Способ консервации эритроцитарных диагностикумов

 

Изобретение относится к ветеринарно-медицинской службе. Способ включает соединение сенсибилизированных эритроцитов с консервантом, содержащим водно-солевой раствор хлорида натрия, формалин и глицерин. Способ позволяет сконцентрировать в 12-30 раз взвесь эритроцитов. Применение нового консерванта обеспечивает длительное, от 3 до 8 лет, сохранение специфической активности диагностикумов.

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, в частности к способам сохранения эритроцитарных диагностикумов.

Известен способ сохранения эритроцитарных диагностикумов разной специфичности (жидких) в 0,85%-ном водно-солевом растворе хлорида натрия с формальдегидом. Жидкие эритроцитарные диагностикумы -сальмонеллезные, шигеллезные, дифтерийный, столбнячный, чумной и др., выпускаемые предприятиями медико-биологической промышленности, представляют собой 1-2,5%-ную взвесь формалинизированных, сенсибилизированных эритроцитов в 0,85%-ном водно-солевом растворе хлорида натрия с 0,5-1% формалина. Хранят эритроцитарные диагностикумы в стеклянной емкости под резиновыми пробками при 4±2^oC (1, 2, 3, 4).

Нашей задачей было увеличение сроков сохранения физических свойств и специфической активности жидкой формы эритроцитарных диагностикумов разной специфичности и выпуска их в концентрированной форме.

Предложенный способ консервации эритроцитарных диагностикумов на завершающем этапе их производства заключается в замене 0,85%-ного водно-солевого раствора хлорида натрия с формальдегидом консервантом, содержащим цельный х. ч. глицерин, водно-солевой раствор хлорида натрия, формалин.

Предложенный способ консервации состоит в следующем.

Берут 50-60% х. ч. цельного глицерина, добавляют водно-солевой раствор хлорида натрия, доведя его до 0,85-0,9% концентрации и соединяют с 0,5-1% формалина. Хранят в стеклянной посуде под резиновыми пробками. Осадок отмытых эритроцитов готового отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 25-30%-ной концентрации, гомогенизируют. Полученную 25-30% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Допустимые колебания при хранении или транспортировке составляют от 30^oС до -18^oС.

Способ консервации эритроцитарных диагностикумов испытан на следующих препаратах ветеринарно-медицинского назначения: антигенные - дифтерийный, столбнячный (анатоксинные), трепанемные, чумные, пастереллезные, эшерихиозные, а также иммуноглобулиновые тех же специфичностей.

Сроки хранения в консерванте варьировали в пределах 3-8 лет в зависимости от свойств сенситина.

Использование предложенного консерванта отражено в конкретных примерах.

Пример 1. Дифтерийный антигенный эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов барана. Сенситином служат серии коммерческих анатоксинов-полуфабрикатов вакцин. Очищенные концентрированные анатоксины применяют в эффективной дозе, установленной опытным путем.

Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствия заданной специфической активности.

Осадки отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 30% концентрации, гомогенизируют. Полученную 30% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС. Готовые препараты испытывали в РПГА со стандартной дифтерийной сывороткой ГИСК им. Тарасевича для определения специфической активности. Она соответствовала активности разведениям 1:3200-1:12800. Испытаны сотни производственных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 30% взвеси препарата обеспечивает срок годности в пределах от 5 до 8 лет.

Пример 2. Столбнячный антигенный эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов барана. Сенситином служат серии коммерческих анатоксинов-полуфабрикатов вакцин. Очищенные концентрированные анатоксины применяют в эффективной дозе, установленной опытным путем. Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствие заданной специфической активности.

Осадки отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 30% концентрации, гомогенизируют. Полученную 30% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС. Готовые препараты испытывали в РПГА со стандартной анатоксической столбнячной сывороткой ГИСК им. Тарасевича для определения специфической активности. Она соответствовала активности разведениям 1: 2560-1:10240. Испытаны сотни производственных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 30% препарата обеспечивает срок годности в пределах 5-8 лет.

Пример 3. Чумной антигенный (FI) эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов барана. Сенситином служат FI - капсульная субстанция чумного микроба. P. pestis, эффективная сенсибилизирующая доза которого определяется опытным путем. Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствие заданной специфической активности.

