Способ оценки зрелости легких новорожденных

 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к неонатальной диагностике, и позволяет осуществлять качественный контроль за состоянием дыхательной системы новорожденного. Способ обеспечивает быструю недорогую наименее травматичную для новорожденного ребенка оценку зрелости его легких. Оценку зрелости легких у новорожденных детей проводят по наличию сурфактанта, при этом смешивают биологическую жидкость, полученную у ребенка в неонатальном периоде, с 96%-ным этиловым спиртом, встряхивают и оценивают пенообразование на поверхности жидкости пробы, причем в качестве исследуемой биологической жидкости используют супернатант, полученный после центрифугирования трахеобронхиального аспирата, взятого при проведении ИВЛ у новорожденного, в течение 10 мин при 600g. 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к неонатальной диагностике, и позволяет осуществлять качественный контроль за состоянием дыхательной системы новорожденного.

В последние годы в условиях снижения рождаемости особое внимание уделяется качеству здоровья новорожденного ребенка. Продолжает расти заболеваемость новорожденных, в том числе и по болезням с высоким риском летальности (сепсис, врожденные пороки развития, болезни легких). Большинство патологических состояний неонатального периода реализуется в виде синдрома дыхательных расстройств, в основе которого лежат различные патологические изменения в системе сурфактанта.

Сурфактант был открыт физико-химическими методами в экстрактах и смывах из респираторной ткани Pattle R.E. в 1955 году и Clements J.A. в 1957 году (цит. по Шишкин Г.С., 1975). Его локализация на поверхности альвеолярной выстилки первоначально была постулирована на основе теоретических расчетов и лишь позднее связана с пленкой, обнаруженной морфологами. В этой локализации сурфактант может обеспечивать стабилизацию воздушных просветов альвеол и предотвращать их спадение при уменьшении объема воздуха в легком, то есть является антиателектатическим фактором. Биохимическими исследованиями установлено, что сурфактант представляет высокомолекулярный липопротеид, основным компонентом которого является дипальметиллецитин. Сурфактант сформирован из мономолекулярных слоев фосфолипида, разделенных воздушно-водными интерфазами, в состав которых входят фосфолипид, белок, неорганические ионы и полисахарид. Физиологические исследования показали, что сурфактант является весьма нестабильным соединением и должен постоянно секретироваться. Секреция сурфактанта связывается с осмиофильными пластинчатыми тельцами альвеолоцитов II типа. Нарушение синтеза, секреции и утилизации сурфактанта в период новорожденности, связанный как с незрелостью альвеолоцитов II типа, так и развитием патологических процессов в легких приводит к развитию ателектатических состояний, нарушает переход к внеутробному дыханию.

Известен способ определения биофизического состояния легочной сурфактантной системы (Болгария, N 45969; МКИ4 G 01 N 33/487; 15.09.89 N 9), который заключается в том, что суспензию из бронхо-альвеолярного выделения центрифугируют, экстрагируют из нее фосфолипиды, полученный экстракт упаривают, растворяют и повторно испаряют растворитель в атмосфере азота; к полученной пленке добавляют буфер и обрабатывают ультразвуком; к липосомной суспензии прибавляют 1,6-дифенил-1,3,5-гексадиен, определяют анизотропную поляризацию флюоресценции последнего и полученные значения сравнивают с нормой.

Выполнение данного способа требует использования специального оборудования, проводится достаточно длительное время подготовленным персоналом в условиях биофизической лаборатории.

Известен способ прогнозирования дыхательных нарушений у новорожденных детей (Патент РФ 2128469; МКИ A 61 B 5/083; БИ N 10, 1999), который отличается тем, что у новорожденных в первые 2 часа после рождения оценивают состояние центрального звена регуляции дыхания и состояние вентиляционно-перфузионных отношений в легких, причем состояние центрального звена регуляции дыхания оценивают по форме капнографической кривой, а состояние вентиляционно-перфузионных отношений в легких оценивают по величине концентрации CO₂ в конечной порции выдыхаемого воздуха.

