Способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии

Авторы патента:

Афанасьев Станислав Степанович (RU)

Суркова Лариса Семеновна (RU)

Рубальский Евгений Олегович (RU)

Косарева Вероника Павловна (RU)

Сентюрова Людмила Георгиевна (RU)

Алешкин Владимир Андрианович (RU)

Рыбкин Владимир Семенович (RU)

Теплый Давид Львович (RU)

Галимзянов Халил Мингалиевич (RU)

Шаяхметов Ринат Абдулович (RU)

Давыдкин Игорь Юрьевич (RU)

Давыдкин Валерий Юрьевич (RU)

Рубальский Олег Васильевич (RU)

G01N33/58 - с использованием меченых веществ (G01N 33/53 имеет преимущество; для исследования на живом организме A61K 51/00)

Владельцы патента RU 2288474:

Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) (RU)
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО АГМА Росздрава) (RU)

Изобретение относится к медицине. Согласно заявляемому способу ежедневно в течение 3-5 дней в ротовую полость инбедренной мыши BALB/c вводят оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5-2,0 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴-10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α, затем у забитой мыши определяют в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов и оценивают: отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при отсутствии у инбедренной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов; наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при наличии у инбедренной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов и/или энтероцитов, и/или лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. Изобретение обеспечивает повышение информативности способа.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Известен способ определения токсического действия рекомбинантного человеческого лейкоцитарного интерферона-α₂ на основе изучения его пирогенных свойств на лабораторных животных - в том числе на устойчивых к эндотоксину мышах С3Н/HeJ. Согласно известному способу мышам С3Н/HeJ вводили рекомбинантный человеческий лейкоцитарный интерферон-α₂ в хвостовую вену и измеряли ректальную температуру каждые 10-15 минут. Пик лихорадочной реакции наблюдали через 25-30 минут после инъекции. Минимальная пирогенная доза составляла 7,5×10³ U на мышь, оптимальная пирогенная доза - 75×10³ U на мышь (Dinarello Ch.A., Bemheim Н.А., Duff G.W., Le H.V., Nagabhushan T.L., Hamilton N.C., Coceanl F. Mechanisms of fever induced by recombinant human interferon // The Journal of clinical investigation. - 1984. - Vol.74, N 3. - P.906-913).

Основным недостатком известного способа является то, что он непригоден для проведения комплексной оценки токсичности орально вводимого препарата, предназначенного для локальной интерферонотерапии, в связи с неадекватным для оральной мукозальной интерферонотерапии способом введения препарата и неинформативным для локальной интерферонотерапии показателем контроля токсического действия рекомбинантного человеческого лейкоцитарного интерферона-α₂ - пирогенной реакции у мышей.

Известен способ исследования кожно-резорбтивного действия липосомальной формы интерферона в хроническом эксперименте на крысах линии Wistar. Согласно известному способу препарат наносили на выстриженный участок кожи животных в течение 10 дней, по 100 мкл (5×10³ ME). В качестве контроля использовали крыс, которым апплицировали липосомы либо физиологический раствор в эквивалентном объеме. Через сутки после последней аппликации проводили физиологическое обследование животных (регистрировали изменение массы и температуры тела, частоту сердечных сокращений, исследовательское поведение в тесте "открытое поле"), биохимический и гематологический анализ крови. В те же сроки умерщвляли крыс передозировкой диэтилового эфира для патоморфологического исследования внутренних органов, забирали образцы тканей на гистологическое исследование. В образцах крови определяли уровень гемоглобина, содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, рассчитывали лейкограмму. Биохимические исследования включали оценку показателей интенсивности основных видов обмена, а также активности ферментов-маркеров функционального состояния печени, почек, сердца (Золин В.В., Агафонова О.А., Колокольцев А.А., Даниленко Е.Д., Федосова Л.К., Гамалей С.Г., Омигов В.В., Фадина В А., Масычева В.И. Изучение противовирусной активности, фармакокинетики и токсических свойств липосомальной формы рекомбинантного α_2b-интерферона человека при наружном применении // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2001. - №5. - С.27-31).

Основным недостатком известного способа является то, что он непригоден для проведения комплексной оценки токсичности орально вводимого препарата, предназначенного для локальной интерферонотерапии, в связи с неадекватным для оральной мукозальной интерферонотерапии способом введения препарата и неинформативными для локальной интерферонотерапии системными показателями контроля токсического действия рекомбинантного человеческого интерферона-α₂.

В основу изобретения положена задача обеспечения адекватного введения препарата интерферона для оральной мукозальной интерферонотерапии при информативной регистрации его токсического действия.

Задача решена тем, что согласно заявляемому способу ежедневно в течение 3-5 дней в ротовую полость инбредной мыши BALB/c вводят оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5-2,0 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴-10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяют в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов и оценивают:

отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при отсутствии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов;

наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при наличии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов и/или энтероцитов, и/или лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов.

В результате проведенных нами исследований были выбраны наиболее чувствительные к действию оральной мукозальной интерферонотерапии животные - мыши линии BALB/c; определены у чувствительных животных наиболее реактивные органы и ткани для данного метода введения выбранного препарата рекомбинантного интерферона-α₂; впервые установлены информативные критерии токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии; разработано приспособление для осуществления оральной мукозальной интерферонотерапии у мышей; определены пределы варьирования доз глицеринсодержащего препарата рекомбинантного интерферона-α₂ для исследования на мышах линии BALB/c.

