Способ прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом

Изобретение относится к медицине, а именно - к диагностическим методам в области онкологии. Сущность способа: к сыворотке крови больного острым лейкозом добавляют стандартную кроличью гемолитическую сыворотку, смесь инкубируют, после чего ставят реакцию гемагглютинации с эритроцитами барана. При наличии ингибирования реакции, если индекс ингибирования не ниже 1,1, прогнозируют низкую эффективность лечения при применении стандартных схем полихимиотерапии и высокую вероятность развития раннего (в сроки до 6 месяцев) рецидива. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования развития рецидивов при лечении больных острым лейкозом и вовремя выявить больных, устойчивых к проводимой химиотерапии, которые нуждаются в дополнительном лечении.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и иммунологии.

Известен способ оценки гуморального иммунного ответа, основанный на выявлении блокирующих антител у больных острым лейкозом в острый период и в период ремиссии. Блокирующие антитела, соединяясь с атигенными детерминантами опухолевых клеток, экранируют их от цитопатогенного действия иммунных лимфоцитов. В период стабильной ремиссии блокирующие противолейкозные антитела не выявляются. В период рецидива они присутствуют у 41,3% больных. Присутствие блокирующих антител к ассоциированным с лейкозом антигенам в сыворотке больных авторы изучали в комплементзависимой цитотоксической реакции, которую ставили в непрямом варианте. Источником антител к ассоциированным с лейкозом антигенам служили как цельные сыворотки крови больных, так и их фракции, содержащие иммуноглобулины М и G, полученные методом гель-хроматографии на сефадексе G-200. В качестве клеток-мишеней использовали аутологичные или аллогенные лейкозные клетки (бласты). Живые и мертвые клетки подсчитывали в камере Горяева. Высчитывали цитотоксический индекс (ЦИ) по формуле: (% мертвых клеток в опыте - % мертвых клеток в контроле): % живых клеток в контроле. Положительной (блокирующие антитела отсутствуют) считалась реакция при ЦИ, равном или более 0,2 (Еремеев B.C. Особенности гуморального иммунного ответа у больных острым лейкозом на разных стадиях лейкозного процесса / B.C.Еремеев, Г.В.Акимова, А.Г.Румянцев, В.М.Бергольц // Иммунология. - 1981. - N 4. - С.38-40; Грачева Л.А. Обоснование цитокиновой терапии опухолевых заболеваний иммунной системы / Л.А.Грачева, С.Г.Осипов, B.C.Еремеев, А.Г.Румянцев // Журн. гематологии и трансфузиологии.-1998. - Т.43, N 4. - С.42-46).

Недостатком данной методики является сложность диагностической системы, необходимость выделения иммуноглобулиновых фракций на сефадексе. Применение этой методики после курса химиотерапии удлиняет сроки выявления группы больных с неблагоприятным прогнозом и, как следствие, влечет за собой отсутствие дифференцированного подхода к лечению, недостаточную эффективность лечения.

Техническим результатом изобретения является прогнозирование рецидивов и повышение эффективности лечения заболевания.

Технический результат достигается тем, что к сыворотке крови больного добавляют стандартную кроличью гемолитическую сыворотку, смесь инкубируют, а затем ставят реакцию гемагглютинации с эритроцитами барана и при наличии ингибирования реакции, т.е. когда индекс ингибирования равен или более 1,1, при применении стандартных схем полихимиотерапии прогнозируют низкую эффективность лечения и высокую вероятность развития раннего рецидива (в сроки до 6 месяцев) у больных острым лейкозом.

Способ осуществляется следующим образом: у больного острым лейкозом до лечения определяют ингибирующую способность свежевзятой сыворотки крови в разведении 1:40 по отношению к активности Ig M антител разведенной 1:20 стандартной кроличьей гемолитической сыворотки (тест-сыворотки). Смесь (1 мл разведенной сыворотки больного +1 мл разведенной кроличьей гемолитической сыворотки) инкубируют при +37°С 2 часа. Для контроля исследуемой сыворотки инкубируют смесь физиологического раствора с кроличьей гемолитической сывороткой. Затем с исследуемой и контрольной смесями ставят реакцию гемагглютинации в разведении от 1:40 до 1:2560 с 3% взвесью эритроцитов барана. После 24 часов инкубации при +37°С проводят учет реакции гемагглютинации по четырехкрестовой системе. Реакция ингибирования считается положительной, если индекс ингибирования (ИИ) равен или больше 1,1. ИИ представляет собой отношение суммарного титра тест-сыворотки к суммарному титру ее после контакта с сывороткой больного. При наличии ингибирования реакции прогнозируют неэффективность лечения больного и ранние рецидивы за счет наличия в сыворотке крови иммуносупрессивного фактора, являющегося причиной вторичного иммунодефицитного состояния по гуморальной и Т-клеточной системам, вызывающего снижение содержания в сыворотке крови интерлейкина-2 (ИЛ-2).

