Способ ранней диагностики перинатального поражения центральной нервной системы у новорожденных
Владельцы патента RU 2289136:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Алтайский государственный медицинский университет Минздрава России (ГОУ ВПО АГМУ МЗ РФ) (RU)
Способ относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии. Сущность способа: образец амниотической жидкости забирают путем вагинальной амниотомии в первом периоде родов при раскрытии шейки матки на 4-5 см посредством иглы для проведения спинальной пункции, определяют в нем концентрацию малонового диальдегида. При повышении концентрации малонового диальдегида в амниотической жидкости более 4,50 мкмоль/л диагностируют перинатальное поражение центральной нервной системы у новорожденного. Применение способа позволяет повысить точность ранней диагностики, что дает возможность своевременно провести терапию. Способ прост в применении и может быть использован в скрининговом обследовании рожениц.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано в скрининговом обследовании рожениц.
Перинатальные поражения центральной нервной системы (ЦНС) новорожденного являются основной причиной перинатальной заболеваемости и смертности. Улучшение перинатальных исходов при поражении ЦНС достигается ранним началом патогенетической терапии у новорожденного. Разработка информативных методов ранней диагностики перинатального поражения ЦНС новорожденного является ключевой задачей в решении проблемы перинатальной заболеваемости и смертности.
Известен способ диагностики перинатального поражения ЦНС у новорожденных по Siciarz А. с соавт. (Siciarz A., Weinberger В., Witz G., Hiatt М., Hegyi Т. Urinary Thiobarbituric Acid-Reacting Substances as Potential Biomarkers of Intrauterine Hypoxia. Archives of Pediatrics and Adolescent Medicine; 2001; Vol.155; P.718-722) путем определения концентрации малонового диальдегида в моче новорожденных. При этом не позднее чем через 24 ч после родов производят забор образца мочи новорожденного объемом не менее 400 мл в стерильную пробирку. При необходимости хранения образца пробирку замораживают и хранят при -20°С не более 1 месяца. К 200 мкл мочи добавляют 10 мкл 5% раствора бутилированного гидрокситолуола в ледяной уксусной кислоте и 300 мкл 0,5% водного раствора тиобарбитуровой кислоты. Образец встряхивают и инкубируют при 100°С в течение 30 минут. После охлаждения до комнатной температуры спектрофотометрически определяют оптическую плотность образца на длине волны 532 нм против раствора реактивов, содержащего вместо мочи дистиллированную воду. Полученное значение оптической плотности умножают на коэффициент молярной экстинции 156000 и получают концентрацию малонового диальдегида в моче. В моче также определяется концентрация креатинина методом Яффе: к серии разведении мочи добавляют щелочной пикрат (раствор пикриновой кислоты и 10% водного раствора NaOH в соотношении 5:1). Образцы инкубируют при комнатной температуре в течение 15 минут и спектрофотометрически определяют оптическую плотность раствора на длине волны 500 нм. Затем вычисляют соотношение концентрации малонового диальдегида в моче новорожденных к концентрации креатинина. При этом соотношение ≤8,84 нг малонового диальдегида/мг креатинина рассматривают как норму, а соотношение >8,84 нг малонового диальдегида/мг креатинина как перинатальное поражение ЦНС у новорожденного.
Недостатками известного способа являются:
1. Низкая точность, зависящая от времени забора мочи и проводимой терапии у новорожденного.
2. Необходимость определения концентрации креатинина в моче.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному результату является способ диагностики перинатального поражения ЦНС путем определения количества реактивных видов кислорода в амниотической жидкости по Burlingame J.M. с соавт. (Burlingame J.M., Esfandiari N., Sharma R.K.., Mascha E., Falcone T. Total Antioxidant Capacity and Reactive Oxygen Species in Amniotic Fluid. Obstetrics and Gynecology 2003; Vol.101; P.756-761) методом хемилюминисценции. По известному способу в амниотической жидкости определяют показатель перекисного окисления липидов - скорость генерации реактивных видов кислорода методом хемилюминисценции. Образец амниотической жидкости объемом не менее 800 мкл забирают посредством шприца при проведении трансабдоминального амниоцентеза под контролем ультразвукового исследования. Исключают попадания пузырьков воздуха и крови в шприц. Образцы амниотической жидкости разливают на 2 пробирки по 400 мкл. При необходимости хранения образцы помещают в сосуд темного стекла и хранят при комнатной температуре не более 1,5 ч (замораживание образцов недопустимо). Уровень реактивных видов кислорода определяют методом хемилюминисценции после добавления к первому образцу амниотической жидкости 10 мкл люминола (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион). При помощи люминометра в течение 15 минут при облучении первого и второго образцов амниотической жидкости в режиме 1×106 фотонов в минуту подсчитывают количество фотонов в первом и сравнивают с количеством переизлучившихся фотонов во втором образце амниотической жидкости, не содержащем люминол. Нормальный уровень генерации свободных радикалов в амниотической жидкости, значение при перинатальном поражении ЦНС у новорожденного устанавливаются в каждой лаборатории опытным путем.
