Фармацевтические дозированные формы эпотилона для перорального введения

Изобретение относится к области медицины и фармакологии и касается способа увеличения биодоступности аналога эпотилона, при котором млекопитающему перорально вводят аналог эпотилона или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство совместно с фармацевтически приемлемым буфером, нейтрализующим кислоту в количестве, достаточном для обеспечения, по меньшей мере, 20 мэкв емкости нейтрализации кислоты, что улучшает биодоступность эпотилона. 5 н. и 15 з.п. ф-лы, 7 табл., 2 ил.

 

Область, к которой относится изобретение.

Данное изобретение относится к способам перорального введения эпотилонов пациенту, обеспечивающим увеличение их биодоступности. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, фармацевтическим дозированным формам и наборам для применения в способах по изобретению. В частности, изобретение относится к твердой оральной дозированной форме эпотилона.

Предпосылки создания изобретения

Эпотилоны представляют собой 16-членные циклические молекулы макролидов, которые находят применение в фармацевтике. Например, эпотилоны А и В являются веществами природного происхождения, которые могут быть выделены из некоторых микроорганизмов; эти два соединения имеют следующие структуры:

Со времени появления эпотилонов были разработаны, синтезированы и испытаны аналоги природных эпотилонов с целью создания лекарственных веществ (см., например, D.Schinzer et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1997, 36, No.3, 523-524; K.C.Nicolaou, et al., J. Amer. Chem. Soc., 1997, 119, 7974-7991; K.C.Nicolaou, et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, 35, No. 20, 2399-2401; Balog et al, Angew. Chem. Int. Ed. Engl, 1996, 35, No.23/24, 2801-2803).

Известные эпотилоны обладают стабилизирующим действием на микротрубочки подобно TAXOL® и, следовательно, проявляют цитотоксическую активность по отношению к быстро пролиферирующим клеткам, например, в случае раковых заболеваний и других гиперпролиферативных клеточных болезней (см. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol.35, № 13/14, 1996 и D.M.Bollag, Exp. Opin. Invest. Drugs, 6(7): 867-873, 1997).

Однако, прежде, чем эпотилоны могут быть использованы для лечения болезней, нужно получить на их основе фармацевтическую композицию, которая может быть введена пациенту; например, дозированную форму, пригодную для перорального введения, введения через слизистую оболочку (например, назального, сублингвального, вагинального, трансбуккального или ректального), парентерального (например, подкожного, внутривенного, при помощи болюса, внутримышечного или внутриартериального) введения или трансдермального введения. Особенно предпочтительны препараты для перорального введения, так как они более удобны и их легче вводить, чем другие препараты. Кроме того, пероральное введение позволяет избежать болевых ощущений и дискомфорта, характерных для парентерального введения.

Соответственно, пациенты предпочитают препараты для перорального введения, которые обеспечивают удобные для них схемы приема.

Применение орального препарата требует, однако, биодоступности активного агента. Биодоступность лекарств, вводимых перорально, зависит от различных факторов, например, абсорбции лекарства в желудочно-кишечном тракте, стабильности лекарства в желудочно-кишечном тракте и эффекта первого прохождения. Таким образом, эффективная пероральная доставка активного агента требует, чтобы активный агент характеризовался достаточной стабильностью в желудке и просвете кишечника для прохождения через стенку кишечника. Однако многие лекарства имеют тенденцию быстро распадаться в кишечном тракте или плохо абсорбируются в кишечном тракте, и пероральное введение лекарства становится неэффективным.

Фармацевтические композиции, предназначенные для перорального введения, обычно являются твердыми дозированными формами (например, таблетки) или жидкими препаратами (например, растворы, суспензии или эликсиры). Твердые дозированные формы могут, однако, накладывать ограничения на фармацевтическое применение активного агента, так как некоторые группы пациентов испытывают затруднения, физические или психологические, при проглатывании твердых оральных лекарственных форм. Если доступна жидкая дозированная форма, эти пациенты более легко могут принимать требуемую дозу активного ингредиента при введении ее в виде орального жидкого препарата, который они могут выпить или получить через назально-желудочную трубку. Поэтому желательны жидкие оральные формы. Для введения жидкой оральной фармацевтической композиции пациенту необходим подходящий растворитель или носитель для растворения или диспергирования активного вещества. Система растворителей должна быть совместима с активным веществом и быть нетоксичной для пациента. Обычно в качестве растворителя для жидких оральных составов применяют водные растворители.

Получение препаратов на основе некоторых эпотилонов, помимо обычных препятствий, затруднено вследствие того, что некоторые эпотилоны не стабильны в кислой среде и/или плохо растворяются в водной среде, которая является основой при получении оральных растворов. Однако, настоящее изобретение преодолевает эти трудности и обеспечивает способы и фармацевтические препараты для перорального введения эпотилонов, в которых эпотилоны доступны в достаточной степени для получения фармакологического эффекта.

Сущность изобретения.

Настоящее изобретение предусматривает способ оральной доставки эпотилонов млекопитающему при уменьшении или ликвидации расщепления, разложения или деактивации эпотилона в желудочно-кишечной системе, особенно под действием желудочного сока в желудке. Согласно одному варианту способ включает введение эпотилона в фармацевтически приемлемом буфере, нейтрализующем кислоту, или вместе с этим буфером. Согласно предпочтительному варианту введение включает применение двух растворов, один из которых содержит один активный эпотилон или эпотилон в среде фармацевтически приемлемого носителя, а другой раствор содержит фармацевтически приемлемый нейтрализующий буфер.

Данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим эпотилон в виде твердой формы, которая пригодна для воссоздания или восстановления, если эпотилон находится в виде лиофилизата, с получением фармацевтически приемлемого раствора, или в виде предварительно полученного раствора. Настоящее изобретение предусматривает также фармацевтические композиции, включающие фармацевтически приемлемый нейтрализующий буфер в твердом виде, пригодном для воссоздания или восстановления, если он является лиофилизатом, с получением фармацевтически приемлемого раствора, или в виде предварительно полученного раствора.

Согласно более конкретному варианту данное изобретение предусматривает способы увеличения биодоступности перорально введенного эпотилона. Способы включают пероральное введение одного или более эпотилона формулы:

или

где G выбран из группы, состоящей из алкила, замещенного алкила, арила, замещенного арила, гетероцикла,

W обозначает О или NR₁₆;

Х обозначает О, S, CHR₁₇ или Н, R₁₈;

Y выбран из группы, состоящей из О; Н, Н; Н, OR₂₂, OR₂₃, OR₂₃; NOR₂₄; Н, NOR₂₅; Н, HNR₂₆R₂₇; NHNR₂₈R₂₉; Н, NHNR₃₀R₃₁ или CHR₃₂, где OR₂₃, OR₂₃ могут быть циклическим кеталем;

B₁ и В₂ выбраны из группы, состоящей из Н, OR₃₃; OCOR₃₄, OCONR₃₅R₃₆; NR₃₇R₃₈ или NR₃₉CONR₄₀R₄₁;

D выбран из группы, состоящей из NR₄₂R₄₃ или гетероцикла;

R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ выбраны из Н, низшего алкила;

R₈, R₉, R₁₀ и R₁₁ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, замещенного алкила, арила, замещенного арила, циклоалкила, гетероцикла или замещенного гетероцикла;

R₁₇, R₁₈, R₂₂ и R₂₃ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила и замещенного алкила;

R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₈, R₃₀, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₉, R₄₀, R₄₁, R₄₂, R₅₁, R₅₂, R₅₃ и R₆₁ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, замещенного алкила, арила или замещенного арила;

R₁₂, R₁₆, R₂₇, R₂₉, R₃₁, R₃₈ и R₄₃ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, замещенного алкила, замещенного арила, циклоалкила, гетероцикла, R₅₁C=O, R₅₂OC=O, R₅₃SO₂, гидрокси и O-алкила или O-замещенного алкила;

или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, клатрата или пролекарства и пероральное введение одного или более фармацевтически приемлемых буферов, нейтрализующих кислоту.

Фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, может быть введен одновременно, до, после или и до, и после введения одного или нескольких эпотилонов. Если буфер вводится до активного эпотилона, то он вводится не позже, чем примерно за 1 час перед введением эпотилона. Если фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, вводится после эпотилона, он вводится не позже, чем примерно через 1 час после введения эпотилона.

Фармацевтически приемлемый буферный раствор, нейтрализующий кислоту, который может быть жидким препаратом и который может быть воссоздан перед самым введением, содержит один или несколько компонентов, которые способны нейтрализовать кислые растворы, в частности, желудочный сок, в течение какого-то периода времени. Компоненты буфера включают, не ограничиваясь этим, фармацевтически приемлемые слабые кислоты, слабые основания или их смеси. Предпочтительно, чтобы компоненты буфера были водорастворимыми, например, это - фосфорная кислота, винные кислоты, молочная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, уксусная кислота, аскорбиновая кислота, аспартовая кислота, соляная кислота, серная кислота, глутаминовая кислота и их соли.

Фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, вводят в количестве, достаточном для нейтрализации жидкостей в желудке и увеличения количества эпотилона, который абсорбируется желудочно-кишечной системой. Фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, может быть введен в виде водного раствора, имеющего рН между примерно 5 и 9. Фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, может быть введен в виде водного раствора безводного двухосновного фосфата натрия, дигидрата лимоннокислого натрия и безводной лимонной кислоты.

Данное изобретение значительно повышает биодоступность перорально введенного эпотилона по сравнению с биодоступностью эпотилона, введенного без нейтрализующего буфера. Согласно одному варианту биодоступность одного или нескольких эпотилонов или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства эпотилона составляет, по меньшей мере, 20%. Один или несколько эпотилонов или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство могут быть введены перорально в виде раствора в пропиленгликоле и этаноле, например, при соотношении пропиленгликоль:этанол, равном примерно 80:20.

Предпочтительным эпотилоном является [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,16S*]]-7,11-дигидрокси-8,8,10,12,16-пентаметил-3-[1-метил-2-(2-метил-4-тиазолил)-этенил]-17-окса-4-азабицикло[14.1.0]гептадекан-5,9-дион.

Настоящее изобретение также предусматривает наборы, которые содержат нужный эпотилон и растворимый буферный состав. Оно охватывает набор, содержащий а) фармацевтическую композицию, содержащую эпотилон, который пригоден для перорального введения, и б) фармацевтическую композицию, содержащую нейтрализующий кислоту буфер, пригодный для перорального введения.

Согласно одному варианту изобретения наборы включают:

(i) первый компонент, содержащий один или несколько эпотилонов формулы:

или

где G, W, X, Y, B₁, B₂, D, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉, R₄₀, R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₅₁, R₅₂, R₅₃ и R₆₁ указаны выше; и

(ii) второй компонент содержит фармацевтически приемлемый, буфер нейтрализующий кислоту,

причем первый компонент и второй компонент находятся в виде жидкой оральной дозированной формы или в виде твердой фармацевтической композиции, которая может быть воссоздана или восстановлена при помощи растворителя с получением жидкой дозированной формы.

Фармацевтическая композиция, которую нужно воссоздать при помощи растворителя, может быть в виде таблетки. Первый компонент или второй компонент могут быть безводными. Набор может также включать растворители для воссоздания первого или второго компонентов. Растворитель для воссоздания первого компонента может быть смесью пропиленгликоля и этанола, причем соотношение пропиленгликоль:этанол равно примерно 80:20.

Данное изобретение относится также к фармацевтической композиции, включающей:

(i) один или несколько эпотилонов формулы:

или

где G, W, X, Y, В₁, B₂, D, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₆, R₁₇, R₁₈, R₂₂, R₂₃, R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₇, R₂₈, R₂₉, R₃₀, R₃₁, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₈, R₃₉, R₄₀, R₄₁, R₄₂, R₄₃, R₅₁, R₅₂, R₅₃ и R₆₁ указаны выше, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство в твердом виде; и

(ii) твердый фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, в количестве, достаточном для уменьшения разложения одного или нескольких эпотилонов или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства, причем фармацевтическую композицию воссоздают при помощи растворителя с получением жидкой оральной дозированной формы.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 - зависимость среднего значения концентрации соединения (А) в плазме от времени у собак после IV введения соединения с концентрацией 0,5 мг/кг и перорального введения 2 мг/кг раствора. Вертикальные стержни обозначают стандартные отклонения и показаны там, где они больше размера символа.

Фиг.2 - зависимость среднего значения концентрации соединения (В) в плазме от времени у собак после IV введения соединения с концентрацией 0,5 мг/кг и перорального введения 2 мг/кг раствора. Вертикальные стержни обозначают стандартные отклонения и показаны там, где они больше размера символа.

Подробное описание изобретения.

