Растительные тимидинкиназы и их применение

Изобретение относится к биотехнологии. Описана фармацевтическая композиция, обладающая тимидинкиназной активностью, содержащая в качестве активного начала выделенный фермент растительную тимидинкиназу или полинуклеотид, кодирующий ее. Раскрыт способ сенсибилизации клетки к пролекарству. Предложен способ фосфорилирования нуклеозидного аналога-монофосфата. Раскрыт способ ингибирования патогенного агента в организме теплокровного животного. Описан способ контроля или модификации роста растения. Предложено средство, включающее нуклеозидный аналог и тимидинкиназу, или ген, кодирующий указанную полученную из растения тимидинкиназу, или вектор, включающий указанный ген, кодирующий указанную полученную из растения тимидинкиназу, в виде комбинации для одновременного, раздельного или последовательного введения при лечении рака. Описаны новые тимидинкиназы, полученные из сосны или резушки Таля. Данное изобретение позволяет получить новые растительные тимидинкиназы, полезные для превращения нуклеозидных аналогов в токсичные вещества и полезные для превращения нуклеозидных аналогов в монофосфаты и монофосфатов нуклеозидных аналогов в соответствующие дифосфаты. 11 н. и 22 з.п. ф-лы, 9 табл., 2 ил.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Фармацевтическая композиция, обладающая тимидинкиназной активностью, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и выделенный полинуклеотид; вектор, включающий указанный полинуклеотид и промотор; линию упаковывающих клеток, способную продуцировать инфекционный вирион, включающий указанный вектор; или клетку-хозяина, содержащую указанный вектор; причем указанный выделенный полинуклеотид при определении его полной последовательности имеет по меньшей мере 75% идентичности с полинуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 12, или способен гибридизоваться в условиях средней жесткости с указанными последовательностями или их комплементарной цепью.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, где указанный полинуклеотид включает в себя полинуклеотидную последовательность, представленную как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 12.

3. Фармацевтическая композиция, обладающая тимидинкиназной активностью, содержащая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и выделенный фермент растительную тимидинкиназу, где указанный выделенный фермент тимидинкиназа при определении ее полной последовательности имеет по меньшей мере 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная тимидинкиназа включает в себя один или более чем один из следующих мотивов/областей:

Val lle Gly lle Asp Glu Ala Gln Phe Phe (Мотив I)

Val Ala Gly Leu Asp Gly (Мотив II)

Tyr Met Pro Val Cys Arg (Мотив III)

Val A1 Lys Leu A2 A3 Arg Cys Glu A4 (Lid-область), где A1 выбран из Thr и Val, A2 выбран из Thr и Lys, A3 выбран из Ala и Ser, и А4 выбран из Leu и Val.

5. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная тимидинкиназа включает в себя все консервативные остатки, идентифицированные в Таблице 1.

6. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная тимидинкиназа включает в себя аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13.

7. Фармацевтическая композиция по п.3, где указанная тимидинкиназа имеет С-концевую делецию примерно 1-60 аминокислотных остатков, предпочтительно 1-50 аминокислотных остатков, более предпочтительно 1-40 аминокислотных остатков, еще более предпочтительно 1-30 аминокислотных остатков, еще более предпочтительно 1-26 аминокислотных остатков, наиболее предпочтительно 1-24 аминокислотных остатка.

8. Фармацевтическая композиция по п.7, где указанный фермент тимидинкиназа получен из томата и имеет С-концевую делецию 26 аминокислотных остатков (имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5).

9. Фармацевтическая композиция по п.7, где указанный фермент тимидинкиназа получен из резушки Таля и имеет С-концевую делецию 24 аминокислотных остатка (имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11).

10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа получена из сосны и демонстрирует по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 2.

11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа получена из томата и демонстрирует по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 4.

12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа получена из риса и демонстрирует по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 7.

13. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа получена из резушки Таля и демонстрирует по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 9.

14. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа получена из резушки Таля и демонстрирует по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 11.

15. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа получена из резушки Таля и демонстрирует по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 13.

16. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-7, где указанная тимидинкиназа по меньшей мере в три (3) раза уменьшает летальную дозу (ЛД100) по меньшей мере одного нуклеозидного аналога при сравнении с действием тимидинкиназы вируса простого герпеса человека Herpes simplex 1 типа (HSV1-TK).

17. Способ сенсибилизации клетки к пролекарству, включающий стадии

(1) трансфекции или трансдукции указанной клетки полинуклеотидной последовательностью, кодирующей фермент растительную тимидинкиназу, который способствует превращению указанного пролекарства в (цитотоксическое) лекарство, и

(2) доставки указанного пролекарства в указанную клетку;

где указанная клетка более чувствительна к указанному (цитотоксическому) лекарству, чем к указанному пролекарству, и где указанная полинуклеотидная последовательность при определении ее полной последовательности имеет по меньшей мере 75% идентичности с полинуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 12.

18. Способ по п.17, где пролекарство представляет собой нуклеозидный аналог.

19. Способ по п.18, где нуклеозидный аналог представляет собой АЗТ (3'-азидо-3'-дезокситимидин).

20. Способ ингибирования патогенного агента в организме теплокровного животного, включающий введение указанному животному полинуклеотида или вектора, содержащего указанный полинуклеотид, который при определении его полной последовательности имеет по меньшей мере 75% идентичности с полинуклеотидной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 12.

21. Способ по п.20, где указанную полинуклеотидную последовательность или указанный вектор вводят in vivo.

22. Способ по любому из пп.20-21, где указанный патогенный агент представляет собой вирус, бактерию или паразита.

23. Способ по любому из пп.20-21, где указанный патогенный агент представляет собой опухолевую клетку.

24. Способ по любому из пп.20-21, где указанный патогенный агент представляет собой аутореактивную иммунную клетку.

25. Способ по п.20, дополнительно включающий стадию введения указанному теплокровному животному нуклеозидного аналога.

26. Способ по п.25, где указанный нуклеозидный аналог представляет собой АЗТ (3'-азидо-3'-дезокситимидин).

27. Применение фермента растительной тимидинкиназы, имеющей при определении ее полной последовательности по меньшей мере 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13, для фосфорилирования нуклеозидного аналога-монофосфата.

28. Способ фосфорилирования нуклеозидного аналога-монофосфата, включающий стадии, на которых

1) нуклеозидный аналог-монофосфат подвергают воздействию фермента растительной тимидинкиназы, имеющей при определении ее полной последовательности по меньшей мере 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13; и

2) выделяют нуклеозидный аналог-дифосфат.

29. Способ контроля или модификации роста растения, включающего в себя растительные клетки, содержащие полинуклеотид, кодирующий фермент растительную тимидинкиназу, имеющую при определении ее полной последовательности по меньшей мере 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13, включающий стадию, на которой растение или растительную клетку подвергают воздействию нуклеозида или нуклеозидного аналога.

30. Средство, включающее нуклеозидный аналог и тимидинкиназу, имеющую при определении ее полной последовательности по меньшей мере 70% идентичности с аминокислотной последовательностью, представленной как SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 13, или ген, кодирующий указанную полученную из растения тимидинкиназу, или вектор, включающий указанный ген, кодирующий указанную полученную из растения тимидинкиназу, в виде комбинации для одновременного, раздельного или последовательного введения при лечении рака.

31. Выделенный фермент растительная тимидинкиназа, полученный из сосны, имеющий по меньшей мере 70%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2.

32. Выделенный фермент растительная тимидинкиназа, полученный из томата, имеющий по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с любой из последовательностей SEQ ID NO: 4 или 5.

33. Выделенный фермент растительная тимидинкиназа, полученный из Arabidopsis thaliana, имеющий по меньшей мере 70%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% идентичности с последовательностью SEQ ID NO: 9 или 11.

