Способ тестирования растений на вирусы

 

Изобретение предназначено для использования в сельском хозяйстве в фитопатологии при тестировании растений на вирусы, а также в процессе очистки вирусов и приготовления антисывороток. Способ включает приготовление фосфатного буфера, в который дополнительно вводят гидроксипроизводное бензойной кислоты с последующим заражением травянистых растений-индикаторов соком исследуемых растений. О наличии вирусов судят по результатам проведения иммуноферментного анализа растения-индикатора, при этом тестируемый образец считается зараженным вирусом при превышении оптической плотности образца над оптической плотностью контроля более чем в 2 раза. Способ позволяет увеличить концентрацию вирусов, ускорить заражение растений-индикаторов и процесс тестирования, получить более достоверные результаты. 1 з.п.ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и фитопатологии и может быть использовано при тестировании растений на вирусы.

Известен способ тестирования на древесных индикаторах /см. Патент РФ N 2016509 кл. A 01 H 1/04, A 01 G 7/00 Способ диагностики заражения черной смородины реверсией// Атрощенко Г.П.- опубл. 1994, Б.И. N 14/. Однако указанный способ требует длительного периода и диагностика затягивается до 7- 9 месяцев. Для ускорения диагностики используют травянистые индикаторы.

Наиболее близким техническим решением является способ тестирования на травянистых индикаторах, где в качестве добавки в буфер для заражения используется никотин-основание /см. Технология производства безвирусного посадочного материала плодовых, ягодных культур и винограда // М.: ГПО "Союзплодопитомник". - 1989. - С. 6-7. - прототип/.

Недостатком указанного способа является то, что не во всех случаях наблюдается заражение, накопление вирусов протекает медленно, а симптомы вирусных заболеваний не проявляются, вследствии чего затрудняется диагностика.

Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является увеличение концентрации вирусов, ускорение заражения растений-индикаторов и процесса тестирования, получение более достоверных результатов.

Поставленная задача решается тем, что в способе тестирования растений на вирусы, включающем приготовление фосфатного буфера, заражение травянистых растений- индикаторов соком исследуемых растений и анализ реакции индикаторов, в фосфатный буфер дополнительно вводят гидроксипроизводное бензойной кислоты в концентрации 1·10^-5 - 5·10^-4М.

Кроме того, поставленная задача решается тем, что в способе тестирования растений на вирусы о наличии вирусов судят по результатам проведения иммуноферментного анализа растений-индикаторов после их заражения.

Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что в состав буфера для заражения вводят гидроксипроизводное бензойной кислоты. Следует отметить, что известна роль фенольных соединений как регуляторов роста и веществ, индуцирующих устойчивость к неблагоприятным условиям, к патогенам грибной и другой природы /Jlja Raskin. Salicylate, a new plant hormonc//Plant Physio/. - 1992. - 99. - P.799 - 803/. Однако способ тестирования с использованием фенольных соединений неизвестен. Это позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию "новизна".

Предложенное техническое решение обладает изобретательским уровнем, так как предложенный способ совершенно неочевиден для специалистов, работающих в области вирусологии и ранее не был использован для этих целей, то есть предложен впервые.

Применение предлагаемого способа позволяет получать новый эффект - увеличивать концентрацию вирусов, ускорять процесс тестирования, получать более достоверные результаты. Все компоненты для осуществления предложенного способа производятся промышленностью, поэтому изобретение вполне может быть реализовано в условиях учреждений, работающих в области вирусологии. При этом не требуется разработка специального оборудования.

Пример 1. В экстрагирующий фосфатный буфер вносят навеску листьев тестируемого растения ежевики в количестве 0,5 г, листья с буфером растирают до образования однородной массы. Образовавшимся инокулюмом натирают поверхность предварительно опудренных карборундом листьев травянистого индикатора - табака. Оценку результатов иммуноферментного анализа на наличие вирусов производят на адсорбциометре "Динатек".

Как видно из таблицы 1, при использовании прототипа /никотин-основания/ наличие вируса не подтверждается.

При использовании предложенного способа тестирования с добавлением в буфер гидроксипроизводного бензойной кислоты в концентрации 1·10^-5 - 5·10^-4М заражение растения вирусом мозаики резухи подтверждается и в 2,3 - 3,7 раза превышает прототип. Более низкие /5·10^-6М/ или высокие /1·10^-3М/ концентрации гидроксипроизводного бензойной кислоты не давали сероположительной реакции в отличие от предложенного диапазона концентраций, а следовательно, были неэффективными.

Пример 2. Операции осуществляют по примеру 1. По результатам таблицы 2 заражение растений латентной кольцевой пятнистостью земляники подтверждается только при применении разработанного способа с использованием гидроксипроизводного бензойной кислоты в концентрации 1·10^-5 - 5·10^-4М.

Разница в результатах, полученных по предложенному способу, в сравнении с прототипом составляет 2,2 - 2,8 раза.

Пример 3. Операции осуществляют по примеру 1. Заражение ежевики черной кольцевой пятнистостью томатов при использовании никотин-основания не подтверждается, поскольку оптическая плотность образца по отношению к контролю составляет 1,1 /таблица 3/.

При применении гидроксипроизводного бензойной кислоты в концентрации 1·10^-5 - 5·10^-4М отношение оптической плотности образца к контролю составляет 2,0-3,5, что свидетельствует о заражении образца. Разница в результатах предлагаемого способа и прототипа составляет 1,8-3,2 раза, следовательно, предложенный способ дает более достоверную информацию.

Пример 4. Операции осуществляются по примеру 1. По данным таблицы 4 сероположительная реакция на заражение вирусом кольцевой пятнистости малины была получена в варианте с гидроксипроизводным бензойной кислоты в концентрации 1·10^-5 - 5·10^-4М.

Более низкая /5·10^-6М/, высокая /1·10^-3М/ концентрация и никотин-основание давали сероотрицательную реакцию. Разница в результатах составляет 1,2-2,3 раза по сравнению с прототипом.

Полученные результаты свидетельствуют о достижении значительного технического эффекта в сравнении с известным способом. Разница в результатах между прототипом и предложенным способом составляет в среднем 1,2 - 3,7 раза. Предложенный способ обеспечивает получение более достоверных результатов по зараженности растений вирусами. Тестирование растений с использованием разработанного способа позволяет осуществлять интенсивное накопление вирусов в тканях индикаторов, что может найти широкое применение при идентификации вирусов, в процессе их очистки и приготовления антисывороток.

Получение более быстрых, точных результатов ускоряет процесс тестирования, оздоровления растений и в целом технологический цикл производства посадочного материала высших категорий качества.

Формула изобретения

1. Способ тестирования растений на вирусы, включающий приготовление фосфатного буфера, заражение травянистых растений-индикаторов соком исследуемых растений и определение степени зараженности растений-индикаторов вирусами, отличающийся тем, что в фосфатный буфер дополнительно вводят гидроксипроизводное бензойной кислоты в концентрации 1·10^-5 - 5·10^-4М.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что степень зараженности растений-индикаторов вирусами определяют методом иммуноферментного анализа, при этом тестируемый образец считается зараженным вирусом при превышении оптической плотности образца над оптической плотностью контроля более чем в 2 раза.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4