Благодаря фармакологическим преимуществам эпотилонов существует необходимость в дозированных формах и способах введения этих соединений, обеспечивающих биодоступность, достаточную для получения фармакологического эффекта. В частности, существует необходимость в оральных дозированных формах, особенно в жидких оральных дозированных формах, способных доставить эпотилон в количестве, достаточном для лечения болезни. Данное изобретение частично основано на обнаружении того факта, что эпотилоны формулы (Ia) или (Ib):

или

где G выбран из группы, состоящей из алкила, замещенного алкила, арила, замещенного арила, гетероцикла,

W обозначает О или NR₁₆;

Х обозначает О, S, CHR₁₇; или Н, R₁₈;

Y выбран из группы, состоящей из О; Н, Н; Н, OR₂₂; OR₂₃, OR₂₃; NOR₂₄; Н, NOR₂₅; Н, HNR₂₆R₂₇; NHNR₂₈R₂₉; Н, NHNR₃₀R₃₁ или CHR₃₂, где OR₂₃, OR₂₃ могут быть циклическим кеталем;

B₁ и В₂ выбраны из группы, состоящей из Н, OR₃₃; OCOR₃₄, OCONR₃₅R₃₆; NR₃₇R₃₈ или NR₃₉CONR₄₀R₄₁;

D выбран из группы, состоящей из NR₄₂R₄₃ или гетероцикла;

R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ выбраны из Н, низшего алкила;

R₈, R₉, R₁₀ и R₁₁ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, замещенного алкила, арила, замещенного арила, циклоалкила, гетероцикла или замещенного гетероцикла;

R₁₇, R₁₈, R₂₂ и R₂₃ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила и замещенного алкила;

R₂₄, R₂₅, R₂₆, R₂₈, R₃₀, R₃₂, R₃₃, R₃₄, R₃₅, R₃₆, R₃₇, R₃₉, R₄₀, R₄₁, R₄₂, R₅₁, R₅₂, R₅₃ и R₆₁ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, замещенного алкила, арила или замещенного арила;

R₁₂, R₁₆, R₂₇, R₂₉, R₃₁, R₃₈ и R₄₃ выбраны из группы, состоящей из Н, алкила, замещенного алкила, замещенного арила, циклоалкила, гетероцикла, R₅₁C=O, R₅₂OC=O, R₅₃SO₂, гидрокси и O-алкила или O-замещенного алкила;

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват, гидрат, клатрат или пролекарство, введенные перорально в сочетании с фармацевтически приемлемым буфером, нейтрализующим кислоту, достаточно биодоступны, чтобы обеспечить фармакологический эффект.

Соответственно, настоящее изобретение направлено на способы увеличения биодоступности перорально введенных эпотилонов формул (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, клатратов, гидратов или пролекарств и перорального введенного фармацевтически приемлемого буфера, нейтрализующего кислоту, в сочетании друг с другом. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, фармацевтическим дозированным формам и наборам, используемым в способах по изобретению.

Предпочтительным эпотилоном, используемым в способах, композициях и дозированных формах по изобретению, является [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,16S*]]-7,11-дигидрокси-8,8,10,12,16-пентаметил-3-[1-метил-2-(2-метил-4-тиазолил)этенил]-17-окса-4-азабицикло[14.1.0]гептадекан-5,9-дион («соединение (А)» показанной ниже структуры):

Определения.

Ниже приведены определения различных терминов, используемых для описания данного изобретения. Эти определения относятся к терминам, используемым по всему тексту данной заявки, если иное не оговорено в конкретных случаях.

Используемый термин «алкил» относится к линейным или разветвленным незамещенным углеводородным группам, содержащим от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно, 1-7 атомов углерода.

Используемый термин «замещенный алкил» относится к алкильной группе, замещенной, например, одним - четырьмя заместителями, такими как галоид, трифторметил, трифторметокси, гидрокси, алкокси, циклоалкокси, оксо, алканоил, арилокси, алканоилокси, амино, алкиламино, ариламино, аралкиламино, цикло-алкиламино, гетероциклоамино, дизамещенные аминогруппы, в которых оба заместителя у аминогруппы выбраны из алкила, арила или аралкила, алканоиламино, ароиламино, аралканоиламино, замещенной алканоиламино, замещенной ариламино, замещенной аралканоиламино, тиольной группы, алкилтио, арилтио, аралкилтио, циклоалкилтио, гетероциклотио, алкилтионо, арилтионо, аралкилтионо, алкилсульфонила, арилсульфонила, аралкилсульфонила, сульфонамидо (например, SO₂NH₂), замещенной сульфонамидной группы, нитро, циано, карбокси, карбамила (например, CONH₂), замещенного карбамила (например, CONНалкила, CONHалкила, CONНаралкила или случаев, когда два заместителя у атома азота выбраны из алкила, арила или аралкила), алкоксикарбонила, арила, замещенного арила, гуанидино и гетероциклов, таких как индолил, имидазолил, фурил, тиенил, тиазолил, пирролидил, пиридил и пиримидил. Если, как отмечено выше, заместитель также содержит заместитель, последний может быть галогеном, алкилом, алкокси, арилом или аралкилом.

Используемый термин «галоген» или «галоид» относится к фтору, хлору, брому и йоду.

Используемый термин «арил» относится к моноциклическим или бициклическим ароматическим углеводородным группам, содержащим от 6 до 12 атомов углерода в кольце, например, к фенилу, нафтилу, бифенилу и дифенилу, каждый из которых может иметь заместители.

Используемый термин «аралкил» относится к арилу, присоединенному к остальной части молекулы через алкильную группу, например, к бензильной группе.

Используемый термин «замещенный арил» относится к арильной группе, замещенной, например, одним - четырьмя заместителями, такими как алкил, замещенный алкил, фенил, замещенный фенил, гетероцикло, галоид, трифторметокси, трифторметил, гидрокси, алкокси, циклоалкилокси, гетероцикло-окси, алканоил, алканоилокси, амино, алкиламино, аралкиламино, цикло-алкиламино, гетероциклоамино, диалкиламино, алканоиламино, тиольная группа, алкилтио, циклоалкилтио, гетероциклотио, уреидо, нитро, циано, карбокси, карбоксиалкил, карбамил, алкоксикарбонил, алкилтионо, арилтионо, алкилсульфонил, сульфонамидо и арилокси. Заместитель, в свою очередь, может быть замещен галоидом, гидрокси, алкилом, алкокси, арилом, замещенным арилом, замещенным алкилом или аралкилом.

Используемый термин «циклоалкил» относится к возможно замещенным насыщенным циклическим углеводородным кольцевым системам, предпочтительно, содержащим 1-3 кольца и 3-7 атомов углерода в одном кольце, которое может быть конденсированным с ненасыщенным С₃-С₇-карбоциклическим кольцом. Примеры таких групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклодецил, циклододецил и адамантил. Примеры заместителей включают одну или несколько алкильных групп, описанных выше, или одну или несколько групп, описанных выше в качестве заместителей алкильных групп.

Используемые термины «гетероцикл», «гетероциклический» и «гетероцикло» относятся к возможно замещенной, полностью насыщенной или ненасыщенной ароматической или неароматической циклической группе, которая, например, является 4-15-членной системой или 4-7-членной моноциклической, 7-11-членной бициклической или 10-15-членной трициклической кольцевой системой, которая содержит, по меньшей мере, один гетероатом в, по меньшей мере, одном углеродсодержащем кольце. Каждое кольцо гетероциклической группы, содержащей гетероатом, может содержать 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы, причем гетероатомы азота и серы могут быть окислены и гетероатомы азота могут быть также кватернизованы. Гетероциклическая группа может быть присоединена через любой гетероатом или атом углерода.

Примерами моноциклических гетероциклических групп служат, без ограничения, пирролидинил, пирролил, индолил, пиразолил, оксетанил, пиразолинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, оксазолил, оксазолидинил, изоксазолинил, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, тиазолидинил, изотиазолил, изотиазолидинил, фурил, тетрагидрофурил, тиенил, оксадиазолил, пиперидинил, пиперазинил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, 2-оксазепинил, азепинил, 4-пиперидонил, пиридил, N-оксопиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, тетра-гидротиопиранилсульфон, морфолинил, тиоморфолинил, тиоморфолинилсульфоксид, тиоморфолинилсульфон, 1,3-диоксолан и тетрагидро-1,1-диоксотиенил, диоксанил, изотиазолидинил, тиетанил, тииранил, триазинил и триазолил.

Примеры бициклических гетероциклических групп включают, но не ограничиваются этим, бензотиазолил, бензоксазолил, бензотиенил, хинуклидинил, хинолинил, хинолинил-N-оксид, тетрагидроизохинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензопиранил, индолизинил, бензофурил, хромонил, кумаринил, циннолинил, хиноксалинил, индазолил, пирролопиридил, фуропиридинил (такой как фуро[2,3-с]пиридинил, фуро[3,1-b]пиридинил или фуро[2,3-b]пиридинил), дигидроизоиндолил, дигидрохиназолинил (такой как 3,4-дигидро-4-оксо-хиназолинил), бензизотиазолил, бензизоксазолил, бензодиазинил, бензофуразинил, бензотиопиранил, бензотриазолил, бензпиразолил, дигидро-бензофурил, дигидробензотиенил, дигидробензотиопиранил, дигидробензотио-пиранилсульфон, дигидробензопиранил, индолинил, изохроманил, изоиндолинил, нафтиридинил, фталазинил, пиперонил, пуринил, пиридопиридил, хиназолинил, тетрагидрохинолинил, тиенофурил, тиенопиридил и тиенотиенил.

Примеры заместителей включают, без ограничения, одну или несколько алкильных групп, описанных выше, или одну или несколько групп, описанных выше в качестве заместителей у алкила. Сюда относятся гетероциклы небольшого размера, например, такие как эпоксиды и азиридины.

Используемый термин «гетероатомы» включает кислород, серу и азот.

Используемый термин «низший» обозначает фрагмент, содержащий до 7 атомов углерода включительно, предпочтительно, до 4 атомов углерода включительно.

Используемый термин «биодоступный» означает степень, до которой лекарство абсорбируется в живом организме и становится доступным в циркулирующей крови живого организма. Методы определения биодоступности лекарств хорошо известны специалистам в данной области.

Используемое выражение «биодоступный в степени, достаточной для получения фармакологического эффекта» означает, что эпотилоны биодоступны более, чем на 20%, предпочтительно более, чем на 30%, и наиболее предпочтительно более, чем на 50%.

Используемый термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли, полученной из эпотилона формулы (Ia) или (Ib), содержащего основную функциональную группу, например, аминную, и фармацевтически приемлемой нетоксической неорганической или органической кислоты. Подходящие нетоксичные кислоты включают, не ограничиваясь этим, уксусную, бензолсульфокислоту, бензойную, камфосульфокислоту, лимонную, этенсульфокислоту, фумаровую, глюконовую, глутаминовую, бромистоводородную, хлористоводородную, изэтионовую, молочную, малеиновую, малевую, манделовую, метансульфокислоту, муковую, азотную, памовую, пантотеновую, фосфорную, янтарную, серную, винную, п-толуолсульфокислоту. Соли, образованные с кислотами, могут быть получены, например, из эпотилона формулы (Ia) или (Ib), содержащего основную функциональную группу, и эквивалентного количества нетоксичной кислоты с получением соли присоединения. Реакцию обычно проводят в среде, в которой соль присоединения осаждается, или в водной среде с последующим выпариванием. Термин «фармацевтически приемлемая соль» также относится к соли, полученной из эпотилона формулы (Ia) или (Ib), содержащей кислую функциональную группу, например, карбоксильную функциональную группу, и фармацевтически приемлемого нетоксичного неорганического или органического основания. Подходящие нетоксичные основания включают гидроокиси щелочных металлов, таких как натрий, калий, литий; гидроокиси щелочно-земельных металлов, например, кальция и магния; гидроокиси других металлов, таких как алюминий и цинк; аммиак и органические амины, такие как незамещенные или гидрокси-замещенные моно-, ди- или триалкиламины; дициклогексиламин, трибутиламин, пиридин, N-метил-N-этиламин, диэтиламин, триэтиламин, моно-, бис- или трис-(2-гидрокси-низший алкиламины), такие как моно-, бис- или трис-(2-гидрокси-этил)амин, 2-гидрокси-трет.бутиламин или трис-(гидроксиметил)метиламин, N,N-ди-низший алкил-N-(гидрокси-низший алкил)амины, такие как N,N-диметил-N-(2-гидроксиэтил)амин или три-(2-гидроксиэтил)амин, N-метил-D-глюкамин, и аминокислоты, такие как аргинин, лизин и т.п. Соли, образованные из оснований, могут быть получены, например, из эпотилона формулы (Ia) или (Ib), содержащего кислую функциональную группу, и эквивалентного количества нетоксичного основания. Реакцию обычно проводят в среде, в которой происходит осаждение соли, или в водной среде с последующим выпариванием.

Данное изобретение включает также цвиттерионы.

Используемый термин «фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту» относится к комбинации фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоты и фармацевтически приемлемой нетоксичной соли кислоты, которые при добавлении к раствору обеспечивают получение раствора, более устойчивого к изменению рН, по сравнению с раствором, не содержащим буфер, когда кислота или щелочь добавляются к раствору. Термин «фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту» включает также соединения, такие как основные соединения, которые при добавлении к кислому раствору нейтрализуют кислоту и повышают рН раствора.

Используемый термин «клатрат» означает соединение включения, образованное при включении молекулы «гостевого» соединения в клеткообразное полое пространство, полученное из комбинации нескольких молекул «гостевого» соединения.

Используемый термин «пролекарство» означает производное соединение, которое может гидролизоваться, окисляться и претерпевать другое изменение в биологических условиях (in vitro или in vivo) с получением эпотилонового соединения формулы (Ia) или (Ib). Например, эфиры карбоновых кислот обычно образуются путем этерификации функциональных групп карбоновой кислоты; если эпотилон формулы (Ia) или (Ib) включает кислую функциональную группу, она может быть этерифицирована с получением пролекарства. Из уровня техники хорошо известны различные пролекарства (см., например, Design of Prodrugs, edited by H.Bundgaard, Elsevier, 1985; Methods in Enzymology, vol.42, p.309-396, edited by K.Widder et al., Academic Press, 1985; A Texbook of Drug Design and Development, edited by Krosgaard-Larsen and H.Bundgaard, chapter 5 «Design and Application of Prodrugs», by H.Bundgaard, p.113-191, 1991; H.Bundgaard, «Advanced Drug Delivery Reviews», 8, 1-38, 1992; H.Bundgaard et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285,1988 и N.Kakeya et al., Chem. Phar. Bull., 32, 692, 1984).

