 атомами углерода) силил, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силилэтил, трифенилметил, бензил, алкоксиметил с 2-7 атомами углерода, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силил-этоксиметил, хлорэтил и тетрагидропиранил. Специалистам известны и другие спиртозащитные группы, которые также входят в рамки настоящего изобретения.

Из числа соединений по настоящему изобретению предпочитаемыми являются те соединения, в которых R² представляет собой водород; соединения, где R² представляет собой водород, b=0, d=0; соединения, где R² представляет собой водород, b= 0, d=0, а каждый из R⁸ и R⁹, независимо, представляет собой водород, алкил или -(CR³R⁴)_fOR¹⁰, или взятые вместе образуют X.

Соединения по настоящему изобретению, имеющие эфирную группу -CO(CR³R⁴)_b (CR⁵R⁶)_dCR⁷R⁸R⁹ в 42 или в 31, 42 положениях, можно получить путем ацилирования рапамицина с использованием защищенных оксикислот или полиоксикислот, алкоксикарбоновых или полиалкоксикарбоновых кислот, которые сначала активируют, а затем, при желании, удаляют из них спиртозащитные группы. Известно несколько способов активации карбоксилатов, однако предпочтительные способы основаны на использовании карбодиимидов, смешанных ангидридов или кислых хлоридов. Например, соответствующим образом замещенную карбоновую кислоту можно активировать как смешанный ангидрид, с помощью такой ацилирующей группы как 2,4,6-трихлорбензоилхлорид. Обработка рапамицина смешанным ангидридом в слабощелочных условиях позволяет получить требуемые соединения. Иначе реакцию ацилирования можно осуществить с помощью 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбо-диимид-гидрохлорида и диметиламинопиридина. Смеси соединений, содержащих эфиры в 42 положении и соединений, содержащих эфиры в 31, 42 положениях, можно разделить хроматографией.

Настоящее изобретение предлагает также способ получения производных рапамицина. В частности, способ получения гидроксиэфиров рапамицина, включая описанные выше соединения формулы, предусматривает следующие стадии:
а) ацилирование рапамицина или его функционального производного, или его аналога с помощью ацилирующего агента;
или
б) последовательное ацилирование рапамицина или его функционального производного, или его аналога двумя ацилирующими агентами; причем указанный ацилирующий агент (или агенты) выбирают из кислот формулы:
HO-CO(CR³R⁴)_b (CR⁵R⁶)_dCR⁷R⁸R⁹
или реакционноспособных производных этих соединений, где R³-R⁹, b и d имеют вышеуказанные значения, при условии, что свободные гидроксильные группы защищены, причем при желании можно защитить группу, находящуюся в 42 положении рапамицина или его функционального производного, с помощью соответствующей защитной группы, а после реакции удалить любые защитные группы, присутствие которых было необходимо.

Реакцию можно проводить в присутствии связующего вещества, такого как соответствующим образом замещенное карбодиимидное производное. Вышеупомянутые соединения можно получить также путем ацилирования с помощью реакционноспособных производных кислот формулы II, таких как ангидриды, смешанные ангидриды или галоидангидриды, такие как хлорид.

Соединения по изобретению, содержащие эфир в 31 положении и гидроксильную группу в 42 положении, можно получить путем защиты спиртовой группы рапамицина в 42 положении с помощью защитной группы, такой как трет-бутил-диметилсилильная группа, с последующей этерификацией группы в 31 положении с применением вышеописанных способов. Получение рапамицина с силилэфирной группой в 42 положении описано в патенте США B1 5120842, который упоминается здесь для сведения. Удаление защитной группы позволяет получать соединения, этерифицированные в 31 положении. В случае использования трет-бутил-диметилсилильной защитной группы удаление защитных групп можно осуществить в слабокислых условиях, например, в смеси уксусной кислоты/воды/тетрагидрофурана. Способ удаления защитных групп описан в примере 15 Патента США 5118678, который упоминается здесь для сведения.

После этерификации группы в 31 положении и удаления защитных групп в 42 положении, группу в 42 положении можно этерифицировать с помощью ацилирующего агента, отличного от ацилирующего агента, который использовали для взаимодействия со спиртовой группой в 31 положении, до получения соединений, имеющих различные сложноэфирные группы в 31 и 42 положениях. Иным способом соединения, имеющие этерифицированные группы в 42 положении и полученные вышеописанным способом, можно взаимодействовать с еще одним ацилирующим агентом до получения соединений, имеющих различные сложноэфирные группы в 31 и 42 положениях.

Настоящее изобретение охватывает также аналогичные сложные эфиры оксикислот, полученные при использовании других рапамицинов, таких как 29-деметоксирапамицин (Патент США 4375464, 32-деметоксирапамицин по номентклатуре С.А.); производные рапамицина, в которых двойные связи в 1-, 3- и/или 5 положениях были восстановлены (см. Патент США 5023262); 29-десметилрапамицин (см. Патент США 5093339, т.е. 32-десметилрапамицин по номентклатуре С.А.); 7,29-бисдесметилрапамицин (см. Патент США 5093338, 7,32-дисметилрапамицин по номенклатуре С. А.); а также 15-гидроксирапамицин (см. Патент США 5102876). Указанные патенты упоминаются здесь для сведения.

