Способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или эфира и способ ее отделения от содержащейся в отфильтрованном ферментационном бульоне примеси клавам-2-карбоновой кислоты

 

Изобретение относится к способу получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или эфира, включающему в себя следующие стадии: добавление дополнительного растворителя, выбранного из спиртов С₁-С₆ и их смесей, к раствору клавулановой кислоты в не смешиваемом с водой растворителе; контактирование раствора с амином формулы I где R₁, R₂, R₃ и R₄ независимо представляют собой водород, прямой или разветвленный алкил С₁-С₈, гидроксиалкил С₂-С₄, или группы NR₁R₂ и NR₃R₄ совместно обозначают гетероциклическую группу, содержащую 3 - 6 метиленовых групп, возможно замененных кислородом, серой или иминогруппой, R₅ обозначает водород или метил, n представляет собой целое число 1 - 3; выделение образовавшейся аминной соли клавулановой кислоты; и конвертирование аминной соли в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль или эфир. Способ отделения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или эфира от содержащейся в отфильтрованном бульоне примеси клавам-2-карбоновой кислоты с помощью стадий, описанных выше. Технический результат - получение клавулановой кислоты новым и простым способом. 2 с. и 8 з.п.ф-лы, 11 табл.

Настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтически приемлемых солей клавулановой кислоты, в частности, но не исключительно, солей щелочных металлов и конкретно клавуланата калия.

Клавулановая кислота - тривиальное название (2R,5R,Z)-30(2-гидроксиэтилиден)-7-оксо-4-окса-1-азабицикло [3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты.

Клавулановая кислота, а также ее соли со щелочными металлами и эфиры обладают активностью ингибиторов бета-лактамазы, продуцируемой некоторыми как грамположительными, так и грамотрицательными микроорганизмами. Помимо ингибирования бета-лактамазы, клавулановая кислота и ее соли щелочных металлов также обладают синергическим действием с пенициллиновыми и цефалоспориновыми антибиотиками. Клавулановая кислота и ее соли используются в фармацевтических препаратах для предотвращения дезактивации бета-лактамных антибиотиков. Коммерческие препараты содержат клавуланат калия в комбинации с амоксициллина тригидратом. Клавуланат калия более стабилен, чем свободная кислота или ее другие соли.

Клавулановую кислоту получают путем ферментации микроорганизмов, таких как штаммы Стрептомицетов, например S.clavuligerus NRRL 3585, S. jimonjinensis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13716 и Streptomyces sp. P6621 FERM P2804. Полученную после ферментации водную культуру очищают и концентрируют традиционными способами, например фильтрацией и хроматографической очисткой, как описано в GB 1508977, перед тем, как подвергнуть водный раствор экстракции органическим растворителем с целью получения раствора неочищенной клавулановой кислоты в данном растворителе.

B GB 1508977 описан способ получения солей клавулановой кислоты путем фильтрации ферментационного бульона пропусканием через анионообменную смолу. Этот способ позволяет достигать приемлемых выходов, однако он требует использования сложных методов хроматографической очистки, а использование колонок со смолами подразумевает существенные вложения при организации производства в коммерческих масштабах.

В GB 1543563 описан способ ферментации, при котором значение pH среды поддерживается в интервале от 6,3 до 6,7. Фармацевтически приемлемые соли, такие как клавуланат калия, получают солевым обменом клавуланата лития.

В ЕР-А-0026044 описано использование трет-бутиламинной соли клавулановой кислоты в качестве промежуточного продукта при очистке клавулановой кислоты. Эта соль известна из ВЕ-862211 или DE 2733230, в которых указано, что она даже более стабильна, чем клавуланат натрия или калия. Третичный бутиламин является токсичным, трудноудаляемым из сточных вод соединением, что вызывает серьезную обеспокоенность проблемой загрязнения окружающей среды.

