Способ определения токсичности химических веществ

Авторы патента:

G01N33/68 - с использованием протеинов, пептидов или аминокислот

Владельцы патента RU 2265851:

Волгоградский государственный медицинский университет (RU)

Изобретение относится к области медицины, преимущественно к биохимии и токсикологии, а именно к способу определения токсичности лекарственных препаратов и химических веществ. Способ включает введение лабораторным животным токсического агента, забой животных, приготовление гомогената ткани печени с последующим определением активности фермента, отличающийся тем, что определяют активность фермента лецитин: холестеринацил-трансферазы и по снижению уровня активности фермента в течение 30-180 минут после введения вещества по сравнению с контролем судят о токсичности вещества. Технический результат: сокращение времени исследования токсичности химических веществ. 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, преимущественное применение найдет в биохимии и токсикологии и может быть использовано для определения токсичности лекарственных препаратов и химических веществ.

Известен способ определения токсичности биологически активных веществ путем введения испытуемых веществ группе подопытных животных и выявления среднесмертельной дозы препарата [1].

Однако известный способ не позволяет точно определить предельно допустимую концентрацию химических веществ.

Известен способ определения токсичности химических веществ путем введения лабораторным животным (мышам) одновременно гидрокортизона и токсического агента с последующим определением активности тирозинаминотрансферазы печени черта 4-8 часов после введения [2].

Недостатком известного способа является его продолжительность, т.e. не менее 8 часов эксперимента, а также сочетанное введение химических веществ.

Наиболее близким к заявляемому является способ определения токсичности химических веществ [3]. Сущность известного прототипа заключается в определении в гомогенате тканей печени лабораторных животных активности фермента ацилазы (N - ацил - DL - аминокислота - аминогидролазы К.Ф. 3.5.1.14.) через 2-4 часа после введения животным токсического вещества. О токсичности вещества судят по достоверному снижению уровня активности фермента по сравнению с контролем.

Целью изобретения является сокращение времени исследования токсичности химических веществ.

Для достижения поставленной цели проводится:

1. Введение токсического агента лабораторным животным.

2. Экспозиция, обеспечивающая развитие токсического действия (30-90 минут).

3. Забой животных, извлечение печени и приготовление гомогената ее тканей.

4. Определение активности фермента лецитин: холестерин ацилтрансферазы (ЛХАТ, К.Ф. 2.3.1.43) в тканях печени по следующей методике: через 30 минут после инкубации рабочей смеси с 0,1 мл исследуемой жидкости при 37°С из нее хлороформ - этанолом экстрагировали липиды, пробы наносили на пластинки Siluphol (Чехия) размером 8×100 мм и проводили одномерную восходящую хроматографию до фронта 80 мм. В качестве контроля использовали экстракт рабочего раствора, инкубированный в тех же условиях без добавления исследуемой жидкости. Для определения ферментативной активности пластинку разрезали пополам (0-50 мм, где остаются субстраты и 50-100 мм, куда продвигаются при хроматографировании эфиры холестерина), счищали носитель с липидами в 2 пробирки, содержащие по 5 мм 10% раствора фосфорномолибденовой кислоты, и нагревали до 80°С в водяной бане. Активность ЛХАТ рассчитывали по формуле:

где Е₀ и Е₁ - экстинции, пропорциональные содержанию липидов в начальной и конечной половинках пластинки;

5000 - пересчетный коэффициент.

Р - концентрация белка в гомогенате.

Пример 1. Группе беспородных белых мышей самцов массой 18-20 г внутрибрюшинно вводился эндотоксин (фирма "Sigma", США S.eridens) в дозе 10 мг/кг веса. Контрольной группе животных вводился физиологический раствор. Опытная группа состояла из 50 животных. Контрольная - 35. Затем животные забивались через 30, 60, 90, 120, 180 минут соответственно. У животных бралась печень, приготовлялся гомогенат тканей органа, в котором определялась активность фермента ацилазы [3] и ЛХАТ по описанной выше методике. Статистическая обработка проводилась по методам вариационной статистики с учетом коэффициента Стьюдента. Результаты эксперимента отражены в табл. №1, 2.