Иммуносупрессивная активность отдельных соединений по изобретению была определена с помощью стандартного фармакологического теста in vitro, в ходе проведения которого измеряли ингибирование пролиферации лимфоцитов (тест LAF), а также с помощью двух стандартных фармакологических тестов in vivo. Тест с использованием кожного трансплантата позволяет измерить иммуносуспрессивную активность испытуемого соединения, а также способность испытуемого соединения подавлять или лечить отторжение трансплантата. Стандартный фармакологический тест на адьювантный артрит позволяет измерить способность испытуемого соединения подавлять воспаления, передаваемые иммунной системой. Тест на адьювантный артрит представляет собой стандартный фармакологический тест на ревматоидный артрит. Процедуры этих стандартных фармакологических тестов описаны ниже.

Пролиферация тимоцитов, индуцированная комитогенами (т.е. LAF), использовалась для измерения in vitro иммуносупрессивных воздействий репрезентативных соединений по изобретению.

Клетки из тимуса нормальных мышей BALB/C культивировали в течение 72 часов с фитогемогглютинином (PHA) и интерлейкином-1 и в течение последних шести часов метили тимидином, насыщенным тритием. Клетки культивировали с рапамицином, циклоспорином A или испытуемым соединением в различных концентрациях, и без них. Затем производили сбор клеток, выросших в культуре, и определяли приобретенную радиоактивность. Ингибирование лимфопролиферации определяли в виде процентного изменения в подсчетах за минуту в сопоставлении с контрольными клетками, выращенными без обработки лекарственными препаратами. Проводили сопоставление данных по рапамицину с данными по каждому из указанных соединений. IC₅₀ определяли для каждого испытуемого соединения, а также для рапамицина. В сопоставлении с репрезентативными соединениями по изобретению рапамицин имел IC₅₀ в диапазоне 0,6-1,5 нМ. Полученные результаты даны в виде показателей IC₅₀ и в виде процентного ингибирования пролиферации Т-клеток при 0,1 мкМ. Результаты, полученные для репрезентативных соединений по изобретению, также были выражены в сопоставлении с данными по рапамицину. Положительное значение в этом соотношении указывает на иммуносупрессивную активность. Соотношение свыше 1 указывает на то, что испытуемое соединение подавляет пролиферацию тимоцитов сильнее, чем рапамицин. Вычисление указанного соотношения показано ниже:
IC₅₀ рапамицина
IC₅₀ испытуемого соединения
С использованием репрезентативных соединений по изобретению проводились также тесты in vivo, предназначенные для того, чтобы определить продолжительность выживания кожных трансплантатов, взятых у мужских особей мышей BALB/c и пересаженных мужским реципиентам C₃H(H-2K). Примененный способ представлял собой адаптированный вариант способа, описанного в работе Billingham R. E. and Medawar P. B. J. Exp.Biol. 28:385-402, (1951). Вкратце, кожный трансплантат для пересадки, взятый у донора, пересаживали на спину реципиента в качестве аллогенного трансплантата, а изотрансплантат использовался в качестве контроля на том же участке. Реципиентам вводили различные концентрации испытуемых соединений внутрибрюшинно или перорально. В качестве контроля использовали рапамицин. Реципиенты, не получавшие лечения, использовались в качестве контроля по отторжению трансплантата. Трансплантат наблюдали ежедневно и результаты наблюдений фиксировали до тех пор, пока трансплантат не подсыхал и не образовывался темный струп. Этот день считался днем отторжения. Средний срок выживания трансплантата (количество дней ± среднеквадратичное отклонение) в группе, подвергавшейся лечению, сравнивали с контрольной группой. В приведенной ниже таблице даны полученные результаты. Результаты выражены в виде средних сроков выживания в сутках. Отторжение трансплантата в контрольной группе (не подвергавшейся лечению) обычно наступало в течение 6-7 дней. Испытуемые соединения вводили в дозе 4 мг/кг.

Стандартный фармакологический тест на адьювантный артрит позволяет измерить способность тестовых соединений, предотвращать аллергические воспаления и ингибировать или излечивать ревматоидный артрит. Использованный метод тестирования описан ниже. Группе крыс (мужские особи инбридированных крыс Wistar Lewis) предварительно вводили соединение, подлежащее тестированию (за 1 час до антигена), а затем в правую заднюю лапу каждой крысы впрыскивали полный адьювант Фрейда (FCA), чтобы вызывать артрит. После этого по понедельникам, средам и пятницам крысам перорально вводили лекарственный препарат, начиная в 0-14-й день и вводили всего 7 доз. Замеры обеих задних лап проводили на 16, 23 и 30 дни. Определяли разницу в объеме лап (мл) с 16-го по 0 день, затем было проведено сравнение с контролем и выведено процентное изменение объема. Воспаление в левой задней лапе (куда инъекции не делали) вызывали воспалением, передаваемым Т-клетками; результаты отмечены в указанной выше таблице (% изменение в сравнении с контролем). Воспаление в правой задней лапе, с другой стороны, вызвано неспецифическим воспалением. Соединения тестировали в дозе 5 мг/кг. Результаты выражены в виде процентного изменения на 16-й день в лапе, куда инъекцию не делали, в сравнении с контролем; чем выше отрицательное значение процентного изменения, тем более сильнодействующим является соединение. Рапамицин давал значения от -70% до -90% изменений в сравнении с контролем, а это говорит о том, что крысы, которым вводили рапамицин, на 70-90% меньше заболевали аллергическим воспалением, чем крысы контрольной группы.