В ЕР-А-0562583 описано использование солей клавулановой кислоты с N, N'-монозамещенными симметричными этилендиаминами, таких как N,N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланат, в качестве полезных промежуточных продуктов при выделении и получении чистой клавулановой кислоты и клавуланатов щелочных металлов из этилацетатного экстракта.

В WO-93/25557 описано использование солей клавулановой кислоты с различными аминами в качестве промежуточных продуктов при получении клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфиров.

В ЕР-А-0594099 описано использование третичного октиламина клавулановой кислоты в качестве промежуточного продукта при получении клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей.

В WO-94/21647 описано использование N,N'-замещенных диаминов, таких как N,N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланат, в качестве полезных промежуточных продуктов при получении клавулановой кислоты и ее солей щелочных металлов.

В WO-94/22873 описано использование новых третичных диаммониевых солей клавулановой кислоты, таких как N,N,N^'N^'-тетраметил-1,2- диаминоэтанклавуланат, в качестве полезного промежуточного продукта при получении клавулановой кислоты и ее солей.

Задачей данного изобретения является получение клавулановой кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей, таких как клавуланат калия, новым и простым способом, при котором желаемое вещество получают с высокой чистотой и высоким выходом, причем исключается использование токсичных аминов.

В соответствии с данным изобретением предложен способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или эфира, включающий в себя следующие стадии: (а) добавление дополнительного растворителя к раствору клавулановой кислоты в несмешиваемом с водой растворителе; (б) контактирование раствора с амином; (в) выделение образовавшейся аминной соли клавулановой кислоты; и (г) превращение аминной соли в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль или эфир.

Клавулановая кислота может быть получена, как описано в JP Kokai 80-162993, путем ферментации микроорганизмов из рода Стрептомицетов, таких как Streptomyces sp. P6621 FERM P2804. Могут быть использованы и другие продуцирующие клавулановую кислоту штаммы Стрептомицетов, такие как S.clavuligerus.

Твердую часть удаляют из ферментационного бульона путем фильтрации или предпочтительно микрофильтрации.

Микрофильтрацию бульона проводят как описано в WO-95/23870. При предпочтительном способе по данному описанию ферментационный бульон, содержащий неочищенную клавулановую кислоту, мицелий, белки и другие суспендированные твердые частицы, очищают посредством микрофильтрации при значении pH от 5,8 до 6,2 и температуре приблизительно от 20 до 40^oC. Очищенный фильтрат концентрируют путем обратного осмоса, а затем прямо экстрагируют в сериях противоточных центрифугирующих экстракторов не смешиваемым с водой растворителем, предпочтительно этилацетатом. Экстракцию предпочтительно проводят при температуре от 15 до 25^oC и pH от 1 до 3. Затем экстракт высушивают до содержания воды менее 0,1 мол.%, далее концентрируют упариванием и осветляют активированным углем с получением полностью сухой органической фазы.

Концентрация неочищенной клавулановой кислоты в сухом концентрированном экстракте в не смешиваемом с водой растворителе, таком как этилацетат, может составлять от 8 до 40 г/л, предпочтительно от 20 до 40 г/л.

Альтернативные несмешиваемые с водой растворители включают в себя метилацетат, пропилацетат, н-бутилацетат, метилэтилкетон, метилизобутилкетон и их смеси.

Дополнительный растворитель может быть выбран из спиртов, нитрилов, кетонов и их смесей. Предпочтительные дополнительные растворители включают в себя спирты C₁ - C₆, ацетонитрил, ацетон и их смеси.

Особенно предпочтительные растворители выбирают из метанола, этанола, изопропанола, н-бутанола, изобутанола и ацетонитрила. Наиболее предпочтительным растворителем является метанол.

Амин может быть выбран из третичного бутиламина, бензил-трет-бутиламина, третичного октиламина, адамантанамина и втор-бутиламина. Также могут быть использованы и другие амины, предложенные для очистки клавулановой кислоты.

