Способ получения гетерологичного секреторного белка

 

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ секреторного продуцирования чужеродного белка, в частности трансглутаминазы, при помощи коринеформной бактерии. Гетерологичный секреторный белок, в частности трансглутаминазу, продуцируют способом, включающим использование конструкции для экспрессии гена, в которой последовательность гена целевого чужеродного белка, содержащего проструктурную часть, а именно последовательность гена протрансглутаминазы, лигирована ниже последовательности, кодирующей область сигнального пептида из коринеформной бактерии, введение указанной конструкции для экспрессии гена в коринеформную бактерию, культивирование трансформированной таким образом коринеформной бактерии и обработку секретированного из клетки белка протеазой или подобным ферментом для расщепления и удаления прочасти. Предлагаемое изобретение позволяет получить гетерологичный секреторный белок, в частности трансглутаминазу, используемую в пищевой промышленности, при изготовлении фармацевтических препаратов и в других областях. 23 з.п.ф-лы, 6 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н

Формула изобретения

1. Способ продуцирования гетерологичного секреторного белка, который включает культивирование коринеформной бактерии, содержащей генную экспрессирующую конструкцию, в которой нуклеотидная последовательность, кодирующая домен сигнального пептида, выделенный из коринеформной бактерии, присоединена ниже последовательности промотора, функционирующей в коринеформной бактерии, и нуклеотидная последовательность, кодирующая гетерологичный секреторный белок, содержащий проструктурную часть, присоединена ниже нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный домен сигнального пептида, благодаря чему данная коринеформная бактерия продуцирует и секретирует указанный гетерологичный секреторный белок, а также последующее расщепление и удаление проструктурной части из указанного гетерологичного секреторного белка.

2. Способ по п.1, в котором гетерологичный секреторный белок является трансглутаминазой.

3. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из коринеформной бактерии.

4. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из Corynebacterium glutamicum.

5. Способ по п.4, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:29.

6. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из Corynebacterium ammoniagenes.

7. Способ по п.6, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:2.

8. Способ по любому из пп.1-7, в котором проструктурная часть соответствует проструктурной части трансглутаминазы из актиномицета.

9. Способ по п.8, в котором проструктурная часть имеет последовательность, соответствующую SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4.

10. Способ по п.8, в котором проструктурная часть включает замену, делецию, вставку или добавление, по крайней мере, одной аминокислоты или их комбинацию в аминокислотной последовательности, соответствующей SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4.

11. Способ по п.10, в котором аминокислотная последовательность проструктурной части является одной из аминокислотных последовательностей, соответствующих SEQ ID NO:30-SEQ ID NO:38.

12. Способ по п.1 или 2, в котором расщепление и удаление проструктурной части выполняют при помощи протеазы.

13. Способ по п.12, в котором коринеформная бактерия, продуцирующая и секретирующая гетерологичный секреторный белок, также продуцирует протеазу.

14. Способ по п.13, в котором расщепление и удаление проструктурной части выполняют при помощи протеазы и пептидазы.

15. Способ по п.14, в котором коринеформная бактерия, продуцирующая и секретирующая гетерологичный секреторный белок, также продуцирует протеазу и пептидазу.

16. Способ по п.12 или 14, в котором протеаза происходит из актиномицета.

17. Способ по п.12 или 14, в котором протеаза происходит из Strepromyces albogriseolus.

18. Способ по п.14, в котором пептидаза происходит из актиномицета.

19. Способ по п.14, в котором пептидаза происходит из Streptoverticillium mobaraense.

20. Способ по любому из пп.2-11, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой актиномицета.

21. Способ по п.20, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой Streptoverticillium mobaraense.

22. Способ по п.21, в котором трансглутаминаза имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:5.

23. Способ по п.20, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой Streptoverticillium cinnamoneum.

24. Способ по п.23, в котором трансглутаминаза имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:43.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157