Результаты, полученные в этих стандартных фармакологических тестах, представлены после описания способа получения отдельных соединений, которые подвергались тестированию. Результаты этих стандартных фармакологических тестов демонстрируют, что соединения по изобретению обладают иммуносупрессивной активностью как in vitro, так и in vivo.

Результаты, полученные в тестах LAF, свидетельствуют о супрессии пролиферации Т-клеток, что демонстрирует иммуносупрессивную активность соединений по изобретению. Далее возможность применения соединений по изобретению в качестве иммуносупрессивных агентов продемонстрировали результаты, полученные в результате стандартных фармакологических тестов на кожных трансплантатах и на адьювантный артрит. Результаты теста на кожные трансплантаты еще раз продемонстрировали способность соединений по изобретению излечивать или подавлять отторжение при трансплантации. Результаты стандартных фармакологических тестов на адьювантный артрит еще раз продемонстрировали способность соединений по изобретению излечивать или подавлять ревматоидный артрит.

На основе результатов этих стандартных фармакологических тестов соединения по изобретению следует считать пригодными для лечения или ингибирования отторжения при трансплантации таких органов, как почки, сердце, печень, легкие, костный мозг, поджелудочная железа (островковые клетки), роговица, тонкая кишка, а также кожные трансплантаты и ксенотрансплантаты сердечных клапанов; для лечения или подавления аутоаллергических болезней, таких как волчанка, ревматоидный артрит, сахарный диабет, миастения и рассеянный склероз; а также воспалений, таких как псориаз, дерматит, экзема, себорея, воспаления кишечника, воспаления легких (включая астму, хронические обструктивные легочные заболевания, эмфизему, синдром острых респираторных заболеваний, бронхит, и т.п.), а также увеит.

На основании полученного профиля активности также считается, что соединения по настоящему изобретению обладают противоопухолевой и противогрибковой активностью, а также антипролиферативным действием. Поэтому соединения по изобретению пригодны для лечения твердых опухолей, лейкемии/лимфомы взрослых Т-клеток, грибковых инфекций и сосудистых гиперпролиферативных заболеваний, таких как рестеноз и атеросклероз. В случае лечения растеноза желательно, чтобы соединения по изобретению использовались для лечения рестеноза, который возникает после ангиопластических операций. В этом случае соединения по изобретению можно вводить перед операцией, в ходе операции, сразу после операции, или же использовать любую комбинацию из вышеописанных способов введения.

При лечении или ингибировании вышеуказанных болезненных состояний соединения по изобретению можно вводить млекопитающим перорально, парентерально, через нос, внутрибронхиально, чрескожно, местно, внутривагинально или ректально.

Предполагается, что когда соединения по изобретению используются в качестве иммуносупрессивных или противовоспалительных агентов, их можно вводить в комбинации с одним или более другими иммунорегуляторами. В числе таких иммунорегуляторов азатиоприн, кортикостероиды, такие как преднизолон и метилпреднизолон, циклофосфамид, рапамицин, циклоспорин A, FK-506, ОКТ-3, антитимоцитарный глобулин (ATG). Сочетая соединения по изобретению с такими лекарственными препаратами или агентами с целью вызвать иммуносуппрессию или с целью лечения воспалительных процессов, меньшие количества каждого агента потребуются для достижения желаемого результата. Основы такой комбинаторной терапии были разработаны Степковским, чьи результаты показали, что использование комбинации рапамицина с циклоспорином A в субтерапевтических дозах значительно увеличивало срок жизни сердечного трансплантата (Transplantation Proc. 23:507 (1991)).

Соединения по изобретению можно вводить млекопитающим в чистом виде или вместе с фармацевтическими носителями. Фармацевтический носитель может быть твердым или жидким. Было обнаружено, что для приготовления пероральных композиций можно использовать смесь 0,01% Tween 80 в PHOSAL, PG-50 (фосфолипидный концентрат с 1,2-пропиленгликолем, производства фирмы "A. Nattermann & Cie. GmbH".

Твердый носитель может включать в себя вещества, которые также выступают в роли ароматизаторов, смазывающих веществ, разбавителей, суспендирующих веществ, наполнителей, веществ, усиливающих скольжение, вспомогательных веществ для прессования, связующих веществ или агентов, способствующих распаду таблеток; твердый носитель может представлять собой материал для изготовления капсул. В порошковых композициях носитель представляет собой тонкоизмельченное вещество, смешанное с тонкоизмельченным активным ингредиентом. В таблетках активный ингредиент в соответствующих пропорциях смешан с носителем, который обладает свойствами, необходимыми для прессования, и спрессован в таблетки нужной формы и размера. Порошки и таблетки, предпочтительно, содержат до 99% активного ингредиента. Подходящие твердые носители включают в себя, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактозу, декстрин, крахмал, желатин, целлюлозу, метилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидин, воски с низкой температурой плавления и ионообменные смолы.