В наиболее предпочтительном воплощении данного изобретения амин имеет формулу I в которой заместители R₁, R₂, R₃ и R₄ независимо представляют собой: водород; прямой или разветвленный алкил C₁ - C₈; гидроксиалкил C₂ - C₄, или в которой группы NR¹R² и NR³R⁴ совместно обозначают гетероциклическую группу, содержащую от 3 до 6 метиленовых групп, возможно замещенных кислородом, серой или иминогруппой; и в которой R⁵ обозначает водород или метил; и n представляет собой целое число от 1 до 3.

Особенно предпочтительными аминами являются симметричные N,N'-алкилэтилендиамины, предпочтительно N, N'-диизопропилэтилендиамин, N,N'-диэтилэтилендиамин, N, N'-дибензилэтилендиамин, N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин. Особенно предпочтительным является N,N'-диизопропилэтилендиамин.

Для получения аммониевой соли клавулановой кислоты следует использовать по меньшей мере один эквивалент выбранного щелочного диамина, предпочтительно 10%-ный избыток вплоть до 2 моль- эквивалентов.

В наиболее предпочтительном воплощении данного изобретения взаимодействие клавулановой кислоты с N,N-монозамещенными симметричными диаминами проводят в смеси этилацетата и метанола, содержащей, например, от 0 до 80% метанола, предпочтительно в соотношении от 4:1 до 2:1, а наиболее предпочтительно 3:1.

Использование смеси этилацетата и метанола в соответствии с данным изобретении позволяет выделить соль диаммония диклавуланат, свободную от нежелательных примесей, таких как клавам-2-карбоксилат. Клавам-2-карбоновая кислота трудноотделима от клавулановой кислоты (см. D.Brown et al, JCS, Chem. Corn. 1979, 282). В соответствии с Фармакопеей США US P23, стр. 385, 1995 допустимое содержание клавам-2-карбоксилата калия составляет не более 0,01%.

К удивлению, было обнаружено, что выход промежуточных солей с N,N'-монозамещенными симметричными диаминами значительно выше и является почти количественным при проведении трансформации в смеси растворителей, предпочтительно этилацетата и метанола, по сравнению с проведением трансформации в одном растворителе, например, как описано в US 5310898.

Диклавуланаты аммония, полученные согласно настоящему изобретению, могут быть использованы в качестве промежуточных соединений при получении полностью очищенной клавулановой кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей, таких как клавуланат калия. Клавуланаты щелочных металлов могут быть получены с использованием приемлемого источника щелочного металла, например 2-этилгексаноата калия в изопропаноле (растворителе, содержащем от 0 до 4% воды). Альтернативные соли щелочных металлов включают в себя карбонаты, бикарбонаты или гидроксиды, соли органических карбоновых кислот, соли алкановых кислот, такие как ацетаты, пропионаты и гексаноаты, из которых особенно предпочтительным является 2-этилгексаноат калия. Приемлемыми согласно настоящему изобретению солями являются фармацевтически приемлемые соли щелочных металлов, такие как соли натрия, калия, кальция и магния, из которых особенно предпочтительными являются соли натрия и калия, в особенности калия. Изобретение далее описано с помощью примера, не имеющего, однако, никакого ограничивающего значения.

Пример по прототипу N,N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланат
Высушенный концентрированный экстракт неочищенной клавулановой кислоты в этилацетате получают в соответствии с известными способами, например, как описано в WO 95/23870. Содержание клавулановой кислоты составляет при этом 32 г/л, а содержание воды не превышает 2 г/л. Этилацетатный экстракт (500 см³) осветляют путем обработки активированным углем, взятым в количестве 5 г/л. N, N'-диизопропилэтилендиамин (10 см³) добавляют в течение 10 мин при интенсивном перемешивании. Раствор перемешивают в течение последующих 15 мин, после чего отделяют осадок. Осадок промывают двумя порциями ацетона по 50 см³, а затем высушивают в вакууме (1 ч, 100 мбар, 40^oC). Получают N,N'- диизопропилэтилендиаммония диклавуланат (24 г, выход - 80%).

