Средство для определения неспецифической реактивности овец

 

Использование: экспериментальная и ветеринарная иммунология. Сущность определение неспецифической реактивности овец с помощью гемолизина, который используют в разведении 1:8-1:16. Гемолизин смешивают с периферической кровью исследуемого животного, инкубируют 18ч при 20-24°С в капиллярах и учитывают результаты реакции по скорости оседания эритроцитов и степени гемолиза в опытной и контрольной пробах. По результатам реакции определяют индекс неспецифической реактивности животных. 3 табл.

CO)03 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4920201/13 (22) 19.03.91 (46) 07.11.92. Бюл. N. 41 (71) Ставропольский сельскохозяйственный институт и Целиноградский сельскохозяйственный институт (72) А.Ф.Дмитриев, Т.У.Сыздыков, М.А.Никишова, А.К.Булашев и В.П.Мингилев (56) 1. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций. M.: Медицина, 1985, с.

81 — 82. (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ

ОВЕЦ

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения физиологического состояния организма.

Гемолизин — инактивированная сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана, известен в качестве средства, которое широко используется в лабораторной практике как диагностикум.

Специфическая гемолитическая сыворотка, лизирующая эритроциты барана в высоком титре, применяется в реакции связывания комплемента (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. /Под ред. М.О.Биргера.— M.:

Медицина. 1982, с. 464).

Известно также применение гемолизина при титровании комплемента. Его активность определяют в той же гемолитической системе, которую используют для реакции связывания комплемента (стандартные эритроциты барана и антисыворотка). Об ак„„«Ы„„1773409А1 (ы)з А 61 К 39/00, G 01 N 33/555 (57) Использование: экспериментальная и ветеринарная иммунология. Сущность! определение неспецифической реактивности овец с помощью гемолизина, который используют в разведении 1:8 — 1:16. Гемолизин смешивают с периферической кровью исследуемого животного, инкубируют 18 ч при

20 — 24 С в капиллярах и учитывают результаты реакции по скорости оседания эритроцитов и степени гемолиза в опытной и контрольной пробах. По результатам реакции определяют индекс неспецифической реактивности животных. 3 табл, тивности комплемента судят по наименьшему количеству исследуемой сыворотки, которое способствует полному или 507; гемолизу сенсибилизированных эритооцитов (1) .

Известен способ определения иммунологической реактивности особей, включающий инкубирование проб крови с тестирующей биологической жидкостью, причем в качестве тестирующей биологической жидкости используют видоспецифическую антисыворотку, которую в соотношении 1:2 смешивают с периферической кровью исследуемого, инкубируют 18 ч при 20-24 С в капиллярах, а результаты реакции учитывают по скорости оседания эритроцитов и степени цитолиза в опытной и контрольной пробах.

Недостатком этого способа является то, что для его осуществления в условиях лаборатории необходимо приготовление видоспецифической сыворотки, что сопряжено с 1773409

10 большими трудностями (наличием лабораторных животных, затратой средств и времени). Кроме того, сыворотки, полученные в условиях раэличн ых лабораторий и в разное время, не отличаются стабильностью. Качество полученных антисывороток зависит от многих факторов, связанных с технологией их получения, в том числе: от степени очистки антигена, уровня иммунного ответа лабораторных животных и других.

Целью изобретения является расширение арсенала средств для определения неспецифической реактивности организма и повышение возможности их практического применения.

Эта цель достигается применением гемолизина в качестве средства для определения неспецифической реактивности у овец. Определение реактивности поголовья овец осуществляется in vitro путем смешивания гемолитической сыворотки с периферической кровью исследуемого животного, инкубирования смеси в капиллярах с последующим учетом результатов реакции через

18 ч по степени цитолиза в опытной и контрольной пробах.

Существо технического решения заключается в следующем.

Гемолитическую сыворотку в соотношении 1:2 смешивают с периферической кровью исследуемого животного, инкубируют 18 ч при 20 — 24 С в капиллярах, а результаты реакции учитывают по скорости оседания эритроцитов и степени гемолиза в опытной и контрольной пробах.

Бидоспецифические антитела гемолитической сыворотки под влиянием комплемента исследуемого животного вступают в реакцию с эритроцитарными антигенами, что приводит к их агглютинации и гемолизу.

Цитотоксические действие гемолизина зависит ат содержания комплемента в крови исследуемого животного, а также от функциональной активности клеток крови и генотипических особенностей организма, Предлагаемое средство испытано на овцематках, новорожденных ягнятах и поясняется примерами.

Пример 1. Готовили различные разведения гемолизина на физиологическом растворе и ставили реакцию капельной гемагглютинации с кровью исследуемого животного, Гемолитическую сыворотку для реакции связывания комплемента использовали в разведении 1/8, 1/ 16, 1/32, 1/64, 1/128.