Жидкие носители используются для приготовления растворов, суспензий, эмульсий, сиропов, эликсиров и композиций под давлением. Активный ингредиент может быть растворен или суспендирован в фармацевтически приемлемом жидком носителе, таком как вода, органический растворитель, их смесь или фармацевтически приемлемые масла и жиры. Жидкий носитель может содержать другие фармацевтически приемлемые добавки, такие как разбавители, эмульгаторы, буферы, консерванты, сластители, ароматизаторы, суспендирующие агенты, загустители, красители, регуляторы вязкости, стабилизаторы или осморегуляторы. Подходящие примеры жидких носителей для перорального и парентерального назначения включают воду (частично содержащую вышеуказанные добавки, напр., производные целлюлозы, предпочтительно раствор натрий- карбоксиметилцеллюлозы), спирты (включая одноатомные и многоатомные спирты, напр., гликоли) и их производные, а также масла (напр., фракционированное кокосовое масло и арахисовое масло). Носитель для парентерального назначения также может представлять собой маслянистый эфир, такой как этилолеат и изопропилмиристат. Стерилиные жидкие носители используются в стерильных жидких композициях для парентерального назначения. Жидкий носитель для композиций под давлением может представлять собой галогенированный углеводород или другой диспергатор.

Жидкие фармацевтические композиции, представляющие собой стерильные растворы или суспензии, можно использовать, например, для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций. Стерильные растворы можно также вводить внутривенно.

Соединение как в виде жидкой, так и в виде твердой композиции можно назначать для перорального приема. Соединения по настоящему изобретению можно вводить ректально в форме обычных свечей. Для введения через нос или в виде внутрибронхиальных ингаляций или вдуваний, соединения по изобретению можно использовать в виде водных или частично водных растворов, которые применяют в форме аэрозолей. Соединения по изобретению можно также вводить чрескожно посредством наложения на кожу состава, содержащего активное соединений, и носителя, который инертен к активному соединению, нетоксичен к коже и обеспечивает доставку агента для абсорбции в кровь через кожу. Носитель может иметь различную форму, например, представлять собой крем, мазь, пасту, гель и приспособление для доставки состава в кровь через кожу. Кремы и мази могут представлять собой вязкие жидкости или полутвердые эмульсии либо типа "масло-в-воде", либо типа "вода-в- масле". Пригодны также пасты, состоящие из абсорбирующих порошков, диспергированных в вазелине, или гидрофильном вазелине, содержащем активный ингредиент. Различные приспособления могут быть использованы для высвобождения активного ингредиента в кровь, такие как полунепроницаемая мембрана, закрывающая резервуар, содержащий активный ингредиент с носителем или без него, или матрица, содержащая активный ингредиент. В литературе описаны и другие приспособления.

Кроме того, соединения по изобретению могут применяться в виде растворов, кремов или лосьонов, для чего приготавливают композиции с фармацевтически приемлемыми носителями, содержащими 0,1-5%, предпочтительно 2% активного соединения, каковые композиции наносят на участки, пораженные грибками.

Требования в отношении дозировок различны для каждой конкретной композиции и зависят от способа введения, серьезности заболевания и состояния пациента. На основе результатов, полученных в стандартных фармакологических тестах, предполагаемые суточные дозы составляют 0,1 мкг/кг-100 мг/кг предпочтительно в диапазоне 0,001-25 мг/кг, еще лучше - в диапазоне 0,001-5 мг/кг. Лечение обычно начинают с небольших доз, ниже оптимальной дозы соединения. Постепенно дозировку увеличивают до достижения оптимального эффекта в данных условиях; точные дозы для перорального, парентерального введения, введения через нос или для внутрибронхиального введения устанавливаются врачом на основе опыта лечения конкретного пациента. Предпочтительно применять фармацевтическую композицию в виде отдельных доз, напр., в виде таблеток или капсул. В таком виде композиция подразделяется на отдельные дозы, содержащие нужные количества активного ингредиента; отдельные дозы могут быть в отдельных упаковках, например, в порошках, флаконах, ампулах, предварительно наполненных шприцах, или пакетиках, содержащих жидкости. Одна доза может представлять собой одну капсулу или таблетку, или же можно назначать нужное число таких капсул или таблеток.

Приведенные ниже примеры иллюстрируют приготовление репрезентативных соединений по настоящему изобретению и их биологическую активность.

Пример 1
42-эфир рапамицина с (тетрагидропиран-2-илокси) уксусной кислотой
2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,55 мл, 3,51 ммоль) добавляли через шприц в раствор тетрагидропиранового эфира гликолевой кислоты (0,562 г, 3,51 ммоль) и триэтиламина (0,49 мл, 3,51 ммоль) в 10 мл тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота. Смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре до образования белого осадка. Белый осадок удаляли вакуумной фильтрацией и фильтрат концентрировали в потоке азота на теплой водяной бане. Остаток растворяли в 10 мл бензола, после чего добавляли рапамицин (2,92 г, 3,19 ммоль) и диметиламинопиридин (0,429 г, 3,51 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли EtOAc, промывали холодным 1N раствором HCl (водным), насыщенным NaHCO₃ (водным) и соляным раствором, высушивали MgSO₄, фильтровали и концентрировали до получения маслянистого твердого вещества желтого цвета. После флэш-хроматографии (2X с 65% EtOAc-гексан) получали искомое соединение (1,114 г, 33%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-MS) m/z 1055,5 (М^-), 590,3 (южный фрагмент), 463,2 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 Мгц, d-6 диметилсульфоксид δ 4,60 (m, 1H, C(42)H), 4,66 (m, 1H), 4,14 (s, 2H), 3,73 (m, 1H), 3,42 (m, 1H).