Пример №1. Больная Ф., 54 лет. История болезни №00856/1. Поступила в гематологическое отделение Областной клинической больницы №1 г.Воронежа 24.01.2005 г. с жалобами на выраженную слабость, повышение температуры тела до 37,8°С. При обследовании выявлено в периферической крови 20% бластных клеток, снижение гемоглобина до 57 г/л, эритроцитов до 1,2×10⁹/л, тромбоцитов до 54×10⁹/л; лейкоцитов - 6,6×10¹²/л, СОЭ-70 мм/ч. Содержание ИЛ-2 в сыворотке крови больной было равно 0.

На основании общего анализа крови, морфологического и цитохимического исследования костного мозга поставлен диагноз: острый миелобластный лейкоз (М-2 по FAB-классификации). До начала программной химиотерапии исследовали индекс ингибирования сыворотки крови больной: 1 мл сыворотки крови больной в разведении 1:40 соединили с 1 мл разведенной 1:20 стандартной кроличьей гемолитической сыворотки (тест-сывороткой). Смесь инкубировали при +37°С 2 часа. Для контроля исследуемой сыворотки инкубировали смесь 1 мл физиологического раствора с 1 мл кроличьей гемолитической сыворотки в разведении 1:20. Затем с исследуемой и контрольной смесями поставили реакцию гемагглютинации, начиная с разведения 1:40 до 1:2560 с 3% взвесью эритроцитов барана. После 24 часов инкубации при +37°С провели учет реакции гемагглютинации по четырехкрестовой системе: ИИ составил 1,45. Ожидаемый прогноз: развитие резистентности к стандартной индукционной терапии и высокий риск возникновения ранних рецидивов. В связи с этим этой больной показано назначение более интенсивного курса химиотерапии.

Было проведено лечение по стандартной схеме "7+3": в течение 7 дней циторабин в суточной дозе 150 мг 2 раза в день, параллельно в течение 3 дней - доксорубицин в суточной дозе 60 мг. После завершения курса химиотерапии у больной наблюдалось повышение температуры тела до 38°С, развилась энтеропатия, правосторонняя полисегментарная пневмония. В общем анализе крови наблюдалось снижение гемоглобина до 49 г/л; нейтрофилов до 0,08×10⁹/л; лейкоцитов до 0,8×10¹²/л, тромбоцитов - до 12×10⁹/л. В течение 3-х недель проводилась интенсивная терапия, включающая в себя антибактериальные препараты, коррекцию электролитного обмена, дезинтоксикационную терапию, заместительную терапию препаратами крови (эритроцитарная масса, тромбоконцентрат, свежезамороженная плазма). Несмотря на проводимую интенсивную терапию, в период выхода из агранулоцитоза, на 16-й день в периферической крови появились бластные клетки. Их количество к 23 дню после окончания курса химиотерапии составило 92%. Из-за тяжелого агранулоцитарного синдрома проведение последующего курса полихимиотерапии было невозможно. На фоне прогрессирования основного заболевания смерть наступила 27.02.2005 г.

Пример №2. Больная В., 42 года. История болезни №0246/1. Поступила в гематологическое отделение Областной клинической больницы №1 г.Воронежа 29.01.2005 г. с жалобами на слабость, головокружение, повышение температуры тела до 38,5°С. При поступлении в периферической крови выявлено 92% бластных клеток; гемоглобин крови - 54 г/л; эритроциты - 2,5×10⁹/л; тромбоциты - 58,0×10⁹/л; лейкоциты - 8,9×10¹²/л; СОЭ - 54 мм/ч.

На основании клинической картины, общего анализа крови, морфологического и цитохимического исследования костного мозга поставлен диагноз: острый миелобластный лейкоз (М-2 по FAB-классификации).