Используемое выражение «емкость по нейтрализации кислоты» означает количество 1N HCl (выраженное в м-экв), которое обеспечивает рН, равный 3,5, как указано в US Pharmacopeia, 301.

Используемый термин «раствор» означает жидкий препарат, который содержит один или несколько растворимых активных ингредиентов, растворенных в растворителе.

Используемый термин «суспензия» означает мелкодисперсную суспензию активного ингредиента в растворителе.

Термин «эликсир» означает раствор активного ингредиента в растворителе, содержащем воду и спирт.

Термин «сироп» означает концентрированный раствор сахара, например, сахарина, в воде или другой водной жидкости, возможно содержащей полиолы, такие как глицерин или сорбит, для замедления кристаллизации сахара или для увеличения растворимости добавленных ингредиентов.

Эпотилоны, используемые в способах, композициях и дозированных формах по изобретению.

В способах, композициях и дозированных формах по изобретению может быть использован любой эпотилон. Предпочтительными являются эпотилоны, не стабильные в кислой среде и слабо растворимые в воде, которые не слишком биодоступны при пероральном введении. Согласно конкретному варианту в способах, композициях и дозированных формах по изобретению используют эпотилоны формулы (Ia) или (Ib). Эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) могут быть получены способами, описанными в нашей заявке US №09/280191, поданной 29 марта 1999 года, и в заявке US № 09/170482, поданной 13 октября 1998 года. Специалисту очевидно, что эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) могут быть также получены модификацией методов, описанных, например, в К.С.Nicolau et al., «An Approach to Epothilones Based on Olefin Metathesis», Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 35(20):2399-2401 (1996); K.C.Nicolau et al., «The Total Synthesis of Epothilone A: The Macrolactonization Approach», Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 36(5): 525-527 (1997); К.С.Nicolau et al., «Designed Epothilones: Combinatorial Synthesis, Tubulin Assembly Proper-ties, and Cytoxic Action Aganist Taxol Resistant Tumor Cells», Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 36(19): 2097-2103 (1997); K.C.Nicolau et al., «The Olefin Metathesis Approach to Epothilone A and its Analogues», J. Am. Chem. Soc., 119(34): 7960-7973 (1997); K.C.Nicolau et al., «Total Synthesis of Epothilones A and В via a Macrolactonization-Based Strategy», J. Am. Chem. Soc., 119(34): 7974-7991 (1997); K.C.Nicolau et al., «Synthesis of Epothilones A and В in Solid and Solution Phase», Nature, 387: 268-272 (1997) и D.Meng et al., «Remote Effects in Macrolide Formation Through Ring-Forming Olefin Metathesis: An Application to the Synthesis of Fully Active Epothilone Congeners», J. Am. Chem. Soc., Vol.119, No.11, 2733-2734 (1997).

Предпочтительно, чтобы эпотилоны были кристаллическими и безводными. Можно перед использованием эпотилонов в композициях по изобретению подвергать их стерилизации.

Полезность и область использования эпотилонов или композиций на их основе.

Эпотилоны по изобретению являются агентами, стабилизирующими микротрубочки, и, следовательно, могут быть использованы для лечения различных раковых заболеваний или других болезней, связанных с патологической пролиферацией клеток. Способы по изобретению особенно пригодны для введения одного или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства эпотилона пациенту, страдающему от рака или других гиперпролиферативных клеточных заболеваний. Используемый термин «рак» включает, без ограничения, твердые опухоли и опухоли, образовавшиеся в крови. Термин «рак» относится к заболеваниям кожи, тканей, органов, кости, хрящей, крови и сосудов. Термин «рак» охватывает первичный и метастазный рак. Примеры раковых заболеваний, которые можно подвергать лечению способами по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, карциному, включая карциному мочевого пузыря, груди, кишечника, почек, печени, легких, яичников, поджелудочной железы, желудка, шеи, щитовидной железы и кожи, включая карциному сквамозных клеток; гемапоетические опухоли лимфоидной системы, включая, но не ограничиваясь этим, лейкемию, острую лимфоцитарную лейкемию, острую лимфобластозную лейкемию, лимфому В-клеток, лимфому Т-клеток, лимфому Ходжкинса, лимфому не-Ходжкинса, лимфому волосатых клеток и лимфому Беркитта; гемапоетические опухоли миелоидной системы, включая, но не ограничиваясь этим, острую и хроническую миелопоэтическую лейкемию и промиелоцитную лейкемию; опухоли мезенхимного происхождения, включая, но не ограничиваясь этим, фибросаркому, рабдомиосаркому и остеосаркому; другие опухоли, включая меланому, семиному, тератокарциному, нейробластому и глиому; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая, но не ограничиваясь этим, астроцитому, нейробластому, глиому и шванномы; и другие опухоли, включая, но не ограничиваясь этим, меланому, ксеродерму пигментную, кератоакантому, семиному, фолликулярный рак щитовидной железы и тератокарциному.

Способы по изобретению пригодны для лечения пациентов, которых ранее лечили от рака, а также тех, кого ранее не лечили от рака. Способы и композиции согласно данному изобретению могут быть использованы при лечении рака первой линии и второй линии.

Способы по изобретению также пригодны для лечения в комбинации с известными способами лечения рака, включая облучение. Способы по изобретению особенно пригодны в сочетании с известными методами лечения рака, которые включают введение второго лекарства, которое действует в другой фазе клеточного цикла, например, S-фазе, в то время как эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) проявляют действие в G₂-М-фазе.

Эпотилоны формул (Ia) и (Ib), указанных выше, ингибируют также ангиогенез, влияя таким образом на патологическую пролиферацию клеток. Следовательно, методы по изобретению могут быть полезны также при лечении некоторых форм слепоты, связанных с ретинальной васкуляризацией, артрита, особенно воспалительного, рассеянного склероза, рестеноза и псориаза.

Эпотилоны формул (Ia) и (Ib) индуцируют или ингибируют апоптоз, физиологический процесс гибели клеток, критический для нормального развития и гомеостаза. Изменения апоптозных путей влияют на патогенез различных заболеваний у людей. Способы по изобретению могут быть полезны при лечении различных заболеваний у людей с аберрациями апоптоза, включая рак (особенно, не ограничиваясь этим, фолликулярных лимфом, карцином с мутациями р53, гормонзависимых опухолей груди, простаты и яичников и предраковых поражений, таких как семейный аденоматозный полипоз), вирусных инфекций (включающих, не ограничиваясь этим, вирус герпеса, покс-вирус, вирус Эпштейна-Барра, вирус Синдбиса и аденовирус); аутоиммунных заболеваний (включающих, не ограничиваясь этим, системную волчанку, опосредованный иммунной системой гломерулонефрит, ревматоидный артрит, псориаз, воспаление кишечника и аутоиммунный сахарный диабет); нейродегенеративных заболеваний (включающих, не ограничиваясь этим, болезнь Альцгеймера, связанную со СПИД'ом, деменцию, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, пигментный ретинит, мышечную атрофию спинного мозга и церебральную дегенерацию), СПИД'а, миелодиспластических синдромов, апластической анемии, ишемических повреждений, связанных с инфарктами миокарда, удара, повреждений при реперфузии, аритмии, атеросклероза, заболеваний печени, вызванных токсинами или алкоголем, гематологических заболеваний (включающих, но не ограничивающихся этим, хроническую анемию и апластическую анемию), дегенеративных заболеваний скелетно-мышечной системы (включающих, но не ограничивающихся этим, остеопороз и артрит), риносинусита, чувствительного к аспирину, муковисцидоза, рассеянного склероза, заболеваний почек и боли при раковых заболеваниях.

Эпотилоны формул (Ia) и (Ib) могут содержаться в препарате или вводиться вместе с другими терапевтическими агентами, которые выбираны вследствие их особой полезности в терапии указанных заболеваний. Например, каждое из соединений формул (Ia) и (Ib) может сочетаться с агентами для предотвращения тошноты, гиперчувствительности и раздражения желудочного тракта, такими как противорвотные средства, H₁ и Н₂ антигистаминные соединения. Вышеуказанные терапевтические агенты при использовании в комбинации с соединением формулы (Ia) или (Ib) могут применяться в количествах, указанных в Physicians' Desk Reference (PDR) или же определяемых специалистами в данной области.

Буферы, используемые в способах, композициях и дозированных формах по изобретению.

Цель добавления буфера в способах по изобретению состоит во временной нейтрализации жидкости в желудке и уменьшении степени разложения эпотилона в желудке у пациента. Кроме того, в водных и частично водных жидких оральных составах, содержащих один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство эпотилона, буфер снижает разложение эпотилона формулы (Ia) или (Ib). Заявители неожиданно обнаружили, что жидкие оральные дозированные формы, содержащие один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство эпотилона и буфер, более стабильны, чем жидкая оральная дозированная форма без буфера.

Буферы, используемые в способах, композициях и дозированных формах по изобретению, могут быть легко получены при соединении одной или более кислот и соли одной или более кислот в таком соотношении, чтобы при растворении в водной среде получался раствор, имеющий рН между примерно 5 и 9. Обычно одна или несколько кислот имеют рКа, равную примерно от 4 до 10. Специалисту в данной области известно, как приготовить буферы, обеспечивающие получение раствора с желательной величиной рН. Кроме того, изобретение предусматривает применение в качестве буферных соединений основных веществ, которые при добавлении к кислому раствору приводят к увеличению рН раствора.

Специалистам известны различные буферы, которые могут быть использованы в способах, композициях и дозированных формах по изобретению. Обычные буферы включают, но не ограничиваются этим, фармацевтически приемлемые слабые кислоты, слабые основания или их смеси. Компонентами буфера, предпочтительно, являются водорастворимые вещества, например, фосфорная кислота, винные кислоты, молочная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, уксусная кислота, аскорбиновая кислота, аспартовая кислота, глутаминовая кислота и их соли. Предпочтительно, фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, представляет собой двухосновный фосфат - одноосновный фосфат или двухосновный фосфат - лимонная кислота - цитрат. Эти буферы являются коммерчески доступными или могут быть легко приготовлены специалистом с использованием коммерчески доступных буферных агентов, таких как указанные выше.

Способы перорального введения нестабильных в кислой среде эпотилонов формулы (Ia) или (Ib).

Данное изобретение охватывает способы повышения биодоступности перорально введенных эпотилонов путем перорального введения эпотилона формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства эпотилона, и перорального введения фармацевтически приемлемого буфера, нейтрализующего кислоту. Изобретение особенно хорошо применимо для эпотилонов, которые не устойчивы в кислой среде, но может быть также использовано для эпотилонов, чувствительных к гидролизу в щелочных условиях, и для эпотилонов, не чувствительных к гидролизу. Кроме того, согласно данному изобретению можно применять эпотилоны, которые слабо растворимы в водной среде.

Следует иметь в виду, что эпотилоны по изобретению могут вводиться парентерально, что позволит избежать прохождения через желудочно-кишечную систему и преодолеть проблемы с биодоступностью. Однако такой метод введения является неудобным и некомфортным для пациента и приводит к другим возможным неблагоприятным эффектам. Композиции и способы по изобретению обеспечивают оральный путь введения, который имеет значительные преимущества, особенно, при лечении людей.

Введение одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства этого эпотилона в сочетании с фармацевтически приемлемым буфером, нейтрализующим кислоту, обеспечивает повышенную биодоступность одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib). Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что повышенная биодоступность обусловлена, по меньшей мере в значительной степени, наличием буфера, снижающего скорость разложения эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства этого эпотилона в кислой среде в желудке. Некоторые эпотилоны, включая предпочтительный эпотилон, соединение (А), не стабильны в кислой водной среде и разлагаются, преимущественно в процессе гидролизуемого кислотой гидролитического раскрытия эпоксидного кольца. Например, время, в течение которого теряется 5% лекарства (t₉₅) при 37°С в водном растворе Соединения (А), равно примерно 38 минут при рН 7,4 и только 0,2 минуты при рН 2,5. Таким образом, когда эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона вводятся перорально, они разлагаются в желудке пациента таким образом, что они или абсорбируются в минимальной степени, или не абсорбируются в желудочно-кишечном тракте. Когда один или несколько эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона вводятся пациенту в сочетании с фармацевтически приемлемым буфером, нейтрализующим кислоту, буфер нейтрализует кислоту в желудке пациента и скорость разложения одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства этого эпотилона значительно уменьшается, поэтому один или несколько эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона остаются в желудочно-кишечном тракте в течение промежутка времени, достаточного для абсорбции.

Согласно другому варианту изобретения для нейтрализации кислоты в желудке до или после введения эпотилона могут быть добавлены антациды, такие как гидроокиси алюминия и магния, карбонаты, такие как карбонат натрия и карбонат кальция, силикаты и фосфаты.

При пероральном введении согласно способам по изобретению эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона имеют биодоступность, равную, по меньшей мере, около 20%, предпочтительно, по меньшей мере, около 40% и, более предпочтительно, около 50%.

Согласно одному варианту один или несколько эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона и фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, содержатся в виде одной оральной дозы и вводятся одновременно. Эта композиция, содержащая сочетание одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства этого эпотилона и фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, может быть введена в виде твердой оральной дозированной формы (например, таблетки, капсулы или порошка) или в виде жидкой оральной дозированной формы (например, раствора, суспензии или эликсира). Раствор или суспензия могут быть приготовлены перед самым введением при помощи обычных растворителей или сорастворителей для растворения эпотилона и компонентов буфера.