¹³C ЯМР (100,6 Мгц, d-6 диметилсульфоксид δ 169,2, 97,4, 63,5, 61,2, 29,7, 24,8, 18,8.

Пример 2
42-эфир рапамицина с оксиуксусной кислотой
p-Толиолсульфокислоту (10 мг) добавили в раствор продукта из Примера 1 (306 мг, 0,29 ммоль) в 10 мл CH₃OH при 0^oC. Раствор перемешивали 2 часа при комнатной температуре, затем остановили реакцию с помощью насыщенного раствора NaHCO₃. Водную фазу экстрагировали 3X EtOAc и объединенные органические фазы промыли соляным раствором, высушили MgSO₄, профильтровали и концентрировали до получения белого твердого вещества.

(-) FAB-MS m/z 971,3 (М^-), 590 (южный фрагмент), 379,1 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,60 (m, 1H, C(42)H), 3,98 (s, 2H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 172,1, 59,7.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 1,80 нМ
Соотношение LAF: 0,83
Процентное изменение в тесте на адьювантный артрит в сопоставлении с контролем:
- 88%
Пример 3
42-эфир рапамицина с 2,2-диметил-3-(тетрагидропиран-2-илокси)пропионовой кислотой
В раствор тетрагидропиранового эфира 2,2-диметил-3-оксипропионовой кислоты (0,319 г, 1,58 ммоль) и триэтиламина (0,22 мл, 1,58 ммоль) в 5 мл сухого тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота добавили 2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,25 мл, 1,58 ммоль), добавку производили каплями через шприц. Смесь перемешивали в течение 4,5 часов при комнатной температуре. Белый осадок удаляли вакуумной фильтрацией и фильтрат концентрировали с помощью потока азота на теплой водяной бане. Остаток растворяли в 5 мл бензола, затем добавили рапамицин (1,31 г, 1,43 ммоль) и диметиламинопиридин (0,193 г, 1,58 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, разбавляли EtOAc, промывали 1N HCl (водным), насыщенным раствором NaHCO₃ (водным), H₂O и соляным раствором, высушивали MgSO₄, фильтровали и концентрировали до получения маслянистого твердого вещества желтого цвета. Поcле флэш-хроматографии (1X с 60% EtOAc-гексан, 1X 55% EtOAc-гексан) получали искомое соединение (0,356 г, 23%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-МS m/z 1097,7 (М^-), 590,4 (южный фрагмент).

¹H ЯМР (400 Мгц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,55 (m, 1H, C(42)H), 4,55 (m, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,42 (m, 1H), 1,13 (s, 3H), 1,11 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 Мгц, d-6 диметилсульфоксид) δ 175,0, 98,0, 73,8, 60,7, 42,6, 30,0, 24,9, 22,0, 21,6, 18,7.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 7,10 нМ
Соотношение LAP: 0,34
Пример 4
42-эфир рапамицина с 3-гидрокси-2,2-диметилпропионовой кислотой
p-Толуолсульфокислоту (10 мг) добавили в раствор продукта из Примера 3 (250 мг, 0,23 ммоль) в 10 мл CH₃OH при 0^oC. Раствор перемешивали 2 часа при комнатной температуре, затем остановили реакцию с помощью насыщенного раствора NaHCO₃. Водную фазу экстрагировали 3X EtOAc и объединенные органические фазы промыли соляным раствором, высушили MgSO₄, профильтровали и концентрировали до получения белого твердого вещества. После очистки флэш-хроматографией (2X с применением 75% EtOAc-гексана) получали искомое соединение (103 мг, 45%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-MS m/z 1013,3 (М^-), 590,2 (южный фрагмент), 421,1 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,48 (m, 1H, C(42)H), 3,39 (d, 2H), 1,06 (s, 6H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 175,5, 68,0, 44,1, 21,7.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 0,80 нМ
Соотношение LAF: 1,25
Время выживания кожного трансплантата: 10,7±0,5 дней.

Примеры 5 и 6
42-эфир рапамицина с 2,2-диметил(1,3)диоксалан-4-карбоновой кислотой (Пример 5)
31,42-диэфир рапамицина с 2,2-диметил(1,3)диоксалан-4-карбоновой (Пример 6)
2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,56 мл, 3,61 ммоль) добавили через шприц в раствор изопропилиденкеталя 2,3-диоксипропионовой кислоты (0,527 г, 3,61 ммоль) и триэтиламина (0,50 мл, 3,61 ммоль) в 10 мл тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота. Смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Белый осадок удаляли вакуумной фильтрацией и фильтрат концентрировали с помощью потока азота на теплой водяной бане. Остаток растворяли в 15 мл бензола, затем добавили рапамицин (3,00 г, 3,28 ммоль) и диметиламинопиридин (0,441 г, 3,61 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли EtOAc, промывали холодным 1N раствором HCl (водным), насыщенным NaHCO₃ (водным) и соляным раствором, высушивали MgSO₄, фильтровали и концентрировали до получения желтой и пены. После флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 50-60-75-100% EtOAc-гексан, 4X 65% EtOAc-гексан) получали искомые соединения. Менее полярное соединение с эфирной группой в 31, 42 положениях (0,415 г) элюировали первым, а более полярное соединение с моноэфиром в 42 положении (0,601 г, 16%) элюировали вторым, и выделяли эти соединения в виде белых твердых веществ.