Данный способ дает только косвенные сведения в отношении состояния сурфактантной системы, требует специального оборудования.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является способ определения зрелости легких у эмбрионов и новорожденных, основанный на тесте Клементса (пенный тест) (США, N 4233032; МКИ³ G 01 N 33/48. 13/00; 11.11.80 Том 1000 N 2).

Для определения зрелости легких у эмбрионов и новорожденных точный объем амниотической жидкости смешивают с градуированными количествами 95-100% этанола и получают не менее 6 смесей градуированных объемных фракций этанола с градуировками от 0,5-0,50 до 0,01. Каждую смесь встряхивают и выявляют наивысшую объемную фракцию этанола, которая приводит к образованию пены на поверхности жидкости. Наличие пены во фракции с градуировкой не менее 0,45 указывает на зрелость легких.

Выполнение данного теста не требует специального оборудования и дорогостоящих химических реактивов, выполняется непосредственно при получении образцов клинического материала, не требует специальной подготовки персонала, показательно при считывании результатов. Однако тест выполняется при получении околоплодных вод, для чего необходимо проведение пункции амниотических оболочек, и дает качественную реакцию на сурфактант в биологическом субстрате, включающем не только компоненты респираторной системы, зрелость которой оценивается.

Значительное улучшение интенсивной помощи новорожденным детям в последние годы достигнуто в связи с внедрением новых методов лечения и выхаживания. Возможность получения трахеобронхиальных аспиратов у новорожденных в процессе проводимой интенсивной терапии при искусственной вентиляции легких открывает новые перспективы диагностики и лечения.

Имеются сведения о выполнении пенного теста при исследовании аспиратов желудочного содержимого у новорожденных (Chida S. et al., 1993). Однако данные исследования отражают состояние сурфактантной системы только в момент рождения новорожденного, в дальнейшем картина искажается за счет секреции желудочного содержимого, при этом невозможно проследить динамику изменений состояния системы сурфактанта.

Технической задачей предлагаемого изобретения является постановка быстрого, недорогого, наименее травматичного для новорожденного ребенка способа оценки зрелости его легких.

Поставленная задача решается путем разработки способа качественного определения сурфактанта в трахеобронхиальных аспиратах у новорожденных детей.

Трахеобронхиальные аспираты получают при проведении искусственной вентиляции легких у новорожденных детей. Материал для исследования берут во время санации интубационной трубки стерильным полиэтиленовым зондом после предварительного введения 1-2 мл теплого физиологического раствора. Полученную жидкость центрифугируют в течение 10 минут при ускорении 600 g/10000 оборотов в минуту. Полученный супернатант помещают в стеклянную пробирку для проведения пенного теста: к 1 мл надосадочной жидкости добавляют 1 мл 96^o этилового спирта и встряхивают в течение 15 секунд. Результат оценивают визуально на темном фоне: наличие кольца пузырьков по периферии соответствует положительной реакции, то есть указывает на наличие у новорожденного ребенка сурфактанта. Полное отсутствие пузырьков на поверхности оценивается как отрицательная реакция, что указывает на отсутствие у ребенка сурфактанта, а следовательно, и незрелость легких, сохранение их в состоянии ателектаза.

Пенный тест отражает не только наличие или отсутствие сурфактанта в аспирате, но и соответствует размерам агрегатов последнего: стабильное сохранение пены в течение 10-15 минут после выполнения пенного теста указывает на наличие у новорожденного качественного сурфактанта; тогда как быстрое угасание пены свидетельствует о нестабильности сурфактанта или снижении его количества, а следовательно, и о недостаточной эффективности проводимой ИВЛ и сохранении первичного ателектаза.