Например, один или несколько эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона и фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, могут вводиться одновременно в виде раствора эпотилона формулы (Ia) или (Ib), растворенного в жидкости, содержащей пропиленгликоль:этанол: фосфатный буфер (например, 1М, рН примерно 8) в соотношении 58:12:30, соответственно.

Согласно другому варианту эпотилон формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона и фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, содержатся в виде отдельных фармацевтических композиций и вводятся по отдельности. Каждая из композиций вводится в виде твердой оральной дозированной формы или в виде жидкой оральной дозированной формы.

Когда один или несколько эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство этого эпотилона и фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, вводятся по отдельности, фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер может быть введен перорально до, после или до и после введения желаемого элотилона формулы (Ia) или (Ib). Предпочтительно, фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер вводить и до, и после перорального введения нужного эпотилона формулы (Ia) или (Ib) в количестве, достаточном для нейтрализации кислоты в желудке. Когда фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер вводят до введения одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства такого эпотилона, его вводят примерно за 5 часов, предпочтительно, примерно за 3 часа, более предпочтительно, примерно за 1 час и, наиболее предпочтительно, примерно за 10 минут до введения нужного эпотилона формулы (Ia) или (Ib). Когда фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер вводится после эпотилона формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства такого эпотилона, он вводится примерно через 5 часов, предпочтительно, примерно через 3 часа, более предпочтительно, примерно через 1 час и, наиболее предпочтительно, примерно через 10 минут после введения эпотилона формулы (Ia) или (Ib).

Согласно еще одному варианту изобретения эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемую соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство такого эпотилона вводят в виде пилюли или капсулы с энтеропокрытием, чтобы замедлить высвобождение эпотилона до тех пор, пока не будет введен фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер. Таблетки и капсулы представляют собой препаративные формы с нанесенными на них веществами, стойкими к желудочному соку, но разрушающимися в среде интестина.

Согласно другому варианту буфер вводят в виде диспергируемой таблетки.

Величина терапевтической дозы желательного эпотилона формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства такого эпотилона зависит от вида конкретного заболевания и его серьезности. Доза и, возможно, частота дозирования зависят также от возраста, веса тела, реакции и предыдущего лечения пациента. Подходящие схемы дозировки могут быть легко подобраны специалистом в данной области с учетом указанных факторов. Обычно эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемую соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство такого эпотилона вводят перорально в общем количестве примерно 0,05-200 мг/кг/день, предпочтительно, от примерно 5 до примерно 100 мг/кг/день и, более предпочтительно, менее, чем примерно 100 мг/кг/день в виде одной дозы или в виде 2-4 раздельных доз.

Данное изобретение охватывает фармацевтические единичные дозированные формы желательного эпотилона, включающие 5 мг/ед, 10 мг/ед, 15 мг/ед, 20 мг/ед, 25 мг/ед, 50 мг/ед и 100 мг/ед. Жидкие единичные дозы, охватываемые изобретением, включают, но не ограничиваются этим, 2,5 мг/мл и 10 мг/мл.

Термин «общее количество», используемый в данном описании, означает общее количество эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства такого эпотилона, если в единичной дозированной форме содержится не один эпотилон формулы (Ia) или (Ib), или не одна фармацевтически приемлемая соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство таких эпотилонов, или пациенту вводится не одно такое вещество.

Далее, фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер вводится в количестве, достаточном для доставки, по меньшей мере около 20 мэкв дозы, необходимой для нейтрализации кислоты, предпочтительно, по меньшей мере, около 30 мэкв, более предпочтительно, по меньшей мере, около 40 мэкв и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, около 50 мэкв.

Данное изобретение также охватывает фармацевтические дозированные формы желательного буфера, содержащие примерно от 5 до 100 мг/ед, предпочтительно, около 22,5 мг/ед и, более предпочтительно, около 22,5 мг/ед. Жидкие дозированные формы буфера, охватываемые данным изобретением, включают примерно от 5 мг/ед до 100 мг/ед, предпочтительно, около 22,5 мг/ед и, более предпочтительно, около 22,5 мг/ед, растворенных примерно в 50-300 мл растворителя, предпочтительно, примерно в 100-200 мл растворителя и, более предпочтительно, примерно в 150 мл растворителя.

Обычно фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер вводят в виде водного раствора с рН в интервале от примерно 5 до 9, предпочтительно, от примерно 6 до 8,5 и, более предпочтительно, примерно 5-8. Любой фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер, обеспечивающий получение раствора, имеющего рН в желаемом интервале, может быть использован в способах по изобретению. Предпочтительно, фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер представляет собой буфер: двухосновный фосфат - одноосновный фосфат, или буфер: двухосновный фосфат - лимонная кислота - цитрат.

Согласно одному варианту пациенту сначала вводят фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер в виде примерно 150 мл водного раствора, содержащего безводный двухосновный фосфат натрия (примерно, 0,2 М), дигидрат цитрата натрия (примерно, 0,07 М) и безводную лимонную кислоту (примерно, 0,08 М) при рН около 7,4 с последующим введением перорально одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства такого эпотилона в виде жидкой дозированной формы в среде пропиленгликоль:этанол в соотношении 80:20 и с последующим пероральным введением еще примерно 150 мл водного раствора, содержащего безводный двухосновный фосфат натрия (около 0,2 М), дигидрат цитрата натрия (около 0,07 М) и безводную лимонную кислоту (около 0,08 М) при рН около 7,4.

Композиции, единичные дозированные формы и наборы.

Данное изобретение относится также к наборам, содержащим первый компонент, представляющий собой один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемую соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство таких эпотилонов, и второй компонент, представляющий собой фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер. Первый компонент и второй компонент содержатся в виде отдельных фармацевтических композиций, которые будут вводиться по отдельности. Первый и второй компоненты находятся в виде фармацевтически дозированной формы, подходящей для перорального введения, или в виде твердой фармацевтической композиции, которая может быть воссоздана или восстановлена при помощи жидкости с получением жидкой оральной дозированной формы. Предпочтительно, эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) упакованы во флаконы, защищенные от света.

Фармацевтические композиции и дозированные формы, пригодные для перорального введения, могут находиться в виде дискретных дозированных форм, таких как (без ограничения) таблетки (например, жевательные таблетки), каплеты, капсулы, порошки в саше, таблетки с энтеропокрытием, гранулы с энтеропокрытием, мягкие капсулы с энтеропокрытием, и жидкости (например, ароматизированные сиропы). Такие дозированные формы содержат заданные количества активного ингредиента и могут быть получены способами, хорошо известными фармацевтам (см. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th ed., Mack Publishing, Easton, PA (1990)).

Типичные оральные формы готовят, соединяя активные ингредиенты при тщательном перемешивании с, по меньшей мере, одним эксципиентом обычными методами. Эксципиенты могут быть в самых разнообразных формах в зависимости от вида препарата, который хотят ввести. Например, эксципиенты, подходящие для применения в твердых оральных дозированных формах (например, порошках, таблетках, капсулах и каплетах), включают, но не ограничиваются этим, крахмалы, сахара, микрокристаллическую целлюлозу, разбавители, гранулирующие агенты, смазки, связующие и агенты для дезинтеграции. Примеры эксципиентов, находящих применение в оральных жидких дозированных формах, включают, но не ограничиваются этим, воду, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, стабилизаторы и красители.

Таблетки и капсулы представляют собой удобные фармацевтические композиции и оральные дозированные формы, в которых используются твердые эксципиенты. Если это желательно, таблетки могут содержать покрытие, нанесенное стандартными водными и неводными методами. Такие дозированные формы могут быть приготовлены любыми известными в фармацевтике методами. В общем фармацевтические композиции и дозированные формы получают путем равномерного и тщательного перемешивания активных ингредиентов с жидкими носителями, тонкодисперсными твердыми носителями, или с теми и с другими и последующего формования полученного продукта с получением желательного препарата, если это необходимо.

Например, таблетка может быть изготовлена прессованием или формованием. Прессованные таблетки могут быть изготовлены путем прессования в подходящем устройстве активных ингредиентов в свободно-текучем состоянии, например, в виде порошка или гранул, возможно, в смеси с эксципиентом. Формованные таблетки могут быть получены формованием в подходящем устройстве смеси порошковых соединений, увлажненных инертным жидким разбавителем.

Примеры эксципиентов, которые могут быть использованы в оральных дозированных формах по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, связующие, наполнители, дезинтегрирующие добавки и смазки. Связующие, подходящие для фармацевтических композиций и дозированных форм, включают, но не ограничиваются этим, кукурузный крахмал, картофельный крахмал или другие крахмалы, желатин, природные и синтетические смолы, например, смолу акации, альгинат натрия, альгиновую кислоту, другие альгинаты, порошковый трагакант, гуаровую смолу, целлюлозу и ее производные (например, этилцеллюлозу, ацетат целлюлозы, кальциевую соль карбоксиметилцеллюлозы, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, предварительно желатинизированный крахмал, гидроксипропилметилцеллюлозу (например, №№2208, 2906, 2910), микрокристаллическую целлюлозу и их смеси.

Подходящие виды микрокристаллической целлюлозы включают, но не ограничиваются этим, продукты, продаваемые под названиями AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103, AVICEL-RC-581, AVICEL-PH-105 (поставляемые FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) и их смеси. Конкретное связующее представляет собой смесь микрокристаллической целлюлозы и натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, продаваемую под названием AVICEL-RC-581.

Подходящие безводные или содержащие небольшое количество влаги эксципиенты или добавки включают AVICEL-PH-103™ и Starch 1500 LM.

Примеры наполнителей, подходящих для применения в фармацевтических композициях и дозированных формах, описанных в данной заявке, включают, но не ограничиваются этим, тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическую целлюлозу, порошковую целлюлозу, декстраты, каолин, маннит, кремниевую кислоту, сорбит, крахмал, предварительно желатинизированный крахмал и их смеси. Связующее или наполнитель в фармацевтических композициях и дозированных формах по изобретению обычно содержится в количестве от примерно 50 до примерно 99 вес.% в расчете на фармацевтическую композицию или дозированную форму.

Дезинтегрирующие агенты используются в фармацевтических композициях и дозированных формах по изобретению для получения таблеток, которые распадаются в водной среде. Таблетки, содержащие слишком много такого агента, могут разрушаться при хранении, а те, которые содержат слишком мало этого агента, могут не разрушаться с желательной скоростью и в желательных условиях. Следовательно, должно быть достаточное количество дезинтегрирующего агента, ни слишком большое, ни слишком маленькое, чтобы не изменять высвобождение активного ингредиента, в отрицательную сторону при получении фармацевтических композиций и твердых оральных дозированных форм по изобретению.

Количество используемого дезинтегрирующего агента изменяется в зависимости от типа препарата и легко устанавливается специалистом. Типичные фармацевтические композиции и дозированные формы включают от примерно 0,5 вес.% до примерно 15 вес.% дезинтегрирующего агента, предпочтительно, от примерно 1 вес.% до примерно 5 вес.% дезинтегрирующего агента.

Дезинтегрирующие агенты, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях и дозированных формах по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, агар-агар, альгиновую кислоту, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, натриевую соль кроскармелозы, кросповидон, полакрилин калия, натриевую соль гликолята крахмала, картофельный крахмал или крахмал тапиоки, другие крахмалы, предварительно желатинизированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгины, другие целлюлозы, смолы и их смеси.

Смазки, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях и дозированных формах по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, светлое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, полиэтиленгликоль, другие гликоли, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрированное растительное масло (например, арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, сезамовое масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллаурат, агар и их смеси. Кроме того, смазки включают, например, силоидный силикагель (AEROSIL 200, производимый W.R.Grace Co. of Baltimore, MD), коагулированный аэрозоль синтетической двуокиси кремния (выпускаемый Degussa Co. of Piano, TX), CAB-O-SIL (пирогенная двуокись кремния, продаваемая Cabot Co., Boston, MA) и их смеси. Если смазки используются, они обычно вводятся в количестве менее примерно 1 вес.% в расчете на фармацевтическую композицию или дозированные формы, в которые они вводятся.

Фармацевтические композиции и дозированные формы могут также содержать одно или несколько соединений, которые снижают скорость разложения активного ингредиента. Такие соединения, называемые в данном описании «стабилизаторами», включают, но не ограничиваются этим, антиоксиданты, например, аскорбиновую кислоту, и солевые буферы.

Другая удобная оральная дозированная форма представляет собой растворы для перорального введения, получаемые при использовании растворителей. Жидкие оральные дозированные формы получают при добавлении активного ингредиента в подходящий растворитель с получением раствора, суспензии, сиропа или эликсира активного вещества в жидкости.

Растворы, суспензии, сиропы и эликсиры могут также содержать другие добавки, включая, но не ограничиваясь этим, глицерин, сорбит, пропиленгликоль, сахара, ароматизаторы и стабилизаторы.

Наборы по изобретению могут включать первый и/или второй компоненты в виде уже готовых жидких оральных дозированных форм, готовых для введения, или же могут включать первый и/или второй компоненты в виде твердой фармацевтической композиции, которая может быть восстановлена при помощи растворителя с получением жидкой оральной дозированной формы. Когда набор включает первый и/или второй компоненты в виде твердой фармацевтической композиции, которая может быть восстановлена при помощи растворителя с получением жидкой оральной дозированной формы, набор может также включать растворитель для восстановления.