Анализ:
Содержание клавулановой кислоты - 53,0%
Прозрачность 2%-ного водного раствора N,N'- диизопропилэтилендиаммония диклавуланата - 4,4%
Содержание примесей - 4,0 % (по площади)
Пример 1
N,N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланат
Высушенный концентрированный экстракт неочищенной клавулановой кислоты в этилацетате получают в соответствии с известными способами, например, как описано в WO 95/23870. Содержание клавулановой кислоты составляет при этом 32 г/л, а содержание воды не превышает 2 г/л.

Этилацетатный экстракт (500 см³) осветляют путем обработки активированным углем, взятым в количестве 5 г/л. В течение 10 мин при интенсивном перемешивании добавляют метанол (165 см³), а затем - N,N'-диизопропилэтилендиамин (10 см³). Раствор перемешивают в течение последующих 15 мин, после чего отделяют осадок. Осадок промывают двумя порциями ацетона по 50 см³, а затем высушивают в вакууме (1 ч, 10 кПа (100 мбар), 40^oC), и получают N, N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланат (25 г, выход - 96%).

Анализ:
Содержание клавулановой кислоты - 61,1%
Прозрачность 2%-ного водного раствора N,N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланата - 81,7%
Содержание примесей - 0,3 % (по площади)
Пример 2
Приготовление чистого клавуланата калия
2(а)
N, N'- диизопропилендиаммония диклавуланат (19,4 г, 0,028 моль), полученный как в Примере 1, растворяют в изопропаноле (165 см³) и воде (7 см³). Раствор далее разбавляют изопропанолом (320 см³) и осветляют активированным углем (2,5 г). Раствор фильтруют и затем при комнатной температуре в течение 15 мин добавляют 2-этилгексаноат калия (2M раствор, 25 см³). Раствор перемешивают в течение дополнительных 5 мин и охлаждают до 10^oC. Продукт фильтруют, промывают двумя порциями ацетона по 5 см³ и высушивают в вакууме при 40^oC. Получают чистый клавуланат калия (10 г, выход 70%) в виде игольчатых кристаллов.

Анализ:
Содержание клавулановой кислоты - 83,3%
Прозрачность 2%-ного водного раствора N,N'- диизопропилэтилендиаммония диклавуланата - 91,6%
Содержание примесей - 0,0% (по площади)
2(б)
N, N'-диизопропилэтилендиаммония диклавуланат (10,0 г, содержание 62%) добавляют к смеси изопропанола (85 см³) и воды (3,5 см³). Суспензию подогревают до 27^oC, чтобы получить гомогенный раствор. Добавляют активированный уголь (3,85 г). Раствор перемешивают в течение 20 мин, затем активированный уголь удаляют путем фильтрации и промывают изопропанолом (45 см³). Фильтрат и смывы изопропанола соединяют, а затем по каплям в течение 15 мин добавляют 2-этилгексаноат калия (2- молярный раствор в изопропаноле). Смесь охлаждают до температуры от 0 до 10^oC и перемешивают в течение 1 ч. Получившиеся кристаллы фильтруют, однократно промывают изопропанолом (20 см³) и дважды ацетоном (20 см³). Продукт высушивают в вакууме при температуре от 30 до 40^oC с получением клавуланата калия (5,8 г, выход 76%, содержание клавулановой кислоты - 81,6%).

2(в)
N,N,N',N'-тетраметилэтилендиаммония диклавуланат (8,0 г, содержание 71%) растворяют в воде (8 см³) и разбавляют изопропанолом (100 см³). Полученную смесь обрабатывают активированным углем (1,2 г), фильтруют и небольшими порциями добавляют к ней раствор 2-этилгексаноата калия (2M в изопропаноле, 19 см³). Смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, затем осадок фильтруют и высушивают в вакууме на силикагеле при комнатной температуре с получением бледно-желтых кристаллов клавуланата калия (5,26 г, выход 75%, содержание 80,9%).