Оценка результата производится в течение первых минут после выполнения теста. В связи с тем, что отмечено различное время сохранения стабильности пузырьков, давалась полуколичественная оценка результатов. Полное отсутствие пузырьков на поверхности оценивалось как (-). Быстрое угасание пены, свидетельствовавшее о нестабильности сурфактанта, оценивалось как (±). Стабильное сохранение пены в течение 10-15 минут после проведения теста оценивалось как (+).

Пенный тест выполнен у 112 новорожденных детей в возрасте от 1 дня до 9 месяцев при проведении пролонгированной ИВЛ в условиях реанимационной палаты отделения патологии новорожденных Областной клинической больницы г. Новосибирска. Всего проведено 185 исследований по описанной методике. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Учитывая профиль отделения, большее количество исследований проведено в течение первого месяца жизни пациентов. Однако в нескольких клинических наблюдениях ИВЛ продолжалась в течение 4, 5 и 9 месяцев. Проведение пенного теста позволило предположить наличие у данных пациентов врожденных нарушений синтеза сурфактанта, не позволяющих длительное время прекратить проведение ИВЛ.

Дети с положительными результатами пенного теста в первые сутки жизни находились на ИВЛ не более 7 дней и имели в дальнейшем более благоприятное течение заболевания. Результаты пенного теста зависели от гестационного возраста больного и основной причины развившегося синдрома дыхательных расстройств (таблица 2). Сомнительные результаты пенного теста при повторных исследованиях в течение 1-2 дней, как правило, давали или положительную, или отрицательную динамику. Отрицательная динамика при этом может рассматриваться как повреждение системы сурфактанта за счет непосредственного воздействия ИВЛ и коррегироваться снижением концентрации кислорода в вводимых смесях.

Важно прослеживать динамику изменений пенного теста у конкретного пациента для своевременной коррекции терапии и определения прогноза заболевания. Проводимое ультраструктурное исследование респираторной ткани легких у умерших больных показало гиперсекрецию сурфактанта альвеолоцитами II типа с заполнением альвеолярных пространств ламеллярными тельцами. В данной ситуации гиперпродукция приводила к не менее тяжелым повреждениям ткани легких, чем недостаточная секреция сурфактанта.

Предлагаемый пенный тест, дающий качественную реакцию на наличие сурфактанта в трахеобронхиальных аспиратах, не требует больших затрат и оборудования при применении, наименее травматичен для ребенка, выполняется быстро и непосредственно у постели больного, а также имеет важное значение в перспективе применения искусственных сурфактантов у новорожденных.

Литература 1. Шишкин Г.С. Клеточная выстилка респираторных отделов легких // Легкое в норме / Под ред. И.К.Есиповой. - Новосибирск: Наука, 1975. - С.60-79.

2. Chida S. , Fujiwara Т., Koniushi M., Takahashi H., Sasaki M. Stable microbuble test for predicting the risk of respiratory distress syndrome: II. Prospective evaluation of the test on amniotic fluid and gastric aspirate // Eur. J. Pediatr. - 1993. - Vol. 152. - N 2. - P. 152-156.

Формула изобретения

Способ оценки зрелости легких новорожденных детей по наличию сурфактанта, включающий смешивание биологической жидкости, полученной у ребенка в неонатальном периоде, с 96%-ным этиловым спиртом, встряхивание и оценку пенообразования на поверхности жидкости пробы, отличающийся тем, что в качестве исследуемой биологической жидкости используют супернатант, полученный после центрифугирования трахеобронхиального аспирата, взятого при проведении ИВЛ у новорожденного, в течение 10 мин при 600 g, а оценку пенообразования ведут следующим образом: полное отсутствие пузырьков на поверхности пробы на темном фоне указывает на отсутствие нативного сурфактанта и незрелость легких новорожденного, угасание пены менее, чем через 10 мин после проведения реакции пенообразования указывает на малое количество нативного сурфактанта и его нестабильность у новорожденного, стабильное сохранение пены более чем через 10 мин после проведения реакции пенообразования указывает на зрелость легких новорожденного, нормальный синтез сурфактанта.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2