Растворитель для воссоздания или восстановления соединяется с активным ингредиентом с получением жидкой оральной дозированной формы активного ингредиента. Предпочтительно, чтобы активный ингредиент растворялся в растворителе и образовывал раствор. Растворитель может быть водой, неводной жидкостью или комбинацией неводного компонента и водного компонента. Подходящие неводные компоненты включают, но не ограничиваются этим, масла, спирты, такие как этанол, глицерин и гликоли, такие как полиэтиленгликоль и пропиленгликоль.

Фармацевтически приемлемые нейтрализующие кислоту буферы по изобретению предпочтительно являются водорастворимыми. Соответственно, предпочтительным растворителем для фармацевтически приемлемых нейтрализующих кислоту буферов является вода или системы на основе воды, включая солевые растворы или растворы декстрозы.

Эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) или фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство таких эпотилонов относительно нерастворимы в воде. Соответственно, для эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства предпочтительно применять неводные жидкости или жидкости, представляющие собой комбинацию смешивающегося водного компонента и неводного компонента, при этом наиболее предпочтительны неводные жидкости.

Предпочтительной неводной жидкостью для эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства является поверхностно-активное вещество, такое как пропиленгликоль и этанол, предпочтительно, в соотношении примерно 20:80. Подходящие неводные жидкости или сурфактанты включают, но не ограничиваются этим, полиэтиленгликоль, полисорбаты, пропиленгликоль, эфиры глицерина, Cremophor, эфиры жирных кислот и спирты, полиоксиэтилен и сложные и простые эфиры алифатических спиртов.

Когда растворитель для эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства включает водный компонент, предпочтительно, чтобы водный компонент содержал буфер для уменьшения распада эпотилона формулы (Ia) или (Ib). Жидкие оральные дозированные формы, содержащие один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство в водном или частично водном растворителе, обеспечивают жидкие оральные дозированные формы, которые более стабильны, чем жидкая оральная дозированная форма без буфера. Конкретно, было установлено, что скорость разложения эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства в жидкой оральной композиции, содержащей буфер, ниже, чем скорость разложения в жидкой оральной композиции без буфера. Не ограничиваясь какой-либо теорией, можно считать, что эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство являются нестабильными в кислой и основной среде, вероятно, в результате катализируемого кислотой или основанием раскрытия эпоксидного кольца. Однако, добавляя в жидкий оральный состав буфер, можно поддерживать рН жидкого орального состава при такой величине, что скорость разложения эпотилона формулы (Ia) или (Ib) становится достаточно низкой и эпотилоны формулы (Ia) или (Ib) не разлагаются перед введением пациенту. Водные или частично водные жидкие оральные дозированные формы содержат буфер в количестве, обеспечивающем рН в интервале от примерно 5 до 9, предпочтительно, примерно 6-8,5 и, более предпочтительно, примерно 7-8.

Когда активный ингредиент содержится в твердой фармацевтической композиции, которая воссоздается или восстанавливается при помощи растворителя с получением жидкой оральной дозированной формы, она обычно бывает в порошковой форме и восстанавливается при помощи жидкости незадолго до введения пациенту. Порошковая фармацевтическая композиция может быть упакована, например, во флакон, в который добавляется растворитель. Содержимое флакона может быть также добавлено к растворителю в отдельном контейнере. Порошковый активный ингредиент по изобретению может быть также упакован в саше, например, в пакетик из фольги, который можно открыть и добавить содержимое к растворителю. Порошковый активный ингредиент может быть переработан в таблетку, которая растворяется при добавлении к растворителю. Часто для облегчения растворения таблетки она содержит дезинтегрирующую добавку.

Данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим один или несколько эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство в твердом виде и твердый фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер в количестве, достаточном для уменьшения разложения одного или нескольких эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства, когда фармацевтическая композиция восстанавливается при помощи жидкости с получением жидкой оральной дозированной формы.

Кроме получения более стабильной жидкой оральной дозированной формы, фармацевтические композиции по изобретению также обеспечивают получение жидкой оральной дозированной формы, в которой эпотилон более доступен при пероральном введении пациенту. Соответственно, данное изобретение относится также к жидкой оральной дозированной форме, содержащей один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство и твердый фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер, растворенный или диспергированный в растворителе. Предпочтительно, чтобы один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство и твердый фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер были растворены в жидкости с получением раствора.

Предпочтительно, чтобы буфер содержался в фармацевтической композиции в таком количестве, чтобы получался жидкий оральный состав, имеющий рН в интервале от примерно 5 до 9, предпочтительно, примерно 6-8,5 и, более предпочтительно, примерно 7-8. Обычно фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер содержится в количестве, достаточном для доставки, по меньшей мере, около 20 мэкв величины емкости по нейтрализации кислоты, предпочтительно, по меньшей мере, около 30 мэкв, более предпочтительно, по меньшей мере, около 40 мэкв и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, около 50 мэкв этой величины при воссоздании при помощи жидкости с получением жидкой оральной дозированной формы. В композиции по изобретению может быть использован любой фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер, который может обеспечить величину рН в указанном интервале. Предпочтительно, чтобы фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер являлся системой двухосновный фосфат - одноосновный фосфат или буфером двухосновный фосфат - лимонная кислота - цитрат.

Обычно фармацевтические композиции содержат один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство в общем количестве от примерно 0,05 до примерно 200 мг, предпочтительно, от примерно 5 до примерно 100 мг и, более предпочтительно, примерно 10-50 мг.

Данное изобретение относится к набору, включающему фармацевтическую композицию, содержащую (i) комбинацию одного или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства в твердом виде и твердого фармацевтически приемлемого нейтрализующего кислоту буфера, и (ii) растворитель для воссоздания фармацевтической композиции и жидкой оральной дозированной формы, причем фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер содержится в количестве, достаточном для уменьшения разложения одного или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства, когда комбинация воссоздается при помощи растворителя для получения жидкой оральной дозированной формы.

Растворитель при воссоздании композиции соединяют с активным ингредиентом для получения жидкой оральной дозированной формы активного ингредиента. Жидкая оральная дозированная форма может быть раствором или суспензией. Предпочтительно, чтобы активный компонент растворялся в растворителе и образовывал раствор. Растворитель может быть водой, неводной жидкостью или жидкостью, представляющей собой комбинацию неводного компонента и водного компонента. Подходящие неводные компоненты включают, но не ограничиваются этим, масла, спирты, например, этанол, глицерин и гликоли, например, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль. Подходящим растворителем для применения в наборе по изобретению является система пропиленгликоль:этанол:фосфатный буфер (1М, рН 8) в соотношении 58:12:30.

Растворитель может также содержать одну или несколько добавок, таких как, без ограничения, глицерин, сорбит, пропиленгликоль, ароматизаторы и стабилизаторы для улучшения проглатывания жидкой оральной дозированной формы.

Данное изобретение охватывает также безводные фармацевтические композиции и дозированные формы, содержащие активные ингредиенты, а именно, один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство и/или фармацевтически приемлемый нейтрализующий кислоту буфер. Безводные фармацевтические композиции и дозированные формы предпочтительны, так как вода может способствовать разложению некоторых соединений. Например, добавление воды (например, 5%) широко распространено в области фармацевтики в качестве средства, имитирующего длительное хранение, чтобы определить некоторые свойства, например, жизнеспособность или стабильность составов во времени (см., например, Jens Т. Carstensen, Drug Stability: Principles and Practice, 2d. Ed., Marcel Dekker, NY, NY, 1995, p.p.379-80). Действительно, вода и нагревание ускоряют разложение некоторых соединений. Таким образом, действие воды на состав может иметь большое значение, так как влага и/или влажность обычно имеют место во время изготовления, обработки, упаковки, хранения, перевозки и применения препаратов. Безводные фармацевтические композиции и дозированные формы особенно предпочтительны для фармацевтических композиций и дозированных форм, содержащих один или более эпотилонов формулы (Ia) или (Ib) или их фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство, так как эти соединения чувствительны к влаге.

Безводные фармацевтические композиции и дозированные формы должны готовиться и храниться так, чтобы сохранялась их безводная природа. Безводные фармацевтические композиции и дозированные формы по изобретению могут быть приготовлены с использованием безводных ингредиентов или ингредиентов с низким содержанием влаги и в условиях с отсутствием влаги или с небольшой влажностью. Безводные фармацевтические композиции и дозированные формы предпочтительно упаковывать, применяя материалы, способные предохранить от действия воды, которые могут быть включены в подходящие наборы. Примеры подходящих упаковочных материалов включают, но не ограничиваются этим, герметично запечатанную фольгу, пластики, контейнеры для отдельных доз (например, флаконы), блистеры и пластины.

Примеры.

Некоторые варианты изобретения, а также некоторые преимущества изобретения иллюстрируются следующими примерами, не ограничивающими объем изобретения.

Пример 1: Фармакокинетические и фармакодинамические исследования соединения (А) при введении мышам, крысам и собакам.

1.1. Анализ образца.

Образцы плазмы, используемые при фармакокинетических/фармакодинамических исследованиях, анализировали на содержание соединения (А), используя метод LC/MS/MS (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия/масс-спектрометрия) со стандартной кривой в интервале от 5 до 20000 нг/мл (10-40000 нМ) при введении мышам и от 2 до 1000 нг/мл (4-2000 нМ) при введении крысам и собакам. В процессе изучения фармакодинамики концентрации соединения (А) определяли, используя метод LC/MS/MS со стандартной кривой концентрации в интервале от 5 до 20000 нг/мл (10-40000 нМ) в плазме мышей. Метод LC/MS/MS использовали также для определения концентрации соединения (В), продукта разложения соединения (А), образовавшегося в исходном/дозируемом растворе или in vivo в плазме крыс и собак. Соединение (В) имеет следующую структуру:

Образцы анализировали при добавлении внутреннего стандарта к 0,2 мл образца, осаждении ацетоном и последующей экстракции надосадочной жидкости при помощи 1-хлорбутана. Органический слой удаляли и выпаривали досуха. Остаток восстанавливали и вводили в систему LC/MS/MS. В случае плазмы людей проводили хроматографическое разделение в изократическом режиме на колонке YMC ODS-AQ (4,6×50 мм, 3 мм) с мобильной фазой, состоящей из ацетонитрила:0,01М ацетата аммония, рН 5,0 (65:35). В случае плазмы собак хроматографическое разделение осуществляли в изократическом режиме на колонке Zorbax Stable Bond C18 (2,1×150 мм, 5 мм), с температурой 40°С и с мобильной фазой, включающей ацетат аммония, рН 5, и ацетонитрил. В случае плазмы крыс хроматографическое разделение проводили в изократическом режиме на колонке Stable Bond C18 (2,1×150 мм, 5 мм), с температурой 40°С и с мобильной фазой, состоящей из ацетонитрила:0,1М ацетата аммония, рН 5,0 (1:1). Детектирование проводили методом тандемной масс-спектроскопии с электрораспылением. Стандартная кривая с интервалом концентраций от 2 до 500 нг/мл для всех аналитов соответствовала квадратичной модели регрессии.

Соединение (А) и соединение (В) оказались стабильными при комнатной температуре в течение, по меньшей мере, 4 часов в плазме с EDTA (этилендиаминтетрауксусной кислотой) у крыс и собак до проведения аналитического определения и в течение, по меньшей мере 24 часов при 4°С в автообразце после определения и в течение, по меньшей мере 5 недель при -20°С или ниже в плазме крыс и собак во время, по меньшей мере, 3 циклов замораживание-оттаивание. Кроме того, было установлено, что оба анализа стабильны в свежей крови с EDTA у крыс и собак при комнатной температуре в течение, по меньшей мере, 0,5 часа.

1.2 Фармакокинетика у мышей.

Соединение (А) вводили самкам мышей CDF₁ внутривенно (5 мг/кг) и перорально (48 мг/кг). При введении через IV линию соединение (А) растворяли в 20%-ном растворе этанола и вводили в виде болюса. При пероральном введении готовили растворы соединения (А) в смеси 3:7 этанол:фосфатный буфер (0,25 М, рН8,0) и вводили через желудочный зонд. Образцы плазмы для определения концентраций соединения (А) отбирали у 3 разных мышей через 5, 15 и 45 минут после IV дозы и через 15 и 45 минут и через 2, 4 и 6 часов после введения пероральной дозы.

После IV введения системный клиренс или общий клиренс организма (CLT) для соединения (А) составлял 68 мл/мин/кг и соответствовал 76% от кровотока в печени (90 мл/мин/кг), а устойчивый объем распределения (VSS), равный 6,3 л/кг, свидетельствовал об интенсивном внесосудистом распределении, так как общее содержание воды в организме мыши равен примерно 0,7 л/кг (см. В.Davies and T.Morris, Physiological Parameters in Laboratory Animals and Humans», Pharmaceutical Research, 1993, 10(7), 1093-1095). Конечный полупериод выведения (T-HALF) соответствовал приблизительно 3 час.

После перорального введения соединения (А) пиковая плазменная концентрация СМАХ равнялась 5983 нг/мл, а время для достижения СМАХ (ТМАХ) составляло 0,25 часа после введения, что предполагает быструю абсорбцию соединения (А). Абсолютная оральная биодоступность соединения (А) составляла 31%.

1.3 Фармакокинетика у крыс.