Пример 3
Высушенный концентрированный экстракт клавулановой кислоты (20,0 г/л) в этилацетате разбавляют метанолом (330 см³). В течение 10 мин по каплям при перемешивании добавляют N, N'-диизопропилэтилендиамин (DIPEDA) (10,1 см³, 10%-ный избыток). Смесь охлаждают до - 10^oC, затем перемешивают в течение 30 мин, после чего осадок фильтруют, промывают двумя порциями ацетона по 50 см³ и высушивают при пониженном давлении при температуре от 30 до 40^oC. Получают соль DIPEDA с клавулановой кислотой (24,8 г, выход 80%, содержание 64,3%).

Пример 4
Способ, описанный в примере 3, повторяют с таким же количеством других спиртов. Результаты приведены в табл. 1.

Пример 5
Высушенный концентрированный раствор клавулановой кислоты в этилацетате (300 см³, 25,2 г/л) разбавляют метанолом (50 см³) и ацетоном (50 см³). В течение 5 мин маленькими порциями добавляют N,N'-диизопропилэтилендиамин (4,1 см³, 20%-ный избыток). Полученную гетерогенную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0^oC, после чего осажденный продукт фильтруют и обрабатывают, как описано в примере 3, с получением соли DIPEDA с клавулановой кислотой (9,61 г, выход 74%, содержание 58%).

Результаты, полученные при применении аналогичных способов при разбавлении этилацетатного экстракта смесью различных смешиваемых с водой растворителей, приведены в табл. 2.

Пример 6
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 29,8 г/л) разбавляют ацетонитрилом (330 см³), после чего процедуру продолжают, как описано в примере 3, с получением кристаллов соли DIPEDA с клавулановой кислотой (38,9 г, выход 77%, содержание 59%).

Пример 7
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 22,1 г/л) разбавляют различными количествами метанола, обрабатывают N,N'- диизопропилэтилендиамином, взятым с 10%-ным избытком, а затем следуют способу примера 3. Результаты приведены в табл. 3.

Пример 8
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 25,2 г/л) разбавляют этанолом (33 см³). В течение 15 мин по каплям при перемешивании добавляют N, N'-диэтилэтилендиамин (100 см³ 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение дальнейших 30 мин. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют, получая осажденный продукт, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC с получением 27,1 г (выход 61%, содержание 71%).

Результаты экспериментов, в которых этанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл. 4.

Пример 9
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 24,0 г/л) разбавляют изопропанолом (330 см³). В течение 15 мин по каплям добавляют N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин (11,0 см³ 10%-ный избыток), после чего раствор перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют, получая осажденный продукт, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC с получением 12,5 г (выход 37%, содержание 71%).

Результаты экспериментов, в которых изопропанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл. 5.

Пример 10
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 24,0 г/л) разбавляют этанолом (330 см³). В течение 15 мин по каплям добавляют N,N'-дибензилэтилендиамин (15,7 см³ 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют с получением осадка, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC с получением 22,5 г (выход 54%, содержание 57,3%).

Результаты экспериментов, в которых этанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл.6.

Пример 11
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 17,5 г/л) разбавляют изопропанолом (330 см³). В течение 15 мин по каплям добавляют трет-бутиламин (10,1 см³ 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC, смесь фильтруют, получая осажденный продукт, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC, получая 21,1 г (выход 77%, содержание 63,8%).

Результаты экспериментов, в которых изопропанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл.7.

Пример 12
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 20,9 г/л) разбавляют этанолом (330 см³). В течение 15 мин по каплям добавляют бензил-трет-бутиламин (21,9 см³, 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют, получая осажденный продукт, который промывают ацетоном и высушивают в вакууме при 25^oC, получая 27,1 г (выход 68%, содержание 52,5%).

Результаты экспериментов, в которых этанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл. 8.

Пример 13
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 18,4 г/л) разбавляют изопропанолом (330 см³). В течение 15 мин по каплям добавляют трет-октиламин (16,4 см³ 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют, получая осажденный продукт, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC, получая 21,6 г (выход 67%, содержание 57,2%).