Пример 2. Группе беспородных белых мышей самцов массой 21-23 г внутрибрюшинно вводился тетрахлорметан (ТХМ) в растворе в дозах 1 мл/кг, 4 мл/кг веса. Контрольной группе вводился физиологический раствор. Опытная группа состояла из 50 животных на каждую дозировку вводимого вещества. Затем животные забивались, из печени их готовился тканевой гомогенат, в котором определяли активность ферментов ЛХАТ и ацилазы. Статистическая обработка проводилась аналогичным образом. Данные эксперимента приведены в таблицах №1, 2.

Сущность заключается в использовании другого информативного теста, что и позволяет сократить время исследования токсичности химических веществ, оценить опасность данного вещества на организм и определить степень влияния исследуемого агента на ткани печени и в целом на живой организм.

Данный способ может быть использован в медицине (токсикологии, фармакологии).

Литература:

1. Саноцкий И.В. "Методы определения токсичности и опасности химических веществ", М., 1970.

2. Авторское свидетельство СССР №1163264, МКИ³ G 01 N 33/48; 23.06.85.

3. Авторское свидетельство СССР №1686376, МКИ³ G 01 N 33/68, 23.10.91.

Таблица №1. Активность ЛХАТ печени при токсическом воздействии.
Вещество	30 мин	60 мин	90 мин	120 мин	180 мин
	n=10	n=10	n=10	n=10	n=10
Эндотоксин	10,18+0,3*	8.68+0,17*	7.82+0,2*	7.29+0,24*	6.87+0,31*
ТХМ в дозе:
1 мл/кг	10.71+0,27*	9.07+0.15*	8.17+0,2*	6.37+0,31*	5.92+0,33*
4 мл/кг	9.82+0,29*	8,14+0,19*	7.32+0,27*	5.97+0,38*	5.47+0.41*
Контроль	n=7	n=7	n=7	n=7	n=7
	14.25+0,3	14.06+0,4	14.41+0,22	14,32+0,31	14.17+0,6
n - число животных в эксперименте (группе). Активность фермента ЛХАТ выражалась в мк Кат/г белка.
* - р<0.05.

Таблица №2. Активность ацилазы печени при токсическом воздействии.
Вещество	30 мин	60 мин	90 мин	120 мин	180 мин
	n=10	n=10	n=10	n=10	n=10
Эндотоксин	3.14+0,33	3.11+0,35	2.83+0,46	1.21+0,24*	1.93+0,18*
ТХМ в дозе:
1 мл/кг	3.17+0,44	2.93+0,37	2.51+0,4	1.21+0,23*	1.295+0,26*
4 мл/кг	3.23+0.31	2.89+0,25	2.74+0,37	1.19+0,25*	1,41+0,33*
Контроль	n=7	n=7	n=7	n=7	n=7
	3,5+0,29	3,2+0,31	3.0+0,42	2,9+0,44	3,3+0,25
n - число животных в эксперименте (группе). Активность фермента ацилазы выражалась в ЕД фермента/мг белка.
* - р<0.05.

Способ определения токсичности химических веществ, включающий введение лабораторным животным токсического агента, забой животных, приготовление гомогената ткани печени с последующим определением активности фермента, отличающийся тем, что определяют активность фермента лецитин: холестеринацил-трансферазы и по снижению уровня активности фермента в течение 30-180 мин после введения вещества по сравнению с контролем судят о токсичности вещества.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и неонатологии. .

Способ дифференциальной диагностики внебольничной пневмонии и инфильтративного туберкулеза легких у больных с признаками дисплазии соединительной ткани // 2265225

Изобретение относится к области медицины, конкретно к пульмонологии и фтизиатрии, и предназначено для дифференциальной диагностики внебольничной пневмонии с затяжным течением и инфильтративного туберкулеза легких у пациентов с дисплазией соединительной ткани (ДСТ).