Соединение (А) вводили внутриартериально один раз (2 мг/кг, инфузия 10 мин), перорально (8 мг/кг) и внутридуоденально (8 мг/кг) натощак самцам крыс Spraque Dawley (n=3-6 в группе). Все дозируемые растворы готовили в 20%-ном этаноле. Образцы плазмы отбирали в течение 24 часов после введения дозы и определяли методом LC/MS/MS концентрацию соединения (А). После внутриартериального введения профили зависимости концентрации от времени имеют двухфазный характер с быстрым падением в течение 2 часов после введения дозы и замедленной конечной фазой. CLT (средняя величина = 56 мл/мин/кг) соединения (А) составляло 100% от величины кроветока в печени (56 мл/мин/кг) и VSS (средняя величина = 23 л/кг) предполагала обширное внесосудистое распределение, так как общее содержащие воды в организме крыс составляет 0,7 л/кг (см. В.Davies and T.Morris, Physiological Parameters in Laboratory Animals and Humans», Pharmaceutical Research, 1993, 10(7), 1093-1095). Средняя величина T-HALF равна 9,6 час.

После перорального и внутридуоденального введения, средние величины СМАХ составляли 228 и 642 нг/мл, соответственно, величины ТМАХ равнялись 0,17 ч и 0,08 ч, соответственно, что предполагает быструю абсорбцию соединения (А). Абсолютная оральная биодоступность соединения (А) после перорального и внутридуоденального введения крысе составляла 7,5% и 27%, соответственно.

В другом исследовании крысам Spraque Dawley (n=2 на группу), содержащим в желчных протоках канюли, вводили один раз внутриартериально (10 мг/кг) или перорально (20 мг/кг) соединение (А) и отбирали образцы желчи, мочи и плазмы через 9 часов после дозирования. Наблюдалось незначительное выделение не распавшегося соединения (А) в желчи (С 1% от величины дозы). В моче было определено заметное количество соединения (А), но нельзя было определить количественно концентрацию вследствие нестабильности соединения (А) в моче. В моче и плазме были экспериментально обнаружены соединения, являющиеся производными лекарств, при помощи LC/MS/MS, они включали изомер (М+O) и продукт гидролиза (М+18). Кроме того, в плазме был обнаружен метаболит (М-2).

1.4. Фармакокинетика в случае собак.

Самцам биглей (n=3) вводили 0,5 мг/кг соединения (А) (10%-ный раствор в этаноле) методом IV инфузии. В течение 32 часов после введения дозы отбирали образцы плазмы для определения концентрации соединения (А). Кривая концентрация в плазме - время характеризовалась многофазным профилем с быстрым первоначальным падением величины концентрации в течение 2 часов после введения и медленной конечной фазой выведения. CLT (средняя величина 17,3 мл/мин/кг) соединения (А) составляла примерно 56% от величины кроветока в печени (30,9 мл/мин/кг) и средняя величина VSS, равная 25,2 л/кг, позволяла предположить, что имело место обширное внесосудистое распределение (на основе общего веса воды в организме собаки, составляющего 0,6 л/кг). Было рассчитано, что величина T-HALF равнялась примерно 24 час.

Кинетику распределения соединения (А) изучали также в процессе исследования токсикологии в результате введения единичной IV дозы. Соединение (А) вводили методом IV инфузии (около 15 минут) дозами 0,5 и 5 мг/кг двум собакам. Дозируемые растворы соединения (А) готовили в среде, содержащей 40% пропиленгликоля, 5% Cremofor EL®, 5% этанола и 50% фосфатного буфера (50 мМ, рН 7,4) за день до введения. Образцы крови отбирали в течение 48 часов после введения и определяли плазменные концентрации соединения (А) и соединения (В) методом LC/MS/MS при стандартном интервале на кривой, составляющем 2-500 нг/мл для обоих аналитов. Для доз 0,5 и 5 мг/кг соединения (А) средние значения СМАХ соединения (А), полученные на основе гендерного подхода, составляли 218 и 5118 нг/мл, соответственно, и средние величины AUC равнялись 316 и 6925 ч/нг/мл, соответственно. Для доз в отношении 1:10 средние величины СМАХ и AUC для соединения (А) находились в отношении 1:23 и 1:27, соответственно, что позволяет предположить, что кинетика соединения (А) была нелинейной в интервале доз 0,5-5 мг/кг. T-HALF, MRT (INF), CLT и VSS не определяли из-за ограниченного числа образцов.

Для соединения (В) средние величины СМАХ составляли 95,6 и 984 нг/мл для групп, получивших дозы 0,5 и 5 мг/кг, а средние величины AUC равнялись 55,0 и 1109 ч/нг/мл, соответственно. Средние значения СМАХ и AUC для соединения (В) были в отношении 1:10 и 1:20, соответственно. Гендерный эффект в отношении кинетики соединения (А) не мог быть оценен из-за маленького размера образца, но кинетика похожа на кинетики между видами.

Это исследование показывает, что наблюдается связанное с дозой увеличение системного действия соединения (А), и увеличение это больше, чем величина, пропорциональная увеличению дозы. Кроме того, также наблюдалось связанное с дозой увеличение системного действия соединения (В).

Пример 2: Токсикокинетика у крыс.

Токсикокинетику соединения (А) оценивали при изучении токсикологии при введении единичной дозы IV. Дозируемые растворы соединения (А) готовили в среде, содержащей 50% пропиленгликоля, 10% Cremofor EL, 10% этанола и 30% фосфатного буфера (50 мМ, рН 7,4) за день до введения. Соединение (А) вводили путем IV инфузии (в течение примерно 3 минут) при дозах 10, 25 и 30 мг/кг 3 крысам/род/доза. Отбирали образцы крови в течение 24 часов после дозирования и определяли концентрацию в плазме соединения (А) и соединения (В), используя метод LC/MS/MS, при стандартном интервале концентраций на кривой, составляющем 2-500 нг/мл для обоих аналитов. При дозах 10, 25 и 30 мг/кг средние величины СМАХ соединения (А) у самцов крыс составляли 6422, 19066 и 24414 нг/мл, соответственно, у самок крыс средние значения СМАХ составляли 8384, 20524 и 25054 нг/мл, соответственно. Средние значения величин площади под кривой зависимости концентраций от времени (AUC) в группе с дозами 10, 25 и 30 мг/кг составляли 8156, 28476 и 34563 ч/нг/мл, соответственно. Для доз в соотношении 1:2,5:3 средние значения СМАХ соединения (А) у самцов и самок были в соотношении 1:3,0:3,8 и 1:2,5:3,0, соответственно, а величины AUC были в соотношении 1:3,1:4,9 и 1:3,5:4,2, соответственно. T-HALF, среднее время пребывания в интервале времени от нуля до бесконечности MRT (INF), общий клиренс (CLT) и VSS не определялись из-за ограниченного числа образцов в этом исследовании.

Для соединения (В) величины СМАХ и AUC в группах по роду и дозе колебались от 499 до 1787 нг/мл и от 222 до 2003 ч/нг/мл, соответственно. Величины СМАХ для соединения (В) у самцов и самок были в соотношении 1:2,6:3,6 и 1:3,0:2,8, соответственно, а значения AUC были в соотношении 1:3,4:7,0 и 1:4,3:5,5, соответственно. Величины AUC соединения (А) и соединения (В) были больше в 1,8-2,4 раза и в 1,3-2,0 раза, соответственно, у самок по сравнению с самцами крыс.

Это исследование показывает, что наблюдается связанное с дозой увеличение системного действия соединения (А), и увеличение это больше, чем величина, пропорциональная увеличению дозы. Кроме того, также наблюдалось связанное с дозой увеличение системного действия соединения (В).

Пример 3: Фармакодинамические исследования соединения (А).

Для оценки противораковой активности соединения (А), введенного путем IV инфузии в течение 10 часов «голым» самкам мышей, у которых наблюдалась подкожная человеческая карцинома яичников (Pat-7 опухоль), был проведен ряд опытов. Соединение (А) в виде раствора 10% этанола вводили дозами от 3 до 150 мг/кг. Результаты этих опытов позволяют предположить, что доза от 3 до 6 мг/кг соединения (А) является минимально эффективной (определена как доза, требуемая для обеспечения активности, эквивалентной 0,5 log гибели клеток). В серии параллельных опытов определяли кажущиеся устойчивыми концентрации соединения (А) у мышей после 10-часовой IV инфузии с дозами от 3 до 150 мг/кг. Концентрации соединения (А) в плазме определяли через 2, 4 и 6 часов после начала инфузии, и они были сравнимы для каждого уровня доз во времени, что позволяет предположить, что устойчивое состояние достигалось через 2 часа. Поэтому концентрации через 2, 4 и 6 часов усредняли, чтобы определить кажущуюся устойчивой концентрацию. Связанное с дозой увеличение для кажущейся устойчивой концентрации наблюдалось во всем интервале доз от 3 до 150 мг/кг. Минимальная эффективная концентрация, определенная как кажущаяся устойчивой концентрация, достигнутая при минимально эффективной дозе IV инфузии, равной от 3 до 6 мг/кг, была равна от 15 до 45 нг/мл (примерно 30-90 нМ).

Пример 4: In vitro исследование метаболизма соединения (А).

После инкубирования соединения (А) (40:М) с микросомами мышей, крысы, собаки и человеческой печени, усиленными фосфатом динуклеотида аденин-никотинамида (NADPH), скорость окислительного метаболизма соединения (А) равнялась 2,1, 0,7, 1,2 и 1,3 нмол/мин/мг белка, соответственно. Более того, распределение метаболита было одинаковым для всех видов (метаболиты включали несколько М+6 и М-2 соединений). Оказалось, что качественно имеет место похожее образование метаболитов соединения (А) после инкубирования для гепатоцитов крысы или человека по сравнению с микросомным инкубированием. Оказалось, что продукты, похожие на продукты химического разложения соединения (А), являются основными в инкубатах в гепатоцитах.

Способность соединения (А) ингибировать основной цитохром человека P450s (CYPs), ответственный за метаболизм лекарств, оценивали in vitro, используя рекомбинантные изоформы CYP человека. Определяли величины IC₅₀ для ингибирования деэтилирования 3-циано-7-этоксикумарина (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 и CYP2D6) и для ингибирования деалкилирования бензоилрезоруфина (CYP3A4). Соединение (А) было слабьм ингибитором CYP3A4 человека со средней величиной IC₅₀, равной 7,3 п.М (3,7 пг/мл). Соединение не ингибировало CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 и CYP2D6. Эти in vitro результаты предполагают, что соединение (А) может иметь минимальный потенциал изменения метаболического клиренса лекарств, которые в значительной степени метаболизируются CYP3A4 и вряд ли значительно изменяют метаболический клиренс лекарств, метаболизированных CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 и CYP2D6.

Соединение (А) инкубировали в присутствии микросом печени человека вместе с соединениями, специфичными для ингибирования индивидуального цитохрома P450s, обычно вовлеченного в метаболизм лекарств. Используемые ингибиторы включали фурафиллин (CYP1A2), 8-метоксипсорален (CYP2A6), орфенадрин (CYP2B6), сульфафеназол (CYP2C9), транилципромин (CYP2C19), хинидин (CYP2D6), тромандомицин (CYP3A4) и кетоконазол (CYP3A4). Значительное ингибирование наблюдалось только в случае CYP3A4, оба из которых полностью ингибировали биопревращение соединения (А). Таким образом, у людей соединение (А) может быть субстратом для CYP3A4.

Коэффициент проницаемости (Рс) соединения (А) определяли в системе клеточной культуры Сасо-2, на in vitro модели для кишечной абсорбции у человека. Рс соединения (А) при концентрации 10, 30 и 100 пМ (примерно 5, 15 и 50 пг/мл, соответственно) равнялся 94, 105 и 128 нм/с, соответственно. Рс некоторых модельных соединений, для которых известна биодоступность у людей, также определяли в том же опыте. Эти соединения включали салициловую кислоту, ацетаминофен, ибупрофен и пропанолол, все из которых имели Рс>200 нм/с и абсорбировались, по меньшей мере, на 90%. Рс, равный 94-128 нм/с для соединения (А), позволяет предположить, что соединение (А) может хорошо абсорбироваться у людей.

Пример 5: Фармакокинетика и абсолютная оральная биодоступность различных препаратов соединения (А) у биглей.

Оценивали абсолютную оральную биодоступность различных препаратов соединения (А) у взрослых самцов биглей (n=4). Соединение (А) вводили во время 10-минутной внутривенной (IV) инфузии (0,5 мг/кг), в виде буферного орального раствора (2 мг/кг) и буферной оральной суспензии (1 мг/кг).

5.1. Схема опыта: схема опыта показана в Таблице 1.

Таблица 1 Схема опыта.
Период	Лечение	Путь	Доза, мг/кг	Состав препарата	Число собак
1	А	IV	0,5	Раствор в среде, содержащей 40% пропиленгликоля, 5% этанола и 55% фосфатного буфера (50 мМ, рН 7,4)	4
2	В	оральный	2	Раствор в среде, содержащей 58% пропиленгликоля, 12% этанола и 30% фосфатного буфера (1 М, рН 8,0)	4
3	С	оральный	2a	Буферная суспензия в 1% Avicel® RC591, содержащая фосфатный буфер (2 М, рН 8,0) и лимонную кислоту (85 мМ)	4
4	D	оральный	2	не прим.d	не прим.d
a Из-за токсичности эту дозу уменьшали до 1 мг/кг. b Лечили пентагастрином (6: г/кг; внутримышечно). c не вводили вследствие отсутствия состава. d не применяется.