Результаты экспериментов, в которых изопропанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл.9.

Пример 14
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 28,3 г/л) разбавляют метанолом (330 см³). В течение 15 мин маленькими порциями добавляют 1-адамантанамин (23,7 мг, 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют, получая осадок, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC, получая 39,6 г (выход 76%, содержание 54,3%).

Результаты экспериментов, в которых метанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл.10.

Пример 15
Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (1 л, 28,3 г/л) разбавляют этанолом (33 см³). В течение 15 мин по каплям добавляют втор-бутиламин(15,8 см³, 10%-ный избыток), после чего смесь перемешивают в течение 1 ч. После охлаждения до температуры ниже 0^oC смесь фильтруют, получая осадок, который промывают ацетоном и высушивают при пониженном давлении при 25^oC, получая 21,0 r (выход 52,6%, содержание 70,8%).

Результаты экспериментов, в которых этанол опущен или заменен на другой спирт, приведены в табл.11.

Формула изобретения

1. Способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или эфира, включающий в себя последовательные стадии, на которых (а) добавляют дополнительный растворитель, выбранный из спиртов C₁ - C₆ и их смесей, к раствору клавулановой кислоты в несмешиваемом с водой растворителе, (б) осуществляют контактирование раствора с амином, (в) выделяют образовавшуюся аминную соль клавулановой кислоты, и (г) превращают аминную соль в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль или эфир, где амин представляет собой диамин формулы I

в которой заместители R₁, R₂, R₃ и R₄ независимо представляют собой водород; прямой или разветвленный алкил C₁ - C₈; гидроксиалкил C₂ - C₄, или группы NR₁R₂ и NR₃R₄ совместно обозначают гетероциклическую группу, содержащую от 3 до 6 метиленовых групп, возможно замененных кислородом, серой или иминогруппой; R₅ обозначает водород или метил; а n представляет собой целое число от 1 до 3.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительный растворитель выбран из метанола, этанола, изопропанола, н-бутанола, изобутанола.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что дополнительный растворитель представляет собой метанол.

4. Способ по любому из п.1 или 2, отличающийся тем, что амин представляет собой симметричный N,N'-алкилэтилендиамин.

5. Способ по п.3, отличающийся тем, что диамин выбран из N,N'-диизопропилэтилендиамина и N,N'-диэтилэтилендиамина.

6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что диамин представляет собой N, N'-диизопропилэтилендиамин.

7. Способ по любому из п.1 или 2, отличающийся тем, что амин представляет собой N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин или N,N'-дибензилэтилендиамин.

8. Способ по п. 5 или 6, отличающийся тем, что несмешиваемый с водой растворитель представляет собой этилацетат, а дополнительный растворитель представляет собой метанол, причем соотношение этилацетата и метанола составляет от 4 : 1 до 2 : 1.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что соотношение составляет 3 : 1.

10. Способ отделения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или эфира от содержащейся в отфильтрованном ферментационном бульоне примеси клавам-2-карбоновой кислоты, включающий в себя последовательные стадии, на которых (а) добавляют дополнительный растворитель, выбранный из спиртов C₁ - C₆ и их смесей, к раствору клавулановой кислоты в несмешиваемом с водой растворителе, (б) осуществляют контактирование раствора с амином, (в) выделяют образовавшуюся аминную соль клавулановой кислоты, и (г) превращают аминную соль в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль или эфир, где амин представляет собой диамин формулы I

в которой заместители R₁, R₂, R₃ и R₄ независимо представляют собой водород; прямой или разветвленный алкил C₁ - C₈; гидроксиалкил C₂ - C₄, или группы NR₁R₂ и NR₃R₄ совместно обозначают гетероциклическую группу, содержащую от 3 до 6 метиленовых групп, возможно замененных кислородом, серой или иминогруппой; R₅ обозначает водород или метил; а n представляет собой целое число от 1 до 3.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7