Штамм вируса canine parvovirus "риэль" для изготовления вакцины против парвовирусной инфекции плотоядных и вакцины "владивак" против вирусных болезней плотоядных на его основе

 

Изобретение предназначено для изготовления средств специфической профилактики и лечения болезней плотоядных. Аттенуированный высокоактивный новый штамм вируса Canine parvovirus "Риэль" используют для изготовления вакцины "Владивак" против парвовирусного энтерита плотоядных и ассоциированной вакцины "Владивак-2" против парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак. Вакцина "Владивак" против парвовирусного энтерита плотоядных содержит в качестве антигена культуральную вирусную суспензию штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор. Ассоциированная вакцина "Владивак-2" содержит культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл и в качестве антигенов аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита - культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор. Изобретение повышает иммуногенную активность и расширяет иммуногенный спектр вакцин на основе штамма вируса парвовирусного энтерита плотоядных, способных обеспечить длительный и надежный иммунитет против вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей. 3 с.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касается средств специфической профилактики и лечения болезней плотоядных, в частности к средствам специфической профилактики парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита.

Возбудители этих болезней играют ведущую роль в этиологии инфекционных заболеваний собак и пушных зверей. Указанные инфекции возникают у плотоядных как в виде моноинфекций, так и смешанных вирусных инфекций.

Для профилактики парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и гепатита плотоядных используют моновалентные и ассоциированные вакцины.

Известна вакцина против парвовирусной инфекции плотоядных на основе штамма панлейкопении кошек "Ганнибал" (авторское свидетельство СССР N 1413752, A 61 K 39/33, 1986).

Известна вакцина для профилактики аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита, содержащая инактивированный штамм аденовируса "Ада", обладающего антигенным родством с вирусом инфекционного гепатита собак, и адъювант - гидроокись алюминия (патент РФ N 1568520, C 12 N 7/00, 1995).

Однако известные моновалентные вакцины требуют проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, недостаточно эффективны и не обеспечивают максимального профилактического эффекта, т.к. все чаще встречается смешанное течение инфекционных заболеваний.

Известна также ассоциированная вакцина для профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита у собак - "Тетравак", содержащая инактивированную вирусную суспензию штамма аденовируса "Ада", инактивированную вирусную суспензию штамма панлейкопении кошек "Ганнибал", вирусный материал штамма вируса чумы ЭПМ, гидроокись алюминия, сорбит-желатозный стабилизатор, раствор Хенкса и воду дистиллированную (патент РФ N 2030917, А 61 К 39/295, 1995).

Недостатком известной ассоциированной вакцины является невысокая иммуногенная активность.

Задачей изобретения является получение штамма вируса парвовирусной инфекции плотоядных и вакцин на его основе, обладающих широким антигенным спектром и высокой иммуногенной активностью, тем самым обеспечивающих защиту плотоядных от вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей.

Технический результат изобретения заключается в повышении иммуногенной активности и расширении иммуногенного спектра вакцин на основе штамма вируса парвовирусного энтерита плотоядных, способных обеспечить длительный и надежный иммунитет против вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей.

Сущность изобретения заключается в следующем: аттенуированный высокоактивный новый штамм вируса Canine parvovirus "Риэль" используют для изготовления вакцины "Владивак" против парвовирусного энтерита плотоядных и ассоциированной вакцины "Владивак-2" против парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак.

Вакцина "Владивак" против парвовирусного энтерита плотоядных содержит в качестве антигена культуральную вирусную суспензию штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор.

Ассоциированная вакцина "Владивак-2" против парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных содержит в качестве антигена парвовирусного энтерита культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл, в качестве антигенов аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита - культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор.

Для изготовления ассоциированных вакцин "Владивак-2" используют высокоактивные новые аттенуированные штаммы Canine parvovirus "Риэль" и Hepatitis adenovirus canine "Адель".

Аттенуированный штамм Canine parvovirus "Риэль" получен путем проведения 48 пассажей в культуре клеток почек котенка вирулентного штамма парвовируса собак и депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штамм Canine parvovirus "Риэль" характеризуется следующими свойствами.

Морфология. Безоболочечный икосаэдр диаметром 20-24 нм, семейство Parvoviridae, род Parvovirus.

Иммуногенные свойства. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Безвредность штамма. При внутривенном, оральном, подкожном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении не вызывает заболевания собак.

Преобладающий тропизм - эпителиотропный.

Гемагглютинирующие свойства. Агглютинирует эритроциты свиньи и зеленой мартышки.

Серологические свойства. Активен в РН и реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек котят с титром 5,67 lg ТЦД 50/мл, перевиваемой культуре клеток CrFK, MDCK, KF.

Стабильность штамма. Антигенная активность сохраняется не менее 1 года на протяжении не менее чем 20 пассажей. Сохранение титра - в течение 1 года, активности в РТГА - 9 log в течение года.

Штамм поддерживается путем заражения первичной или субкультуры клеток почек котенка один раз в год.