До начала программной химиотерапии исследовали индекс ингибирования сыворотки крови больной: 1 мл сыворотки крови больной в разведении 1:40 соединили с 1 мл разведенной 1:20 стандартной кроличьей гемолитической сыворотки (тест-сывороткой). Смесь инкубировали при +37°С 2 часа. Для контроля исследуемой сыворотки инкубировали смесь 1 мл физиологического раствора с 1 мл кроличьей гемолитической сывороткой в разведении 1:20. Затем с исследуемой и контрольной смесями поставили реакцию гемагглютинации, начиная с разведения 1:40 до 1:2560 с 3% взвесью эритроцитов барана. После 24 часов инкубации при +37°С провели учет реакции гемагглютинации по четырехкрестовой системе: ИИ составил 0,86. Ожидаемый прогноз: высокая эффективность лечения с последующим выходом в ремиссию при применении стандартных схем полихимиотерапии.

С 01.03.2005 г. начато лечение по программе "7+3": доксорубицин в дозе 70 мг в день 3 дня, циторабин 160 мг 2 раза в день в течение 7 дней. На 14-й от начала полихимиотерапии в общем анализе крови: эритроциты - 2,5×10⁹/л; гемоглобин - 84 г/л; лейкоциты - 3,45×10¹²/л; нейтрофилы - 2,6×10⁹/л; тромбоциты - 89×10⁹/л. Бластных клеток в периферической крови нет. Экстрамедуллярные очаги лейкозного поражения отсутствуют. 28.03.2005 г выполнена стернальная пункция, по результатам которой констатирована полная клинико-гематологическая ремиссия (количество бластных клеток - 1,75%), которая продолжается и до настоящего времени (количество бластов в общем анализе крови от 01.05.2006 г. равно 0).

Нами обследовано и пролечено 82 больных. По результатам проведенного лечения (стандартные курсы полихимиотерапии) выделены 2 группы пациентов:

1 группа, n=50. Все пациенты были чувствительны к проводимой терапии (100% выход в ремиссию). У всех пациентов была отрицательная реакция ингибирования, ИИ=0,88 (0,85-0,94). Медиана содержания интерлейкина-2 в сыворотке крови этих больных до лечения составила 240 пг/мл (210-340).

2 группа, n=32. Пациенты, резистентные к проводимой терапии (отсутствие выхода в ремиссию или наличие рецидива в течение ближайших 6 месяцев).

Подгруппа А, n=18. Пациенты с положительной реакцией ингибирования, ИИ=1,25 (1,2-1,36). Они преобладали во 2-й группе больных. Их число составило 56,3% от общего количества пациентов во 2-й группе. Содержание ИЛ-2 в сыворотке крови этих больных до лечения было в 4,8 раз меньше, чем у больных 1-й группы и составило 50 пг/мл (15-85) (р<0,01). Между индексом ингибирования и содержанием ИЛ-2 у этих больных выявлена сильная обратная корреляционная связь: коэффициент корреляции составил - 0,8.

Подгруппа В, n=14. Представлена пациентами с отрицательной реакцией ингибирования, ИИ=0,85 (0,81-1,0). Медиана содержания интерлейкина-2 в сыворотке крови этих больных до лечения составила 125 пг/мл (110-180), что достоверно ниже значения в 1-й группе (р<0,01), но, в то же время, достоверно выше, чем у пациентов с ИИ более или равном 1,1.

Предлагаемый способ отличается простотой исполнения реакции ингибирования и доступности ее использования любой серологической лабораторией.

Он характеризуется точностью прогнозирования развития рецидивов при лечении больных острым лейкозом, высокой степенью возможности раннего выявления больных, устойчивых к проводимой химиотерапии, которые нуждаются в дополнительном лечении.

Способ прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом и эффективности лечения, заключающийся в исследовании сыворотки крови, отличающийся тем, что дополнительно к сыворотке крови больного добавляют стандартную кроличью гемолитическую сыворотку, смесь инкубируют, а затем ставят реакцию гемагглютинации с эритроцитами барана и при наличии ингибирования реакции, если индекс ингибирования равен или более 1,1, при применении стандартных схем полихимиотерапии прогнозируют низкую эффективность лечения и высокую вероятность развития раннего рецидива (в сроки до 6 месяцев).