Схема включала: единичную дозу, четыре стадии лечения, четыре периода, не рандамизирована, перекрестная. Соединение (А) давали четырем взрослым кобелям и биглей в виде 10-минутной IV инфузии, буферного орального раствора (2 мг/кг) или буферной оральной суспензии (2 мг/кг). Для IV введения соединение (А) использовалось в виде раствора (примерно 0,375 мг/кг) в растворителе, содержащем 40% пропиленгликоля, 5% этанола и 55% фосфатного буфера (50 мМ, рН 7,4). Оральный раствор соединения (А) (концентрация около 1,5 мг/мл) готовили в растворителе, содержащем 58% пропиленгликоля, 12% этанола и 30% фосфатного буфера (1 М, рН 8,0), в качестве носителя. Для получения оральной суспензии соединение (А) суспендировали в 1% Avicel® RCS91, который содержал фосфатный буфер (2 М) и лимонную кислоту (85 мМ), после восстановления рН буферной суспензии равнялся примерно 8,0, а концентрация составляла около 0,75 мг/мл. Из-за кумулятивной токсичности доза оральной суспензии во время третьего периода была снижена с 2 мг/кг до 1 мг/кг. Кроме того, четвертое введение не проводили из-за отсутствия состава. Период вымывания лекарства между циклами составлял, по меньшей мере, 7 дней. В течение 24 часов после введения дозы отбирали ряд образцов крови и определяли концентрацию соединения (А) и соединения (В), используя метод LC/MS/MS со стандартным интервалом концентраций на кривой, равным 2-500 нг/мл для обоих аналитов. Метод LC/MS/MS был таким же, как в Примере 1.

Аналитические определения включали стандартный контроль качества (QC) и исследование образцов. Объем плазмы для анализа составлял 0,2 мл, а стандартный интервал на кривой составлял 2-500 нг/мл для обоих аналитов, определяя нижний предел количественного определения (LLQ) и верхний предел количественного определения (ULQ), соответственно. Если предсказанная концентрация в исследуемом образце была меньше, чем концентрация наименьшего эталона, величину предсказанной концентрации указывали как <LLQ. Если предсказанная концентрация в исследуемом образце была больше, чем концентрация наибольшего эталона, результат определения указывали как >ULQ, и соответствующий объем этого образца разбавляли чистой плазмой и вновь анализировали.

5.2. Подготовка животных, приготовление и введение дозы.

Для исследования были выбраны четыре взрослых собаки-самца, у которых был венозный доступ для введения лекарства и отбора крови. Собаки акклиматизировались в течение, по меньшей мере, одной недели до начала опыта и содержались в разных стальных клетках. Животных идентифицировали при помощи номеров и ярлыков на клетках. Собакам давали воду для питья ad libitum и кормили раз в день, используя стандартную диету для собак за исключением 12 часов до введения дозы и 4 часов после ее введения. За 15 минут до введения буферной оральной суспензии собакам вводили пентагастрин (6: г/кг; внутримышечно). Предварительное введение пентагастрина использовали только в случае оральной суспензии. IV дозу вводили путем инфузии с постоянной скоростью в течение 10 минут, используя калиброванный инфузионный насос. Дозы орального раствора и суспензии вводили при помощи желудочного зонда и промывали трубки зонда 20 мл воды.

5.3. Отбор образцов и обработка.

Серийные образцы крови (3 мл) отбирали до введения дозы и через 10 мин (только IV, конец инфузии), 15 мин, 20 мин (только IV), 30 мин, 45 мин, 1 ч, 1,5 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 12 ч и 24 ч после дозирования. Образцы крови собирали в пробирки Vacutainer®, содержащие в качестве антикоагулянта К₃-EDTA, и содержимое каждой пробирки перемешивали, аккуратно переворачивая пробирку. Затем образцы крови помещали в колотый лед. Плазму получали в течение 30 минут после отбора путем центрифугирования пробирок при примерно 4°С и 2000 х г в течение 5 минут. Образцы плазмы хранили при -20°С или ниже до определения концентраций соединения (А) и соединения (В).

Для каждого опыта по анализу соединения (А) и соединения (В) в плазме применялись a priori следующие критерии. Предсказанные концентрации, по меньшей мере, трех четвертей всех калибровочных стандартов будут находиться в пределах 15% от величины их индивидуальных номинальных концентраций (20% для LLQ); по меньшей мере, один репликат наименьшей концентрации на стандартной кривой будет находиться в пределах 20% от их номинальной концентрации для этого уровня, что квалифицируется как LLQ, и предсказываемые концентрации, по меньшей мере, трех четвертей всех QC образцов будут находиться в пределах 15% от их индивидуальной номинальной концентрации.

5.4 Фармакокинетический анализ.

Пиковая плазменная концентрация (СМАХ) и время для достижения пиковой концентрации (ТМАХ) записывали непосредственно в ходе эксперимента. Площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени от момента времени 0 до Т (AUC(0-T)), где Т - время, когда последний раз замеряют концентрацию в плазме, была рассчитана с использованием правила трапеции (см. М.Gibaldi et al., Pharmacokinetics, 2d ed., New York, NY, Marcel Decker, p.445-9, 1982). T-HALF не определяли из-за ограниченного числа образцов на последней стадии исследования.

Данные о зависимости средней плазменной концентрации от времени для соединения (А) и соединения (В) представлены в Таблице 2. Соответствующее графическое отображение для соединения (А) и соединения (В) приведены на Фиг.1 и Фиг.2, соответственно.

а Характеризует номинальное время отбора. Незначительные отклонения от номинального времени отбора рассматриваются как не оказывающие влияние на интерпретацию результатов.

b Все концентрации для буферной оральной суспензии были <LLQ (2 нг/мл) и не показаны в этой таблице. Величины <LLQ считаются равными 0 для средних (SD) результатов. Если концентрации у всех собак в данный момент времени были <LLQ, среднее значение представлено как 0.

с n=3. Профиль концентрация в плазме - время для одной собаки был непоследовательным для дозы 10-минутной IV инфузии, так как наблюдавшееся ТМАХ равнялось 1,0 ч, эту собаку исключали при подсчете среднего значения.

d n=3. Одна собака испытала приступ рвоты вскоре после дозирования, ее исключили при подсчете среднего значения.

е Образцы не были отобраны.

f Образцы не были отобраны; это не влияет на окончательные выводы.

Средние фармакокинетические параметры для соединения (А) и соединения (В) представлены в Таблицах 3 и 4, соответственно.

Профиль концентрация в плазме - время для одной собаки, является непоследовательным для дозы 10-минутной IV инфузии, так как наблюдавшееся ТМАХ было равно 1,0 ч; эту собаку исключали из результатов фармакокинетических анализов. Средняя (SD) [n=3], СМАХ и AUC (0-T) после IV введения, соединения (А) составляли 1120 (189) нг/мл и 420 (36,8) ч.нг/мл, соответственно. Величина AUC, полученная в этом опыте после IV введения, сравнима с величинами AUC, наблюдавшимися в ходе предварительного IV фармакокинетического исследования (средняя (SD); 483 (34) ч.нг/мл) после введения собакам дозы 0,5 мг/кг. После введения орального буферного раствора одну собаку вскоре после введения дозы тошнило и поэтому данные по этой собаке не учитывали при определении фармакокинетики. Средние величины (SD) [n=3], СМАХ и AUC (0-Т) после введения орального буферного раствора соединения (А) составляли 365 (40,9) нг/мл и 560 (159) ч.нг/мл, соответственно. Средняя величина AUC, полученная в этом опыте после введения орального раствора, была примерно в 2 раза больше среднего значения AUC с нормализованной дозой (257 ч.нг/мл), полученного при изучении токсичности у собак после единичной оральной дозы.

Хотя оральный состав в обоих случаях был идентичным, общий объем орального раствора, введенного в данном опыте, составлял примерно 1,3 мл/кг, в то время как эта величина при определении токсичности равнялась 0,4 мл/кг. Следовательно, количество миллиэквивалентов буфера, доставленного в данном опыте, было примерно в 3 раза больше, чем при введении дозы при изучении токсичности, при этом, возможно, была достигнута лучшая нейтрализация рН в желудке в ходе данного опыта. Соединение (А) является нестабильным в кислоте, таким образом, более длительное воздействие после введения орального раствора в данном опыте по сравнению с опытом по изучению токсичности связано, вероятно, с лучшей защитой от разложения при воздействии кислоты в желудке. Для двух собак, у которых после и IV дозы, и введения орального раствора были определены фармакокинетические параметры, абсолютная оральная биодоступность равнялась 48,3% и 30,6%, соответственно (средняя величина = 39,5%).

Величины СМАХ и AUC (0-T) для соединения (В) показывают, что на собак соединение (В) действовало после введения IV дозы и дозы орального раствора, но животные не подвергались действию соединения (В) после дозирования оральной суспензии. Системное действие соединения (В) после перорального введения было заметно сильнее, чем после IV введения.

Эти результаты показывают, что у двух собак, для которых получили данные о фармакокинетических параметрах после IV дозы и оральной дозы, абсолютная оральная биодоступность была равна 48,3% и 30,6%, соответственно (средняя величина=39,5%).

Пример 6. Жидкий оральный состав на основе фармацевтически приемлемого нейтрализующего кислоту буфера.

Были получены буферные составы (см. табл.5):

Таблица 5

	Буфер Композиция №1	Буфер Композиция №2
Ингредиент	Количество (г)	Количество (г)
Двухосновный фосфат натрия, безводный, USP	4,258	5,688
Дигидрат цитрата натрия, USP	2,941	2,942
Безводная лимонная кислота, USP	0,232	0,256
Сахарин, NF (не обяз.)	15,00	15,00
Вишневый ароматизатор (не обяз.)	0,075	0,075
Всего	22,5	24,0

Добавляли 140 мл воды с получением 150 мл жидкой оральной дозированной формы. рН жидкой оральной дозированной формы был равен 7,43±0,07 (6 измерений). Средняя величина емкости по нейтрализации кислоты пяти жидких оральных дозированных форм равнялась 49,7 (стандартное отклонение = 0,17, относительное стандартное отклонение = 0,34%).

Пример 7. Стабильность жидкого состава на основе соединения (А).

Стабильность соединения (А) в растворе 80:20 пропиленгликоль:этанол оценивали, получив восстановленный раствор 25 мг соединения (А) в растворителе 80:20 пропиленгликоль:этанол и жидкую оральную дозированную форму с концентрацией от 2,5 мг/мл до 12,5 мг/мл. Полученную жидкую оральную дозированную форму хранили затем до 20 часов при комнатной температуре (20-25°С) и при комнатном свете и при температуре холодильника (2-8°С).

Внешний вид жидкой оральной дозированной формы не менялся независимо от условий хранения. Увеличение количества примесей/продуктов распада и снижение активности наблюдалось после хранения при комнатной температуре и комнатном свете в течение 20 часов. Небольшое увеличение общего количества примесей/продуктов распада наблюдалось после хранения при температуре холодильника в течение 20 часов. Изменение общего количества примесей вызвано увеличением количества оксазиновой примеси/продукта распада, строение которого показано ниже:

Образцы анализировали, используя ЖХВР и колонку Waters Symmetry Shield RP8, 75 мм × 4,6 мм вн. диаметр, частицы размером 3,5:м и детектирование при 240 нм в УФ. Использовали растворы 10:L, колонка выдерживалась при комнатной температуре и скорость потока составляла 1 мл/мин. Время определения составляло 1 час, образцы элюировали, используя градиент элюирования с мобильной фазой - водой (0,05% уксусной кислоты) (мобильная фаза А) и мобильной фазой - ацетонитрилом (0,05% уксусной кислоты). Профиль элюирования описан в таблице 6.

Таблица 6

Состав мобильной фазы
Время (минуты)	%А	%В	Градиентный профиль
0	90	10	Изократический
3	90	10	Изократический
43	40	60	Линейный
45	40	60	Изократический
50	90	10	Линейный
60	90	10	Изократический

Эти результаты показывают, что жидкая оральная дозированная форма с концентрацией 2,5 мг/мл-12,5 мг/мл может храниться при комнатной температуре до 6 часов и при температуре холодильника - до 20 часов.

Пример 8. Синтез соединения (А).

[1S-[1R*3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-дигидрокси-8,8,10,12,16-пентаметил-3-[1-метил-2-(2-метил-4-тиазолил)этенил]-4аза-17-оксабицикло[14.1.0]-гептадекан-5,9-дион.

Соединение 1: (3S, 6R, 7S, 8S, 12R, 13S,15S)-15-азидо-12,13-эпокси-4,4,6,8,12,16-гексаметил-7-гидрокси-17-(2-метил-4-тиазолил)-5-оксо-16-гептадеценовая кислота.

Раствор эпотилона В (0,35 г, 0,69 ммол) в дегазированном ТГФ (4,5 мл) обрабатывали каталитическим количеством (80 мг, 69 ммол) тетракис(трифенил-фосфина) палладия (0) и перемешивали суспензию при 25°С в атмосфере аргона в течение 30 минут. Полученный светло-желтый гомогенный раствор обрабатывали сразу же раствором азида натрия (54 мг, 0,83 ммол) в дегазированной воде (2,2 мл). Реакционную смесь нагревали до 45°С в течение 1 часа, разбавляли водой (5 мл) и экстрагировали этилацетатом (4×7 мл). Органические экстракты промывали насыщенным водным раствором NaCl (15 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 3,0×15 см, 95:5,0:0,5 CHCl₃-МеОН-АсОН) с получением соединения 1 (0,23 г, 61%) в виде бесцветного масла. MS (ESI₊):551 (М+Н)⁺; MS (ESI_-):549 (М-Н)^-.