Заявляемый способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии является новым и в литературе не описан.

Техническим результатом заявляемого изобретения является обеспечение адекватного введения препарата интерферона для оральной мукозальной интерферонотерапии при информативной регистрации его токсического действия.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих возможность обеспечения адекватного введения препарата интерферона для оральной мукозальной интерферонотерапии при информативной регистрации его токсического действия.

Пример 1. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 3 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. Установили, что у мыши, после интерферонотерапии отсутствовали дегенеративные изменения гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. В соответствии с чем было установлено отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 2. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 4 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 1,5 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁵ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфюидной ткани; региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений энтероцитов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 3. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 5 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 1,5 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁵ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений гепатоцитов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 4. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 5 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 2 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁵ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 5. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 5 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 2 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии, характеризующийся тем, что ежедневно в течение 3-5 дней в ротовую полость инбредной мыши BALB/c вводят оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5-2,0 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴-10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяют в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов и оценивают: отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при отсутствии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов, наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при наличии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, и/или энтероцитов, и/или лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов.

Изобретение относится к молекулярной биологии и генной инженерии и предназначено для выявления типичных маркерных чужеродных последовательностей ДНК, используемых при модификации растений, в трансгенном растительном материале и продуктах на его основе.

Способ определения иммунореактивных соединений // 2268471

Изобретение относится к области иммунологии. .

Способ определения направления транспорта и интенсивности обмена веществ между минерализованной тканью и контактирующей с ней биологической жидкостью // 2242007

Изобретение относится к области медицины и может использоваться в стоматологии, травматологии, радиологии, биохимии и патфизиологии. .

Способ определения уровня циркулирующих аутоантител в биологических жидкостях // 2240561

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии, и может быть использовано для диагностики аутоиммунного процесса. .

Способ визуализации смерти клеток в области тела млекопитающего субъекта in vivo // 2228765

Изобретение относится к области медицины, в частности к радиологии. .

Способ терапевтического воздействия на организм // 2228531

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для лечения заболеваний, связанных с нарушением функционирования иммунной системы.

Реагент для диагностирования инфекции, вызванной вирусом puumala // 2218571

Изобретение относится к диагностике вируса. .

Меченное люциферазой антитело и способ его получения, способ осуществления анализа на специфическое связывание и набор для применения в анализе на специфическое связывание // 2199125

Изобретение относится к биотехнологии, касается способа конъюгирования люциферазы с химической частицей, в частности антителом, предусматривающий (а) смешивание люциферазы с одним или несколькими компонентами, такими как D-люциферин, ионы магния и аденозинтрифосфат, и (b) осуществление реакции ковалентного связывания между люциферазой и связывающим реагентом с использованием ковалентно связующего агента, где D - люциферин, ионы магния и/или аденозинтрифосфат присутствуют в количестве, достаточном для защиты активности люциферазы от ингибирования ковалентно связующим агентом.

Способ определения ингибирующего действия веществ на комплемент // 2195665

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и касается способа определения прямого воздействия на функциональную активность компонентов комплемента различных веществ, в том числе лекарственных препаратов.

Способ оценки состояния органа по определению изоферментов глутатионовой s-трансферазы и набор для осуществления способа // 2154832

Изобретение относится к медицине, а именно к быстрому анализу для выявления и/или определения глутатионовых S-трансфераз (GSTs) для использования при оценке состояния органа.

Способ определения динамики изменений интенсивности транспорта веществ в превалирующих направлениях между кровью и неминерализованными органами // 2297001

Изобретение относится к области медицины и может применяться специалистами по лабораторной диагностике

Способ диагностики эстроген- и прогестеронзависимой патологии гениталий // 2312354

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностическим методам в гинекологии

Способ многоаналитного иммуноанализа с использованием микрочастиц // 2339953

Изобретение относится к медицинской диагностике, а именно к иммуноанализу

Способ многоаналитного иммуноанализа с использованием микрочастиц // 2379691

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к иммунодиагностике

Устройство и способ детектирования флуоресцентно меченных биологических компонентов // 2390024

Способ дискриминации по меньшей мере двух клеточных популяций и его применение // 2397494

Изобретение относится к биологии, а именно к цитометрическим методам анализа

Идентификация молекул, модулирующих белок-белковое взаимодействие // 2476891

Быстрый биосенсор со слоем реагента // 2482495

Агенты для оптической визуализации // 2484111

Изобретение относится к визуализирующим агентам, подходящим для оптической визуализации in vivo организма млекопитающего

Способ детекции белков в амилоидном состоянии и набор для детекции белков в амилоидном состоянии // 2509155

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицинской диагностики. Предложен способ детекции белков в амилоидном состоянии, в котором получают образец лизата культуры дрожжей или ткани млекопитающего, добавляют к образцу ионный детергент, концентрируют белки в амилоидной форме на ацетатцеллюлозной мембране и детектируют их с использованием аптамеров, их конъюгатов или антител, специфичных к амилоидной форме белков. Также предложен набор для детекции белков в амилоидном состоянии. Изобретение может быть использовано в медицине для диагностики амилоидозов. 2 н. и 7 з. п. ф-лы, 6 ил., 7 пр.