Аттенуированный штамм вируса Hepatitis adenovirus canine "Адель" получен путем проведения 12 пассажей в культуре клеток MDCK вирулентного штамма аденовируса собак типа 2 и депонирован в коллекции вирусов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штамм "Адель" характеризуется следующими свойствами.

Морфология. Безоболочечный капсид кубической симметрии, несущий 12 фибрилл. Размер вириона 70-80 нм в диаметре. Штамм отнесен к семейству Adenoviridae, роду Adenovirus.

Преобладающий тропизм - эпителиотропный.

Антигенные свойства. В РН нейтрализует специфические сыворотки, полученные на данный штамм и штамм вируса "Ада".

Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек собак, перевиваемой культуре клеток MDCK, в культуре клеток почек котенка с титром 2 lg ТЦД 50/мл.

Безвредность штамма. При оральном, подкожном и внутримышечном введении не вызывает распространения и заболевания собак.

Серологические свойства. Активен в РН и реакции диффузной преципитации (РДП).

Иммуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Стабильность основных свойств штамма. Сохраняет титр в течение года, активность в РДП - 2 lg в течение года, антигенная активность сохраняется не менее 1 года на протяжении не менее чем 20 пассажей.

Штамм поддерживают путем заражения перевиваемой культуры клеток MDCK один раз в год.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для изготовления вакцины "Владивак" против парвовирусного энтерита плотоядных используют штамм вируса Canine parvovirus "Риэль". При этом монослой культуры клеток KF заражают вирусом в дозе 32 ГАЕ/мл одновременно с ее посевом в суспензию. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду ДМЕМ с добавлением 5%-ной сыворотки плодов коров. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при температуре 37^oC. После этого собирают вируссодержащую жидкость во флаконы и добавляют стабилизатор, например сухое обезжиренное молоко.

После розлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.

Вакцина "Владивак" содержит вирус парвовирусного энтерита в титре не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл.

Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.

Вакцину "Владивак" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.

Вакцину "Владивак" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8-месячном возрасте, а затем один раз в год.

Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.

Вакцину нельзя применять с лечебной целью.

Вакцина "Владивак" против парвовирусного энтерита испытана на 2500 собаках разных пород и тхорзофретках.

В результате обследования иммунизированных животных получены данные, свидетельствующие об отсутствии патологических реакций за счет снижения реактогенности и установлено, что через 21 сутки формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту привитых животных от заражения вирулентным вирусом.

Пример 2. Получение ассоциированной вакцины "Владивак-2" против парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита и аденовирусной инфекции плотоядных осуществляют путем раздельного приготовления культуральной вирусной суспензии штаммов Canine parvovirus "Риэль" и Hepatitis adenovirus canine "Адель".

Для получения вируса парвовирусного энтерита используют культуру клеток KF. Культуру клеток KF заражают вирусом Canine parvovirus "Риэль" в дозе 32 ГАЕ/мл одновременно с ее посевом в суспензию. В качестве питательных сред используют среду ДМЕМ с добавлением 5%-ной сыворотки плодов коров и культивируют 5-7 суток при температуре 37^oC. После этого собирают вируссодержащую жидкость.

Для получения вируса аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак используют штамм Hepatitis adenovirus canine "Адель". Монослой культуры клеток MDCK заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199 и культивируют 5-7 суток до появления характерного ЦПД при 37^oC. После этого собирают вируссодержащую жидкость.

Полученные вируссодержащие материалы объединяют и в смесь добавляют стабилизатор для лиофилизации, например на основе сорбита и желатозы. Смесь охлаждают, расфасовывают в стерильные флаконы или ампулы и лиофилизируют.

Ассоциированная вакцина "Владивак-2" против парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных имеет следующий компонентный состав: вирусная суспензия аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂, ТЦД 50/мл; вирусная суспензия аттенуированного штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ ТЦД 50/мл; стабилизатор - до 1 л.

После розлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.

Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.

Вакцину "Владивак-2" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.

Вакцину "Владивак-2" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8-месячном возрасте, а затем один раз в год.

Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.

Вакцину нельзя применять с лечебной целью.

Вакцина "Владивак-2" испытана на 250 собаках разных пород и тхорзофретках.

В результате обследования иммунизированных животных установлено, что вакцина "Владивак-2" индуцирует иммунитет высокой напряженности к адено- и парвовирусам плотоядных.

Формула изобретения

1. Штамм вируса Canine parvovirus "Риэль", используемый для изготовления вакцин против парвовирусного энтерита плотоядных.

2. Вакцина против парвовирусного энтерита плотоядных, содержащая аттенуированный штамм парвовируса и стабилизатор, отличающаяся тем, что из аттенуированных парвовирусов она содержит штамм вируса Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл.

3. Вакцина против парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных, содержащая вирусные суспензии штаммов вируса энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита и стабилизатор, отличающаяся тем, что из вирусов энтерита она содержит вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл, а из вирусов аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита - вирусную суспензию аттенуированного штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ ТЦД 50/мл.