Недостатками известного способа являются:
1. Инвазивность проводимого исследования, связанного с высоким риском для матери и плода.
2. Необходимость в дорогостоящем оборудовании.
3. Высокие профессиональные требования к персоналу, проводящему забор образца амниотической жидкости.
4. Невозможность сравнить полученные результаты с другими лабораториями из-за привязки к используемому оборудованию и реактивам.
5. Низкая точность исследования при попадании крови в образец амниотической жидкости.
6. Невозможность длительного хранения образца амниотической жидкости.
Положительным результатом заявляемого способа является повышение точности исследования и снижения риска развития осложнений со стороны новорожденного за счет изменения пути забора амниотической жидкости и определения в амниотической жидкости другого показателя перекисного окисления липидов.
Положительный результат достигается тем, что образец амниотической жидкости забирают вагинальной амниотомией, а в образце амниотической жидкости определяют концентрацию малонового диальдегида.
Способ осуществляют следующим образом.
Образцы амниотической жидкости забирают в первом периоде родов вагинальной амниотомией при раскрытии шейки матки 4-5 см. Амниотомию проводят при помощи иглы для проведения спинальной пункции. После начала истечения амниотической жидкости из иглы к игле подносят стерильную пробирку и производят забор не менее 500 мл амниотической жидкости. При необходимости хранения образца пробирку замораживают и хранят при температуре -20°С не более 1 месяца. В образце амниотической жидкости определяют концентрацию малонового диальдегида. При этом в опытную пробу вносят 0,5 мл воды, 0,5 мл амниотической жидкости, 1,0 мл трихлоруксусной кислоты, 0,1 мл HCl и 1,0 мл тиобарбитуровой кислоты. В контрольную пробу вместо амниотической жидкости добавляют 0,5 дистиллированной воды. После инкубации при температуре 100°С в течение 15 мин пробы охлаждают, центрифугируют при 3000 оборотов в минуту и измеряют оптическую плотность против контрольной пробы при длине волны 535 нм. Концентрацию малонового диальдегида в мкмоль/л вычисляют по формуле:
где Е - экстинкция опытной пробы,
1,56×10-5 - коэффициент молярной экстинкции в моль-1 см-1;
6,20 - разведение плазмы.
При этом концентрацию малонового диальдегида в амниотической жидкости ≤4,50 мкмоль/л расценивают как норму, а концентрацию малонового диальдегида в амниотической жидкости >4,50 мкмоль/л - как перинатальное поражение ЦНС у новорожденного.
Величину 4,5 мкмоль/л установили экспериментально. Под нашим наблюдением находились 63 роженицы и их новорожденные. Всех новорожденных и их матерей разделили на 2 группы: основная группа 30 рожениц и их новорожденных с перинатальными поражениями ЦНС и контрольная группа 33 роженицы и их новорожденные без перинатальных поражений ЦНС. В основной группе концентрация малонового диальдегида в амниотической жидкости составила 5,45±0,55 мкмоль/л, а в контрольной группе - 4,30±0,15, при р<0,001. Таким образом, концентрация малонового диальдегида в амниотической жидкости 4,5 мкмоль/л является границей между нормой и перинатальным поражением ЦНС у новорожденного.
Клинический пример 1
Беременная С., 24 лет поступила 01.03.04 на дородовую госпитализацию в отделении патологии беременных РД №2 г. Барнаула (История родов №370) с диагнозом "Беременность 39 недель. Хроническая фетоплацентарная недостаточность, компенсация. Гестоз II половины беременности легкой степени тяжести. Анемия легкой степени тяжести." В отделении проводилась общеклиническое обследование, ультразвуковое исследование плода с доплерометрией, кардиотахография плода, консультация окулиста. В отделении проведено лечение гестоза: седативная и гипотензивная терапия, лечение хронической-фетоплацентраной недостаточности, лечение анемии.
05.03.04. Роды. Патологический прелиминарный период. Длительность родов по периодам: I - 8 ч 0 мин; II - 35 мин; III - 10 мин. Вес плода 2914 г; длина - 48 см. Количество баллов по шкале Апгар: на 1 минуте - 8; на 5 минуте - 9. Проведено общеклиническое обследование новорожденного. Клинических признаков перинатального поражения ЦНС не выявлено.
В околоплодных водах определили концентрацию малонового диальдегида:
где 1,53×10-5 - экстинкция пробы,
1,56×10-5 - коэффициент молярной экстинкции в моль-1 см-1,
6,20 - разведение плазмы.