Пример 5
(-) FAB-MS) m/z 1041,4 (М^-), 590,3 (южный фрагмент), 449,2 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,6 (m, 1H, C(42)H), 4,6 (m, 1H), 4,20 (dd, 1H), 3,96 (m, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,30 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 170,5, 110,2, 73,4, 66,6, 25,7, 25,4.

Пример 6
(-) FAB-MS m/z 1169,6 (M^-).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 5,3 (m, 1H, C(31)H), 4,6 (m, 1H, C(42)H), 4,6 (m, 2H), 4,19 (t, 1H), 4,13 (t, 1H), 3,9 (m, 2H), 1,36 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,28 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметисульфоксид) δ 170,5, 169,2, 110,3, 110,2, 73,4, 66,6, 66,5, 25,8, 25,7, 25,4, 25,1.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
Пример 5
LAF IC₅₀: 1,20 нМ
Соотношение LAF: 0,74
Пример 6
LAF IC₅₀: 1,30 нМ
Соотношение LAF: 0,5.

Пример 7
42-эфир рапамицина с 2,3-диоксипропионовой кислотой
Раствор продукта из Примера 5 (351 мг, 0,34 ммоль) в 10 мл тетрагидрофурана и 10 мл 1N HCl перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Смесь разбавили EtOAc, промыли насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором, высушили MgSO₄, профильтровали и концентрировали до получения масла. После очистки флэш-хроматографией (1X с применением EtOAc, 1X с применением 10% MeOH-CH₂Cl₂, 1X с 5% MeOH-EtOAc) получали искомое соединение (78 г, 23%) в виде белого твердого вещества.

(-) PAB-MS m/z 1001,2 (М^-), 590,2 (южный фрагмент), 409,1 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,5 (m, 1H, C(42)H), 3,60 (m, 1H), 3,45 (m, 2H).

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 1,4 нМ
Соотношение LAF: 0,40
Пример 8
42-эфир рапамицина с 2,2-диметил(1,3)диоксан-5-карбоновой кислотой
2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,98 мл, 6,27 ммоль) добавили через шприц в раствор изопропилиденкеталя 2-(гидроксиметил)-3-оксипропионовой кислоты (1,000 г, 6,24 ммоль) и триэтиламина (0,90 мл, 6,46 ммоль) в 20 мл тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота. Смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре до образования белого осадка. Белый осадок удаляли вакуумной фильтрацией и фильтрат концентрировали с помощью потока азота на теплой водяной бане. Остаток растворяли в 20 мл бензола, затем добавили рапамицин (5,70 г, 6,24 ммоль) и диметиламинопиридин (0,762 г, 6,24 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли EtOAc, промывали H₂O и соляным раствором, высушивали MgSO₄, фильтровали и концентрировали до получения желтого твердого вещества. После флэш-хроматографии (75% EtOAc-гексан) получали искомое соединение (4,17 г, 63%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-MS m/z 1055,8 (М^-), 590,5 (южный фрагмент), 463,4 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,55 (m, 1H, C(42)H), 3,95 (m, 4H), 1,30 (s, 6H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 170,1, 97,4, 59,5, 24,8, 22,5.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 0,76 нМ
Соотношение LAF: 0,45
Пример 9
42-эфир рапамицина с 3-гидрокси-2-оксиметилпропионовой кислотой
Раствор продукта из Примера 8 (3,30 г, 3,12 ммоль) в 50 мл тетрагидрофурана и 25 мл 1N HCI перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь разбавили насыщенным раствором NaHCO₃ и экстрагировали EtOAc (3X). Объединенные органические фазы промыли насыщенным раствором NaCl (водным), высушили MgSO₄, профильтровали и концентрировали до получения желтой пены. После очистки флэш-хроматографией (1X с применением EtOAc, 2X с применением 5% EtOH-EtOAc) получали искомое соединение (1,68 г, 53%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-MS, m/z 1015,5 (М^-), 590,3 (южный фрагмент), 423,3 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 димeтилcульфoкcид) δ 4,6 (brs, 2H), 4,55 (m, 1H, C(42)H), 3,55 (m, 4H), 2,57-2,53 (m, 1H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 172,2, 59,3, 51,5.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 0,84 нМ
Соотношение LAF: 0,57.

Пример 10
42-эфир рапамицина с 2,2,5-триметил(1,3)диоксан-5-карбоновой кислотой
В раствор изопропилиденкеталя 2,2-бис(оксиметил)пропионовой кислоты (1,041 г, 5,98 ммоль) (приготовленный по способу, описанному в работе Bruice, J.Am. Chem. Soc. 89: 3568 (1967)) и триэтиламина (0,83 мл, 5,98 ммоль) в 20 мл безводного тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота добавили 2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,93 мл, 5,98 ммоль) и полученную белую суспензию перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. Осадок удаляли вакуумной фильтрацией, промывая колбу и осадок на фильтре дополнительным количеством (10 мл) сухого тетрагидрофурана. Фильтрат концентрировали в роторном испарителе до получения белого твердого вещества. Остаток растворяли в 20 мл сухого бензола, затем добавляли рапамицин (5,47 г, 5,98 ммоль) и диметиламинопиридин (0,731 г, 5,98 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре смесь разбавляли EtOAc, промывали H₂O и насыщенным раствором NaCl (водным), высушивали MgSO₄, фильтровали и выпаривали до получения желтого масла. После флэш-хроматографии (5X 60% EtOAc-гексан) получали искомое соединение (2,2 г, 34%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-MS m/z 1069,5 (М^-), 590,3 (южный фрагмент), 477,2 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,57 (m, 1H, C(42)H), 4,02 (d, 2H), 3,60 (d, 2H), 1,34 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,06 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 173,2, 99,0, 65,0, 22,2, 18,1.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 4,90 нМ
Соотношение LAF: 0,41
Срок выживания кожного трансплантата: 11,0±1,3 дня.