Осадки отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 30% концентрации, гомогенизируют. Полученную 30% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС.

Готовые препараты испытывали в РПГА с чумной сывороткой для определения специфической активности. Она соответствовала активности разведениям до 1: 1280000.

Испытаны сотни производственных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 30% препарата обеспечивает срок годности в пределах 5-8 лет.

Пример 4. Пастереллезный антигенный эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов лошади. Сенситином служат растворимые капсульные антигены P. multocida серовариантов А,В,Д, эффективная сенсибилизирующая доза которого определяется опытным путем. Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствие заданной специфической активности.

Осадки отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 25% концентрации, гомогенизируют. Полученную 25% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС, Готовые препараты испытывали в РПГА с антикапсульной пастереллезной сывороткой для определения специфической активности. Она соответствовала активности разведениям от 1:200 до 1:1600 в зависимости от сероварианта P. multocida.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 25% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 5. Способ консервации пастереллезного антигенного эритроцитарного диагностикума аналогичен примеру 4, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 30% концентрации. Полученные пастереллезные антигенные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:200 до 1:1600 в зависимости от сероварианта P. multocida.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 30% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 6. Способ консервации пастереллезного антигенного эритроцитарного диагностикума аналогичен примеру 4, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 28% взвеси концентрации.

Полученные пастереллезные антигенные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:200 до 1:1600 в зависимости от сероварианта P. multocida.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 28% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 7. Пастереллезный антительный эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов лошади. Сенситином служат адсорбированные моновалентные противопастереллезные бараньи антикапсульные сыворотки, эффективная доза которого определяется опытным путем.

Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствие заданной специфической активности.

Осадки отмытых эритроцитов готового отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 25% концентрации, гомогенизируют. Полученную 25% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС. Готовые препараты испытывали в РПГА с гомологичными антикапсульными антигенами P. multocida для определения их специфической активности. Она соответствовала активности разведениям от 1:4 до 1:512 в зависимости от сероварианта.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 25% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 8. Способ консервации пастереллезного эритроцитарного антительного диагностикума аналогичен примеру 7, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 30%.

Полученные пастереллезные антительные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:4 до 1:512 в зависимости от сероварианта P. multocida.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата. Консервированная форма концентрированного до 30% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 9. Способ консервации пастереллезного эритроцитарного антительного диагностикума аналогичен примеру 7, но при доведении осадка эритроцитов готового диагностикума до 28%.

Консервированная форма концентрированного до 28% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Физические свойства (гомогенность взвеси) и специфическая актиность пастереллезных антигенных и антительных эритроцитарных диагностикумов, стандартизированных до 25-30%-ной концентрации, сохраняются при -18^oС в течение года и при 30^oС - не менее месяца.

Максимальная чувствительность с пастереллезными антигенными и антительными диагностикумами выявлена при сохранении их в консерванте в концентрациях 25-30%. Использование консерванта в концентрации ниже 25% или выше 30% не позволило получать выраженную картину гемагглютинации.

Пример 10. Эшерихиозный антигенный эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов лошади. Сенситином служат адгезивные антигены Е. coli: К 99, К 88 (ав, ас, аd), F 41, Аtt 25, 987Р, эффективная сенсибилизирующая доза которого определяется опытным путем. Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствие заданной специфической активности. Осадки отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 25% концентрации, гомогенизируют. Полученную 25% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС. Готовые препараты испытывали в РПГА с гомологичной адсорбированной моноспецифической антиадгезивной кроличьей колисывороткой для определения их специфической активности. Она соответствовала активности разведениям от 1:400 до 1:800 в зависимости от типа адгезивного антигена.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 25% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 11. Способ консервации эшерихиозного антигенного эритроцитарного диагностикума аналогичен примеру 10, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 30% концентрации. Полученные эшерихиозные антигенные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:400 до 1:800 в зависимости от типа адгезивного антигена.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 30% препарата обеспечивает срок годности в течение 3 лет.

Пример 12. Способ консервации эшерихиозного антигенного эритроцитарного диагностикума аналогичен примеру 10, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 28% концентрации. Полученные эшерихиозные антигенные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:400 до 1:800 в зависимости от типа адгезивного антигена.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 28% препарата обеспечивает срок годности в течение 5 лет.