Приоритет по пунктам и признакам:

23.05.2002 пп.1, 2, 20-26 в части последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6; пп.3-15, 27, 28 в части последовательностей SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7; пп.31, 33;

07.02.2003 пп.1, 2, 20-26 в части последовательности SEQ ID NO: 8; пп.17-19 в части последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 6; пп.16, 29 в части последовательностей SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7;

21.05.2003 пп.1, 2, 20-26 в части последовательностей SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12; пп.3-16, 27, 28, 29 в части последовательностей SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13; пп.17-19 в части последовательностей SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12; пп.30, 32.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к новым NOS-вариантам или мутантам, которые содержат структурные модификации в сайте Akt-зависимого фосфорилирования. .

Изобретение относится к генной инженерии, конкретно, к генам точки контроля клеточного цикла и может быть использовано in vitro или in vivo в системах клеточной культуры для изучения роли ATR в качестве гена точки контроля.

Изобретение относится к области генной инженерии и молекулярной биологии и может быть использовано при разработке и осуществлении многих методов анализа ДНК. .

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генной инженерии и может быть использовано в различных методах анализа нуклеиновых кислот, связанных с синтезом комплементарных ДНК-последовательностей.

Изобретение относится к области энзимологии и генной инженерии и обеспечивает получение нативной или рекомбинантной формы термостабильной ДНК-полимеразы, применяемой в диагностических и других исследованиях, основанных на ПЦР-амплификации нуклеиновых кислот.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано для синтеза, выявления и идентификации ДНК в биологических образцах. .

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащаей последовательность гена зрелой стафилокиназы Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, штамма Escherichia coli MZ09 и способа получения рекомбинантного белка, содержащего последовательность гена зрелой стафилокиназы с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам in vitro определения стадии или тяжести заболевания раком у больного или контролирования эффекта терапии, назначаемой больному раком, и может быть использовано в медицине

Изобретение относится к области молекулярной биологии, генетической инженерии и медицины. Предложена молекула рибонуклеиновой кислоты, опосредующая интерференцию РНК, нацеленной против PKN3, а также содержащий её липокомплекс, фармацевтическая композиция, применение и способ лечения ракового заболевания, в которое вовлечен путь PI3-киназы. 12 н. и 36 з.п. ф-лы, 2 табл., 17 ил., 13 пр.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и раскрывает изолированную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую мутантный полипептид BRAF, в котором мутации обеспечивают резистентность к ингибиторам BRAF. Настоящее изобретение также раскрывает изолированный мутантный полипептид BRAF, кодируемый указанной молекулой нуклеиновой кислоты, экспрессирующий вектор, содержащий указанную молекулу нуклеиновой кислоты, клетку-хозяин для экспрессии указанного мутантного полипептида BRAF и способ получения указанного мутантного полипептида BRAF культивированием указанной клетки-хозяина. Используя варианты мутантного полипептида BRAF согласно настоящему изобретению, осуществляют способы определения соединения, представляющего собой ингибитор BRAF второго поколения по уровню фосфорилирования субстрата BRAF или клеточной пролиферации в клетке, содержащей субстрат BRAF. Настоящее изобретение раскрывает способ скринирования субъекта со злокачественной опухолью на наличие мутации BRAF, обеспечивающей резистентность к лечению ингибитором RAF. Настоящее изобретение позволяет обнаружить новые ингибиторы BRAF, которые могут быть использованы при лечении пациентов, имеющих резистентность к ингибиторам BRAF. 10 н. и 11 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен полипептид длиной менее 100 аминокислот. Полипептид содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, 3, 4, 7 или 8, или ее иммуногенный фрагмент, содержащий по меньшей мере 8 аминокислот. Предложена смесь полипептидов, содержащая по меньшей мере первый и второй полипептид, различные друг от друга. Также предложена фармацевтическая композиция, содержащая вышеуказанный полипептид или смесь полипептидов. Предложен способ лечения или профилактики злокачественного новообразования с использованием указанного полипептида, смеси полипептидов или фармацевтической композиции. Группа изобретений обладает повышенной иммуногенностью при вакцинации по сравнению с полноразмерным белком hTERT, а также позволяет индуцировать Т-клеточный иммунный ответ и увеличить длительность периода дожития. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 19 ил., 10 табл., 9 пр.