Пример 11
42-эфир рапамицина с 2,2-бис-(оксиметил)пропионовой кислотой
Раствор продукта из Пример 10 (2,8 г, 2,65 ммоль) в 50 мл тетрагидрофурана и 25 мл 1N HCl перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Смесь разбавили водой и три раза экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы промыли насыщенным раствором NaHCO₃, насыщенным раствором NaCl, высушили MgSO₄, профильтровали и выпаривали до получения желтого маслянистого твердого вещества. После очистки флэш-хроматографией (3X с применением EtOAc) получали искомое соединение (1,6 г, 59%).

(-) FAB-MS m/z 1029,6 (М^-), 590,4 (южный фрагмент), 437,3 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,5 (m, 1H, C(42)H), 3,45 (s, 4H), 1,04 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 174,2, 63,7, 63,6, 49,9, 16,8.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 0,80 и 1,80 нМ
Соотношение LAF: 1,00 и 0,44
Срок выживания кожного трансплантата: 11,4±1,5 и 12,0±1,1 дней.

Процентное изменение при адьювантном артрите в сопоставлении с контролем: -88%.

Пример 12
42-эфир рапамицина с 2,2-диметил-5-(2-триметилсила-нилэтоксиметил) (1,3)диоксан-5-карбоновой кислоты
2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,14 мл, 0,86 ммоль) через шприц добавили в раствор изопропилиденкеталя 2,2-бис-(гидроксиметил)-2-(2-триметилсилилэтокси) пропионовой кислоты (0,250 г, 0,86 ммоль) и триэтиламина (0,12 мл, 0,86 ммоль) в 2 мл тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота. Смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре до образования белого осадка. Белый осадок удаляли вакуумной фильтрацией, фильтрат концентрировали с помощью потока азота на теплой водяной бане. Остаток растворяли в 20 мл бензола, затем добавляли рапамицин (0,786 г, 0,86 ммоль) и перемешивали смесь в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли EtOAc, промывали H₂O и соляным раствором, высушивали MgSO₄ фильтровали и концентрировали до получения желтого твердого вещества. После флэш-хроматографии (градиент элюирования: 40-60-80-100% EtOAc-гексан) получали искомое соединение (0,559 г, 54%) в виде белого твердого вещества.

(-) FAB-MS m/z 1185,2 (М^-), 590,1 (южный фрагмент), 593 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид] δ 4,55 (m, 1H, C(42)H), 3,73 (m, 4H), 3,57 (s, 2H), 3,43 (t, 2H), 1,29 (s, 6H), 0,79 (t, 2H), -0,04 (s, 9H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 171,1, 97,7, 70,2, 68,1, 61,3, 46,0, 24,6, 22,1, 14,6, -1,3.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
LAF IC₅₀: 7,20 нМ
Соотношение LAF: 0,05.

Примеры 13 и 14
42-эфир рапамицина с 3-метил-1,5-диоксаспиро(5,5)ундекан-3-карбоновой кислотой (Пример 13) и
31,42-диэфир рапамицина с 3-метил-1,5-диокса- спиро(5,5)ундекан-3-карбоновой кислотой (Пример 14)
2,4,6-трихлорбензоилхлорид (0,16 мл, 1,0 ммоль) через шприц добавили в раствор циклогексилиденкеталя 2,3-диоксипропионовой кислоты (0,214 г, 1,0 ммоль) и триэтиламина (0,14 мл, 1,0 ммоль) в 2,5 мл тетрагидрофурана при 0^oC в атмосфере азота. Смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Белый осадок удаляли вакуумной фильтрацией, фильтрат концентрировали с помощью потока азота на теплой водяной бане. Остаток растворяли в 3 мл бензола, затем добавляли рапамицин (0,457 г, 0,5 ммоль) и диметиламинопиридин (0,061 г, 0,5 ммоль) и перемешивали смесь в течение ночи при комнатной температуре. Смесь разбавляли EtOAc, холодным IN раствором HCl (волн.), насыщенным раствором NaHCO₃ (водным), и соляным раствором, высушивали MgSO₄, фильтровали и концентрировали до получения желтой пены. После флэш-хроматографии (45-50% EtOAc-гексан) получали искомые соединения. Соединение с эфирной группой в 31, 42 положениях (0,168 г, 26%) элюировали первым, а более полярное соединение с моноэфирной группой в 42 положении (0,301 г, 52%) элюировали вторым, и выделяли продукты в виде белых твердых веществ.

Пример 13
(-) FAB-MS m/z 1109.5 (М^-), 590,3 (южный фрагмент), 517,3 (северный фрагмент).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 4,55 (m, 1H, C(42)H), 3,61 (t, 4H), 1,04 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 173,3, 97,2, 64,2.

Пример 14
(-) FAB-MS m/z 1305,6 (M^-).