Поскольку концентрация малонового диальдегида в амниотической жидкости >4,50 мкмоль/л, то концентрацию малонового диальдегида 6,08 мкмоль/л расценили как перинатальное поражение ЦНС у новорожденного.
07.03.04. Проведена нейросоноскопия: признаки внутричерепной гипертензии. Назначена дегидратирующая и седативная терапия.
Заключительный диагноз: "Беременность 39 недель. Хроническая фетоплацентарная недостаточность, компенсация. Гестоз II половины беременности легкой степени тяжести. Анемия легкой степени тяжести. Срочные роды I гипотрофичным плодом." Окончательный диагноз у новорожденного: "Церебральная ишемия I-II степени. Внутриуробная гипотрофия I степени."
Клинический пример 2
Беременная Ш., 22 лет поступила 02.10.04 на дородовую госпитализацию в отделении патологии беременных РД №2 г. Барнаула (История родов №1280) с диагнозом "Беременность 40 недель. Нейроциркуляторная дистония по гипертипу. Анемия легкой степени. Хроническая фетоплацентарная недостаточность." В отделении проводилась общеклиническое обследование, ультразвуковое исследование плода с доплерометрией, кардиотахография плода, консультация окулиста. В отделении проведена гипотензивная терапия, лечение хронической-фетоплацентраной недостаточности, лечение анемии.
05.10.04. Роды. Длительность родов по периодам: I - 7 ч 0 мин; II - 40 мин; III - 10 мин. Вес плода 4110 г; длина - 55 см. Количество баллов по шкале Апгар: на 1 мин - 6; на 5 мин - 7. Проведено общеклиническое обследование новорожденного. Признаков перинатального поражения ЦНС не выявлено.
В околоплодных водах определили концентрацию малонового диальдегида:
где 1,72×10-5 - экстинкция пробы,
1,56×10-5 - коэффициент молярной экстинкции в моль-1 см-1,
6,20 - разведение плазмы.
Поскольку концентрация малонового диальдегида в амниотической жидкости >4,50 мкмоль/л, то концентрацию малонового диальдегида 6,84 мкмоль/л расценили как перинатальное поражение ЦНС у новорожденного.
08.03.04. Проведена нейросоноскопия: признаки внутричерепной гипертензии. Назначена дегидратирующая и седативная терапия.
Заключительный диагноз: "Беременность 40 недель. Нейроциркуляторная дистония по гипертипу. Анемия легкой степени. Хроническая фетоплацентарная недостаточность. Срочные роды 1 крупным плодом." Окончательный диагноз у новорожденного: "Церебральная ишемия I. Гипертензионно-гидроцефальный синдром."
Клинический пример 3
Беременная Г., 22 лет поступила 08.03.04 на дородовую госпитализацию в отделении патологии беременных РД №2 г.Барнаула (История родов №341) с диагнозом "Беременность 40 недель. Анемия легкой степени." В отделении проводилась общеклиническое обследование, ультразвуковое исследование плода с доплерометрией, кардиотахография плода, консультация окулиста. В отделении проведено лечение анемии.
11.03.04. Роды. Длительность родов по периодам: I - 5 ч 45 мин; II - 35 мин; III - 15 мин. Вес плода 3860 г; длина - 54 см. Количество баллов по шкале Апгар: на 1 мин - 6; на 5 мин - 8. Проведено общеклиническое обследование новорожденного. Признаков перинатального поражения ЦНС не выявлено.
В околоплодных водах определили концентрацию малонового диальдегида:
где 0,95×10-5 - экстинкция пробы,
1,56×10-5 - коэффициент молярной экстинкции в моль-1 см-1,
6,20 - разведение плазмы.
Поскольку концентрация малонового диальдегида в амниотической жидкости <4,50 мкмоль/л, то концентрацию малонового диальдегида 3,78 мкмоль/л расценили как норму.
13.03.04. Проведена нейросоноскопия: признаков патологии не выявлено.
Заключительный диагноз: "Беременность 40 недель. Анемия легкой степени. Срочные роды 1." Окончательный диагноз у новорожденного: "Период адаптации. Физиологическая желтуха."
Таким образом, преимуществом заявляемого способа является техническая простота исполнения, высокая точность и информативность. Заявляемый способ эффективен в скрининговом исследования рожениц для идентификации новорожденных с перинатальным поражением ЦНС для проведения ранней терапии.
Способ ранней диагностики перинатального поражения центральной нервной системы у новорожденных, включающий исследование показателей перекисного окисления липидов в амниотической жидкости, отличающийся тем, что образец амниотической жидкости забирают путем вагинальной амниотомии в первом периоде родов при раскрытии шейки матки на 4-5 см посредством иглы для проведения спинальной пункции, определяют в нем концентрацию малонового диальдегида и при повышении концентрации малонового диальдегида в амниотической жидкости более 4,50 мкмоль/л диагностируют перинатальное поражение центральной нервной системы у новорожденного.