Группа изобретений относится к генетически модифицированной клетке для продуцирования фукозилированных олигосахаридов, способу ее получения и способу получения фукозилированных олигосахаридов. Генетически модифицированную клетку получают трансформированием клетки геном, кодирующим фукозокиназу, геном, кодирующим фукозо-1-фосфатгуанилилтрансферазу, геном, кодирующим фукозилтрансферазу. Катаболический путь для фукозы инактивирован в указанной клетке путем инактивации одного или нескольких генов, которые выбирают из группы, состоящей из гена фукозо-1-фосфат-альдолазы, гена фукозоизомеразы и гена фуколозокиназы. При этом клетка представляет собой микроорганизм, который выбирают из группы, состоящей из родов Escherichia, Klebsiella, Helicobacter, Bacillus, Lactobacillus, Streptococcus, Lactococcus, Pichia, Saccharomyces и Kluyveromyces. С использованием указанной генетически модифицированной клетки получают фукозилированные олигосахариды путем ее культивирования в подходящих условиях в среде, включающей фукозу и субстрат-акцептор, в котором субстрат-акцептор представляет собой моно-, ди- или олигосахарид или пептид. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 3 табл., 11 пр.

Изобретение относится к соединениям, которые являются необратимыми ингибиторами PI3-киназы, и к конъюгатам, содержащим одну или более PI3-киназ, содержащих остаток цистеина, который ковалентно и необратимо связан с ингибитором PI3-киназы. Также предложены фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения. Соединения предназначены для лечения нарушений и заболеваний, связанных с PI3-киназой. 5 н. и 14 з.п. ф-лы, 16 ил., 26 табл., 52 пр.

Предложены варианты бактерий Escherichia coli, являющихся продуцентами янтарной кислоты. Бактерия Escherichia coli модифицирована таким образом, что гены асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG в ней инактивированы, экспрессия генов galP и glk усилена, и бактерия обладающий активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами ackA, pta, poxB, ldhA, adhE, ptsG, iclR, усиленной экспрессией генов galP и glk, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами ackA, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, iclR, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами асkА, pta, рохВ, IdhA, adhE, ptsG, pflB, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Также предложен вариант бактерии Escherichia coli, обладающий инактивированными генами асkА, pta, рохВ, ldhA, adhE, ptsG, pflB, iclR, усиленной экспрессией генов galP и glk, усиленной экспрессией генов асеЕ, aceF и lpdA, и активностью пируват карбоксилазы. Предложен способ получения янтарной кислоты с использованием указанных вариантов. Группа изобретений обеспечивает увеличение выхода янтарной кислоты. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к получению 2,4-дигидроксимасляной кислоты (2,4-ДГМ). Предложен способ получения 2,4-ДГМ, включающий первую стадию превращения малата в 4-фосфомалат с использованием фермента, способного осуществить подобное превращение, вторую стадию превращения 4-фосфомалата в малат-4-полуальдегид с использованием фермента, способного осуществить подобное превращение, и третью стадию превращения малат-4-полуальдегида в 2,4-ДГМ с использованием фермента, способного осуществить подобное превращение. При этом на первой стадии используют фермент, который имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 41, SEQ ID No. 43 и SEQ ID No. 45. На второй стадии используют фермент, который имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 66 и SEQ ID No. 231. На третьей стадии используют фермент, который имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 225 и SEQ ID No. 227. Предложены также варианты ферментов, используемых в способе, варианты нуклеиновых кислот, кодирующих соответствующие ферменты, варианты химерных генов для трансформации микроорганизма-хозяина и экспрессии в этом микроорганизме соответствующего фермента, варианты вектора экспрессии, варианты микроорганизма-хозяина, экспрессирующего соответствующий фермент. 19 н. и 12 з.п. ф-лы, 5 ил., 16 табл.,12 пр.

Изобретение относится к биотехнологии

Наверх