¹H ЯМР (400 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 5,25 (m, 1H, C(31)H), 4,55 (m, 1H, C(42)H), 3,64-3,54 (m, 8H), 1,05 (s, 3H), 0,97 (s, 3H).

¹³C ЯМР (100,6 МГц, d-6 диметилсульфоксид) δ 173,2, 172,1, 97,3, 97,2, 64,3, 64,2, 63,9.

Результаты, полученные в стандартных фармакологических тестах:
Пример 13
LAF IC₅₀: 0,6 нМ
Соотношение LAF: 2,00.

Пример 14
LAF: ингибировал пролиферацию Т-клеток на 43% при 0,1 мкм.

Формула изобретения

1. Гидроксиэфиры рапамицина общей формулы I

где каждый из R¹ и R², независимо, представляют собой водород или -СО(СR³R⁴)_b(СR⁵R⁶)_dCR⁷R⁸R⁹;
каждый из R³ и R⁴, независимо, представляют собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода;
каждый из R⁵ и R⁶, независимо, представляют собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, или R⁵ и R⁶ могут вместе образовывать группу X или циклоалкильное кольцо с 3-8 атомами углерода;
R⁷ представляет собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, (СR³R⁴)_fОR¹⁰;
каждый из R⁸ и R⁹, независимо, представляют собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, -(СR³R⁴)_fОR¹⁰ или R⁸ и R⁹ могут вместе образовывать группу Х или циклоалкильное кольцо с 3-8 атомами углерода;
R¹⁰ представляет собой водород, алкил с 1-6 атомами углерода, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силил, три(алкил с 1-6 атомами углерода) силилэтил, или тетрагидропиранил;
Х представляет собой 5-(2,2-ди(алкил с 1-6 атомами углерода)) (1,3) диоксанил, 5-(2-спиро(циклоалкил с 3-8 атомами углерода)) (1,3) диоксанил, 4-(2,2-ди(алкил с 1-6 атомами углерода)) (1,3)-диоксанил, 4-(2-спиро(циклоалкил с 3-8 атомами углерода)) (1,3) диоксанил;
b = 0-6;
d = 0-6;
f = 0-6,
при условии, что R¹ и R² не одновременно являются водородом, а также при условии, что либо R¹, либо R² содержит по меньшей мере один (СR³R⁴)_f ОR¹⁰, Х или циклоалкил с 3-8 атомами углерода, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

2. Соединение по п.1, где R² представляет собой водород, или их фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

3. Соединение по п.2, где b = 0 и d = 0, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

4. Соединение по п.3, где каждый из R⁸ и R⁹, независимо, представляют собой водород, алкил, или -(СR³R⁴)_f ОR¹⁰, или вместе образуют Х, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

5. Соединение по п.1, представляющее собой рапамицин, имеющий в 42 положении эфир (тетрагидропиран-2-илокси) уксусной кислоты, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

6. Соединение по п.1, представляющее собой рапамицин, имеющий в 42 положении эфир оксиуксусной кислоты, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

7. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина 2,2-диметил-3-(тетрагидропиран-2-илокси) пропионовой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

8. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 3-гидрокси-2,2-диметил-пропионовой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

9. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 2,2-диметил-(1,3)диоксалан-4-карбоновой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

10. Соединение по п.1, представляющее собой 31,41-диэфир рапамицина с 2,2-диметил-(1,3)диоксалан-4-карбоновой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

11. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 2,3-дигидроксипропионовой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

12. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 2,2-диметил-(1,3)диоксан-5-карбоновой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

13. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 3-гидрокси-2-гидроксиметилпропионовой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

14. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина 2,2,5-триметил-(1,3)диоксан-5-карбоновой кислоты, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

15. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 2,2-бис-(гидроксиметил)пропионовой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

16. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 2,2-диметил-5-(2-триметилсиланилэтоксиметил) (1,3) диоксан-5-карбоновой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

17. Соединение по п.1, представляющее собой 42-эфир рапамицина с 3-метил-1,5-диокса-спиро(5,5)ундекан-3-карбоновой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

18. Соединение по п.1, представляющее собой 31, 42-диэфир рапамицина с 3-метил-1,5-диокса-спиро(5,5)ундекан-3-карбоновой кислотой, или фармацевтически приемлемая соль этого соединения.

19. Способ лечения состояния, связанного с реакцией несовместимости при трансплантации у млекопитающих, нуждающихся в подобном лечении, включающий в себя назначение указанному млекопитающему эффективного количества соединения формулы I по п.1 или фармацевтически приемлемую соль этого соединения.

20. Способ лечения ревматоидного артрита у млекопитающих, нуждающихся в таком лечении, который включает в себя назначение указанному млекопитающему эффективного количества соединения формулы I по п.1 или фармацевтически приемлемую соль этого соединения.

21. Способ получения гидроксиэфиров рапамицина общей формулы I по п.1, заключающийся в том, что рапамицин или его функциональные производные подвергают взаимодействию с ацилирующим агентом формулы II
НО-СО(СR³R⁴)_b(СR⁵R⁶)_dСR⁷R⁸R⁹,
в которой R³ - R⁹, b и d имеют значения, приведенные в п.1,
при условии, что свободные гидроксильные группы защищены и при желании защищена группа, находящаяся в 42 положении рапамицина или его функционального производного, с помощью соответствующей защитной группы, с последующим после ацилирования удалением любых защитных групп, присутствие которых было необходимо.