Пример 13. Эритроцитарный антительный эритроцитарный диагностикум в консерванте получают на основе формалинизированных, танинизированных эритроцитов лошади. Сенситином служат адсорбированные моноспецифические антиадгезивные кроличьи колисыворотки к адгезивным антигенам Е.coli: К 99, К 88 (ав, ас, аd) F 41, Аtt 25, 987Р, эффективная доза которого определяется опытным путем.

Готовые диагностикумы контролируют на отсутствие спонтанной агглютинации и соответствие заданной специфической активности.

Осадки отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума соединяют с консервантом до 25% концентрации, гомогенизируют. Полученную 25% взвесь разливают во флаконы, укупоривают резиновой пробкой и обвальцовывают металлическим колпачком.

Хранят консервированные, концентрированные эритроцитарные диагностикумы при температуре 4±2^oС. Готовые препараты испытывали в РПГА с гомологичными адгезивными антигенами для определения специфической активности. Она соответствовала активности разведениям от 1:28 до 1:4096 в зависимости от типа адгезивного антигена.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 25% препарата обеспечивает срок годности в течение 3 лет.

Пример 14. Способ консервации эшерихиозного антительного эритроцитарного диагностикума аналогичен примеру 15, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 30% концентрации.

Полученные эшерихиозные антительные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:28 до 1:4096 в зависимости от типа адгезивного антигена.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 30% препарата обеспечивает срок годности в течение 3 лет.

Пример 15. Способ консервации эшерихиозного антительного эритроцитарного диагностикума аналогичен примеру 14, но при доведении осадка отмытых эритроцитов готового, отконтролированного диагностикума до 28% концентрации. Полученные эшерихиозные антительные диагностикумы имели специфическую активность в РПГА от 1:28 до 1:4096 в зависимости от типа адгезивного антигена.

Испытаны десятки лабораторных серий данного препарата.

Консервированная форма концентрированного до 28% препарата обеспечивает срок годности в течение 3 лет.

Предложенный способ консервации эритроцитарных диагностикумов антигенных, антительных разных специфичностей обеспечивает: - сохранение их физических свойств (гомогенность взвесей); - соответствие показателей специфической активности регламентированным требованиям к каждому препарату; - возможность промышленного изготовления препаратов, длительного их хранения и транспортировки при варьировании температур; - уменьшение объема готовой продукции (в 12-30 раз) за счет концентрированной его формы.

Способ консервации эритроцитарных диагностикумов разных наименований универсален и предназначен для промышленного производства эритроцитарных диагностикумов и их практического использования в ветеринарно-медицинской практике.

Источники информации 1. Инструкция по применению диагностикумов эритроцитарных шигеллезных; дизентерии 1,2; флекснера 1-5; флекснера 6 и зонне антигенных жидких и сухих. Утвержденная Министерством здравоохранения РСФСР от 24 февраля 1987 г., стр. 1-4.

2. Б.В. Каральник. Эритроцитарные диагностикумы. М.: Медицина, 1976, с. 88;105.

3. Леви М. И., Кравцов Ф.Е., Басова Н.Н. МРТУ-42 13-67 по изготовлению дифтерийного эритроцитарного антигенного диагностикума. Утв. КВС МЗ СССР 05.03.1967.

4. Леви М. И., Фоменко Г.А., Басова Н.Н. МРТУ-42 12-67 по изготовлению столбнячного эритроцитарного антигенного диагностикума 15-67. Утв. КВС МЗ СССР 05.03.1967.

Формула изобретения

Способ консервации эритроцитарных диагностикумов, включающий соединение формалинизированных сенсибилизированных эритроцитов с консервантом и доведение взвеси до необходимой концентрации, отличающийся тем, что формалинизированные, сенсибилизированные эритроциты соединяют с консервантом, полученным в результате соединения 50% х. ч. глицерина с водно-солевым раствором хлорида натрия, доведя его до 0,85-0,9% концентрации и добавления 0,5-1% формалина и доводят им до 25-30%-ной концентрации взвеси эритроцитов, гомогенизируют, герметизируют.

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 17.08.2008

Извещение опубликовано: 20.07.2010        БИ: 20/2010

---