Способ определения фетоплацентарной недостаточности у беременных с заболеваниями щитовидной железы // 2263919

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству. .

Способ диагностики острого пиелонефрита // 2263918

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для объективной оценки форм острого пиелонефрита. .

Способ выявления патологии молекулы альфа-2-макроглобулина у больных с черепно-мозговой травмой // 2263917

Изобретение относится к области медицины, а именно к нейрохирургии и невропатологии, нейрохимии, физиологии. .

Антитело против митохондриального изофермента аденилаткиназы человека, диагностическая композиция и диагностический набор для диагностики болезней сердца // 2262939

Изобретение относится к области медицинской иммунологии, в частности к иммунологической композиции и набору для диагностики болезней сердца с использованием митохондриальных изоферментов аденилаткиназы человека.

Способ для диагностики атрофических гастритов // 2262706

Изобретение относится к биохимии и медицине и касается способа оценки состояния слизистой оболочки желудка, в частности атрофического гастрита, путем анализа соединений пепсиногена 1, гастрина и маркера инфекции Helicobacter pylori (HP), и введение полученных результатов в средство обработки данных, включающее в себя операционную систему, средство для передачи и приема и обработки данных, причем упомянутое средство обработки данных предназначено для осуществления сравнения измеренного значения концентрации анализируемого соединения с пороговым значением для анализируемого соединения, и генерирования информации, в ответ на комбинацию результатов сравнения и дополнительно, на другие введенные данные.

Способ диагностики тяжелых форм гестоза // 2259568

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. .

Каталитические аллоантитела к фактору viii // 2258935

Изобретение относится к области иммунологии и гематологии, точнее к способу определения наличия у млекопитающего каталитических алло-антител к фактору VIII, способных расщеплять фактор VIII, и определения характеристик сайтов в указанной молекуле фактора VIII, где происходит расщепление указанными каталитическими алло-антителами к фактору VIII.

Способ прогнозирования развития кардиогенного шока у больных острым инфарктом миокарда // 2258226

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. .

Способ прижизненного определения острой фазы стафилококкового среднего отита в эксперименте // 2267129

Изобретение относится к экспериментальному разделу медицины, к способу прижизненного определения острой фазы стафилококкового среднего отита в эксперименте при проведении исследований

Способ определения содержания белка в растворах // 2267132

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии и может использоваться для ускоренного определения содержания белка в биологических жидкостях и ферментных растворах

Способ ранней диагностики низкодифференцированной аденокарциномы эндометрия // 2268472

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гинекологии и онкологии

Способ определения эффективности терапии идиопатического фиброзирующего альвеолита // 2268473

Изобретение относится к медицине, в частности к пульмонологии

Способ дифференциальной диагностики лимфаденопатий различного генеза у детей // 2268474

Изобретение относится к медицине, а точнее к онкологии

Способ верификации ранних диагнозов фиброзно-кистозной болезни и рака молочной железы // 2268475

Изобретение относится к медицине, в частности к маммологии и онкологии

Способ количественного определения белка в биологических жидкостях // 2268476

Изобретение относится к медицине, в частности в клинико-диагностической лабораторной практике для проведения анализов на количественное содержание белка в биологических жидкостях (в моче или спинномозговой жидкости)

Способ определения тяжести состояния больных с острым отравлением грибами в условиях массовых поступлений // 2269128

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии

Способ прогнозирования исходов острого вирусного гепатита с // 2269134

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической вирусологии, и может найти применение в клинике инфекционных заболеваний для раннего прогноза исходов острого гепатита С

Способ прогнозирования острых гастродуоденальных язв у больных колоректальным раком в раннем послеоперационном периоде // 2269135

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и биохимии