Соединение 2: (3S, 6R, 7S, 8S, 12R, 13S, 15S)-15-амино-12,13-эпокси-4,4,6,8,12,16-гексаметил-7-гидрокси-17-(2-метил-4-тиазолил)-5-оксо-16-гептадеценовая кислота.

Раствор соединения 1 (0,23 г, 0,42 ммол) в ТГФ (4,0 мл) обрабатывали водой (23 мл, 1,25 ммол) и трифенилфосфином на полимерной подложке (Aldrich, полистирол, сшитый 2% ДВБ, 0,28 г, 0,84 ммол) при 25°С. Полученную суспензию перемешивали при 25°С в атмосфере аргона (32 часа), фильтровали через целит (Celite) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали флэш-хроматографией (SiO₂, 1,5×10 см, 95:5,0:0,5-90:10:1,0 CHCl₃-МеОН-АсОН элюирование) с получением соединения 2 (96 мг, 44%) в виде бесцветного масла. MS (ESI⁺):525,2 (М+Н)⁺; MS (ESI^-):523,4 (M-H)^-.

Альтернативно, в круглодонную колбу объемом 25 мл помещали соединение 1 (0,26 г, 0,47 ммол) и PtO₂ (0,13 г, 50 вес.%), добавляли абсолютный этанол в атмосфере аргона. Реакционную смесь нагревали до 45°С, перемешивали в течение 14 часов и охлаждали до 25°С. Полученный иминофосфоран обрабатывали гидроокисью аммония (28%, 0,1 мл) и снова нагревали реакционную смесь до 45°С. Через 4 часа удаляли летучие в вакууме и остаток очищали, как описано выше, с получением соединения 2 (13 мг, 70%).

Соединение (A): [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-дигидрокси-8,8,10,12,16-пентаметил-3-[1-метил-2-(2-метил-4-тиазолил)этенил]-4-аза-17-окса-бицикло[14.1.0]-гептадекан-5,9-дион. Раствор соединения 2 (0,33 г, 0,63 ммол) в дегазированном ДМФ (250 мл) обрабатывали твердым бикарбонатом натрия (0,42 г, 5,0 ммол) и дифенилфосфорилазидом (0,54 мл, 2,5 ммол) при 0°С в атмосфере аргона. Полученную суспензию перемешивали при 4°С в течение 24 часов, разбавляли фосфатным буфером (250 мл, рН 7) при 0°С и экстрагировали EtOAc (5×100 мл). Органические экстракты промывали 10% водным LiCl (2×125 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток сначала очищали методом флэш-хроматографии (SiO₂, 2,0×10 см, 2-5% МеОН-CHCl₃ элюирование) и затем еще раз очищали, используя Chromatotron (2 мм SiO₂, GF ротор, 2-5% МеОН-CHCl₃ элюирование) с получением соединения, указанного в заголовке (0,13 г, 40%) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) * 6,98 (s, 1Н), 6,71 (d, 1H, NH, J-8,1 Гц), 6,56 (s, 1H), 4,69-4,62 (m, 1H), 4,18-4,12 (m, 1H), 4,01-3,96 (m, 1H), 3,86 (s, 1H), 3,38-3,34 (m, 1H), 2,82 (dd, 1H, J=5,6, 6,0 Гц), 2,71 (s, 3Н), 2,58 (s, 1H), 2,43 (dd, 1H, J=9,0, 14,5 Гц), 3,34 (dd, 1H, J=3,0,14,5 Гц), 2,14 (s, 3Н), 2,05-1,92 (m, 2Н), 1,82-1,41 (серия мультиплетов, 7Н), 1,35 (s, 3Н), 1,28 (s, 3Н), 1,18 (d, 3Н, J=6,8 Гц), 1,14 (s, 3Н), 1,00 (d, 3H, J=6,8 Гц); MS (ESI⁺):507,2 (M+H)⁺; MS (ESI^-):505,4 (M-H)^-.

Пример 9. Фармакокинетика Соединения А, перорально введенного раковым больным.

Пациентам с развившимися злокачественными опухолями вводили Соединение А ежедневно в виде 30-минутной инфузии (курс=3 внутривенных ежедневных введения). Пациенты получали дозы 1, 2,5, 5, 10, 20, 25 или 30 мг/м². Начиная с дозы 20 мг/м² вводили единичную оральную дозу Соединения А на 6 день, используя в качестве носителя 80% пропиленгликоля и 20% этанола (об/об) с последующим введением буфера цитрата/фосфата (22,5 г) перед курсом 1 для достижения абсолютной биодоступности Соединения А. Доза перорально введенного на 6 день Соединения А соответствовала IV дозе Соединения А, введенной в первый день. Образцы плазмы отбирали на 6 день и в 1 день курса 1 для оценки фармакокинетики методом LC/MS/MS. Этот метод LC/MS/MS был таким, как описан в Примере 1.

Соединение А для перорального введения, 25 мг/флакон, было в виде «drug in bottle». Носитель (буфер) для восстановления соединения А представлял собой смесь 80% пропиленгликоля и 20% этанола (об/об). Смесь пропиленгликоля и этанола готовили смешением 80 ч. по объему пропиленгликоля и 20 ч. по объему этанола в подходящем контейнере при осторожном вращении контейнера до полного смешения раствора.

Цитрат/фосфатный буфер для перорального введения после соединения А находился в отдельном флаконе. Буфер для применения вместе с соединением А восстанавливали водой для инъекции (WFI).

Соединение А готовили для введения пациентам, используя подходящий шприц для медленной инъекции 2,5, 5 или 10 мл смеси пропиленгликоль/этанол во флакон объемом 20 см³, содержащий 25 мл/флакон соединения А, с получением концентраций 10, 5 или 2,5 мг/л, соответственно, в зависимости от дозы, которую нужно ввести пациенту. Шприц вынимали и встряхивали энергично в течение 10 секунд флакон. Флакон помещали в ультразвуковую ванну и обрабатывали ультразвуком до получения прозрачного раствора. Флакон группировали в зависимости от дозы.

Буфер для введения соединения А находился в прозрачной стеклянной бутылочке объемом 8 унций (232 см³) и восстанавливали при помощи воды для инъекции (WFI). Недоступную для детей крышечку снимали и добавляли примерно 140 мл воды для инъекций (WFI). Бутылочку энергично встряхивали или подвергали воздействию ультразвука с перемежающимся встряхиванием до получения прозрачного раствора. После перорального введения на 6 день отбирали образцы крови в пробирки Becton Dickinson Vacutainer, содержащие в качестве антикоагулянта K₃EDTA (крышечка цвета лаванды), по следующей схеме (выражено в виде час:мин от начала перорального введения): перед введением дозы, 00:15, 00:30, 00:45, 1:00, 1:30, 2:00, 3:00, 4:00, 6:00, 8:00, 24:00, 48:00 и 72:00. После IV введения в 1-й день отбирали 7 мл крови в пробирки Becton Dickinson Vacutainer, содержащие в качестве антикоагулянта К₃EDTA (крышечка цвета лаванды), по следующей схеме: перед введением дозы, 00:15, 00:30 (конец инфузии), 00:45, 1:00, 1:30, 2:00, 3:00, 4:00, 6:00, 8:00, 24:00, 48:00 и 72:00.

Сразу же после отбора образцов крови в пробирки Vacutainer переворачивали несколько раз, чтобы перемешать кровь с антикоагулянтом, и затем сразу же помещают пробирки в колотый лед. В течение 30 минут после отбора образцы центрифугировали в течение 5 минут со скоростью примерно 2000 × г и при температуре 0-5°С. Затем плазму перемещали в разные полипропиленовые трубки с завинчивающимися пробками с этикетками и хранили при -70°С до начала биоанализа. Концентрации соединения А в плазме определяли методом LC/MS/MS, описанным в Примере 1.

Зависимость концентрации в плазме от времени анализировали, применяя некомпартментальные методы. Фармакокинетические параметры, определенные для соединения А, включали максимальную концентрацию в плазме (СМАХ), время для достижения СМАХ (ТМАХ), площадь под кривой зависимости концентрации от времени с момента времени ноль до момента последнего отбора образца Т (AUC(0-T)).

Всего 18 пациентов получали перорально соединение А в виде раствора на 6 день и в виде IV дозы в первый день. Данные изучения фармакокинетики представлены в Таблице 7.

Таблица 7. Параметры фармакокинетики соединения А, введенного перорально и внутривенно
Доза (мг/м2)	20	25	30

№	3	11	4
Путь	IV	Оральный	IV	Оральный	IV	Оральный
Состав n	IV	Раствор для орального введения	IV	Раствор для орального введения	IV	Раствор для орального введения
СМАХa (нг/мл)	251 (108)	142 (106)	447 (189)	180 (110)	711 (530)	274 (104)
ТМАХb (час)	0,25 (0,25, 025)	1,0 (0,25, 1,50)	0,50 (0,25, 0,50)	0,50 (0,25, 3,00)	0,50 (0,25, 0,50)	0,50 (0,25, 0,75)
AUC(0-T)а,с ч.нг/мл	796 (587)	404 (381)	848 (284)	533 (284)	1155 (292)	708 (291)
%Fa	NA	43,5 (16,1)	NA	55,6 (18,4)	NA	62,2 (25,1)
a Среднее значение (SD) b Среднее (min, max) значение с Отражает AUC(0-T)

Вышеописанные варианты изобретения описаны в качестве примеров, специалисты в данной области, используя только рутинные эксперименты, могут осуществить многочисленные эквиваленты конкретных соединений, материалов и способов. Все эти эквиваленты входят в объем данного изобретения, выраженный формулой изобретения.

1. Способ увеличения биодоступности аналога эпотилона, при котором перорально вводят млекопитающему аналог эпотилона формулы

или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, клатрат, гидрат, или пролекарство совместно с фармацевтически приемлемым буфером, нейтрализующим кислоту, в количестве, достаточном для обеспечения, по меньшей мере, примерно 20 мэкв. емкости нейтрализации кислоты.

2. Способ по п.1, при котором буфер, нейтрализующий кислоту, вводят одновременно с аналогом эпотилона.

3. Способ по п.1, при котором буфер, нейтрализующий кислоту, вводят до или после введения аналога эпотилона.

4. Способ по п.3, при котором буфер, нейтрализующий кислоту, вводят не позже, чем примерно за 1 ч до введения аналога эпотилона, и/или не позже, чем примерно через 1 ч после введения аналога эпотилона.

5. Способ по п.1, при котором буфер, нейтрализующий кислоту, вводят в виде водного раствора, содержащего безводный двухосновный фосфат натрия, дигидрат цитрата натрия и безводную лимонную кислоту.

6. Способ по п.1, при котором аналог эпотилона или фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат или пролекарство эпотилона вводят в виде раствора в среде пропиленгликоля и этанола при соотношении пропиленгликоль:этанол, равном примерно 80:20.

7. Способ по п.1, включающий

(a) пероральное введение водного раствора фармацевтически приемлемого буфера, нейтрализующего кислоту, содержащего безводный двухосновный фосфат натрия, дигидрат цитрата натрия и безводную лимонную кислоту;

(b) пероральное введение раствора аналога эпотилона или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, клатрата, гидрата или пролекарства в пропиленгликоле.

8. Набор для увеличения биодоступности аналога эпотилона, который включает

(i) первый компонент, представляющий собой аналог эпотилона формулы

и

(ii) второй компонент, представляющий собой фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, причем первый компонент и второй компонент содержатся в виде оральной дозированной формы.

9. Набор по п.8, где по меньшей мере один из указанных компонентов содержится в виде твердой оральной дозированной формы.

10. Набор по п.8 или 9, где по меньшей мере один из указанных компонентов содержится в виде фармацевтической композиции, которая может быть восстановлена при помощи растворителя с получением жидкой оральной дозированной формы.

11. Набор по п.10, где по меньшей мере один из указанных компонентов содержится в виде таблетки.

12. Набор по п.8, где по меньшей мере один из указанных компонентов является безводным.

13. Набор по п.10, который дополнительно содержит растворители для восстановления первого или второго компонента.

14. Набор по п.13, где растворитель для восстановления первого компонента представляет собой смесь пропиленгликоля и этанола.

15. Фармацевтическая композиция, пригодная для перорального введения млекопитающему, включающая

(i) аналог эпотилона формулы

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат, или пролекарство в твердой форме; и

(ii) фармацевтически приемлемый буфер, нейтрализующий кислоту, в количестве, достаточном для обеспечения, по меньшей мере, примерно 20 мэкв. емкости нейтрализации кислоты.

16. Фармацевтическая композиция по п.15, в которой буфер, нейтрализующий кислоту, представляет собой двухосновный фосфат - лимонная кислота-цитрат.

17. Набор, включающий фармацевтическую композицию по п.15 и растворитель для восстановления аналога эпотилона с получением оральной дозированной формы, имеющей рН от 5 до 9.

18. Набор по п.17, где растворитель представляет собой пропиленгликоль, этанол и фосфатный буфер (1 М, рН 8).

19. Диспергируемая буферированная таблетка, которая включает аналог эпотилона формулы

или его фармацевтически приемлемые соль, сольват, клатрат, гидрат, или пролекарство, и

по меньшей мере один из компонентов буфера, нейтрализующий кислоту, для абсорбции указанного эпотилона в количестве, достаточном для обеспечения, по меньшей мере, примерно 20 мэкв. емкости нейтрализации кислоты.

20. Таблетка по п.19, где буфер, нейтрализующий кислоту, представляет собой двухосновный фосфат-лимонная кислота-цитратбуфер.