Одну каплю крови исследуемого животного наносили на предметное стекло, затем добавляли одну каплю гемолизина, быстро перемешивали стеклянной палоч15

55 кой и через 3 — 5 мин учитывали результаты реакции в крестах, Как видно из приведенных данных s табл, 1, наибольшее разведение гемолизина, с которым набл одается агглютинация эритроцитов исследуемых проб крови, составило 1/128, Однако у некоторых >кивотных (K 35; 9586; 4570 и др.) реакция была отрицательной. Наиболее выраженная реакция, интенсивностью не менее двух крестов, отмечалась в разведении гемолитической сыворотки, равном 1/16. Б связи с этим для определения иммунологической реактивности животных была взята гемолитическая сыворотка 1:16.

Пример 2. В капиллярную пипетку аппарата Панченкова 1/2 обьема 50 мм набирали гемолизина и выливали в лунку предметного стекла. Затем этой же пипеткой набирали кровь (1,00 мм) и тоже выливали в лунку. Кровь исследуемого животного тщательно перемешивали с антисывороткой и полученную смесь набирали в пипетку и ставили в штатив. В связи с тем, что гемолизин смешивался с кровью исследуемого животного в разведении 1:2 его рабочее разведение было 1;8.

Ставили также контрольную пробу для каждого животного отдельно, В ко)<трол ь ном капилляре вместо гемолитической сыворотки использовали физиологический раствор.

Учет реакции (контроль и опыт) проводили через 18 ч по скорости оседания зритроцитов (высота столба осевших эритроцитов), а также степени цитолиэа.

Индекс неспецифической реактивности определяли по формуле

ИНР = (А — Б) . А+ (С вЂ” D): С, где ИНР— индекс неспецифической реакТИВНОСТИ;

А —. высота столба осевших эритроцитов в опытном капилляре;

 — BblcoTB столба осевших зритроцитов в контрольном капилляре;

С вЂ” степень гемолиза в крестах в опытном капилляре;

D — степень гемолиза в крестах в контрольном капилляре.

Результаты учета реакции по отдельным животным представлены в табл. 2.

KGK видно из приведенных данных п табл. 2, высота столба осевших эритроцитов в опытном и контрольном капиллярах у животных была различной. Наиболее существенная разница отмечена у животного N.

4027 (7 мм в контроле и 67 мм в опыте), что соответствовало самому высокому индексу реактивности. У животного N. 10С4 разница была менее существенной т.е, 1 мм, а ии1773409 декс неспецифической реактивности составил 0,07.

Пример 3. По изложенной методике была проведена оценка неспецифической реактивности 92 овцематок и ро.кденных 5 ими 97 ягнятах. В результате исследований (табл. 3) установлено, что средние значения индекса неспецифической реактивности у . овцематок были значительно выше, чем у 10 я гнят.

Как видно, различия между группами животных не олько по средним величинам, 15 но и характеру распределения величин статистически достоверны. Дисперсия показателя реактивности у ягнят была более выраженной, чем у маток. Коэффициент vaриации индекса неспецифической реактив- 20 ности у ягнят составил 98,6;ь, а у маток

65 10/

При сопоставлении результатов реакции у овцематок и рожденных от них ягнят усгановлено, что у ягнят случаев гемолиза 25 эритроцитов при добавлении гемолитиче ской сыворотки не наблюдалось, У овцематок наоборот такие случаи регистрировались Goner чаще. Видимо это следует объяснить отсутствием комплемен- 30 та в крови у новоро>кденных ягнят.

Поскольку система комплемента играет важную роль в поддержании гомеостаза поТаблица 1

Инвентарныи номер животного

Номер

2

4

6

8

11

12

13

14

16

17

18

19

09661

Б/35

1294

04033

9586

2177

07941

02966

2464

2257

07276

4593

1644

0706

1971

9981 казатели этой реакции отражают особенности реактивности организма, Таким образом, предлагаемое средство при использовании его с целью определения неспецифической реактивности позволяет значительно расширить возможности практического применения, особенно при массовом обследовании поголовья.

Использование известного диагностикума в качестве средства для определения неспецифической реактивности имеет преимущества, так как он выпускается биологической промышленностью, стандартизирован и имеется в любой районной лаборатории.

Поскольку гемолитическая сыворотка проявляет своедействие в присутствии комплемента, стало быть от реактивности комплемента, содержащегося в крови исследуемого животного, зависит проявление агглютинации и гемолиза, обусловленного действием антител, С другой стороны результаты реакции зависят также от специфики антигенов, адсорбированных на поверхности эритроцитов.

Формула изобретения

Применение гемолизина в качестве средства для определения неспецифической реактивности овец.

1773409

Таблица 2

Таблица 3

Составитель А. Дмитриев

Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор Л. Ливринц

Редактор Л. Волкова

Заказ 3882 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Критерий различий

Достоверность

td = 6,70

Р < 0,001

Х 1:54

Р < 005