Способ выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов
Владельцы патента RU 2373531:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU)
Изобретение относится к экспериментальной медицине. Предложен способ выявления антигипоксической активности различных препаратов. Исследуемый препарат добавляют в хемилюминесцентную систему, содержащую питательную среду, кровь и люминесцентный зонд, и проводят хемилюминесцентный анализ. В контрольную кювету вместо препарата добавляют физиологический раствор. Оценивают кинетику хемилюминесценции. В случае, когда время достижения максимума кинетической кривой больше, чем в кювете сравнения, на 10 минут, говорят о наличии антигипоксических свойств у данного препарата. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть использовано для выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов.
Известен способ выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов, при котором животных поодиночке сажают в стеклянные банки одинакового объема, которые герметично закрывают. По мере потребления кислорода животными его концентрация в сосуде снижается, что приводит к их гибели.
Контрольным животным вводят физиологический раствор, а опытным - исследуемый препарат. В гермокамеры параллельно сажают опытных и контрольных животных, регистрируют продолжительность жизни и по ней судят об эффективности исследуемых веществ (Лукьянова Л.Д. Методические рекомендации по изучению препаратов, предлагаемых для изучения в качестве антигипоксических средств. Москва, 1990 г., стр.10).
Для осуществления данного способа оценки антигипоксической активности фармакологических препаратов необходимо большое количество лабораторных животных. Способ является трудоемким и дорогостоящим.
Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего определять антигипоксическую активность фармакологических препаратов in vitro.
Предлагаемый способ расширяет арсенал методов выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов, причем проводится in vitro.
Сущность предложенного способа состоит в том, что в кювету для хемилюминесцентного анализа, содержащую питательную среду, кровь, люминесцентный зонд, добавляют исследуемый препарат и проводят хемилюминесцентный анализ, сравнивая показатели с контрольной кюветой, содержащей питательную среду, кровь, люминесцентный зонд, физиологический раствор, и если время достижения максимума кинетической кривой в опытной кювете будет больше, чем в кювете сравнения, на 10 минут, то исследуемый препарат обладает антигипоксическими свойствами.
Для проверки эффективности предлагаемого способа в качестве изучаемого препарата использовали бемитил, обладающий анигипоксическими свойствами.
Пример. Провели оценку антигипоксической активности бемитила, антигипоксическая активность которого экспериментально и клинически доказана.
Для оценки антигипоксической активности бемитила указанный препарат в объеме 50 мкл, 1 мМ раствора вносили в кювету для хемилюминесценции, содержащую хемилюминесцентную систему: 400 мкл полного раствора Хенкса без красителя, 60 мкл крови здорового донора и 100 мкл люминола. В контрольную кювету с хемилюминесцентной системой добавляли 50 мкл физиологического раствора.
Анализ кинетики хемилюминесценции обеих кювет проводили на хемилюминометре БЛМ 3606М-01 в течение 360 минут при температуре 37°С. Оценивали время достижения максимума кинетической кривой. Через 158 мин инкубации в контрольной кювете наблюдался максимум хемилюминесценции. В опытной кювете с бемитилом максимум наблюдали на 182 мин, что на 26 мин позже, чем в контроле, следовательно, антигипоксическая активность бемитила подтверждается предлагаемым способом.
Испытание способа выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов провели по вышеприведенной методике, используя образцы крови 6 разных доноров (таблица). Получили, что при добавлении в хемилюминесцентную систему бемитила время появления максимума хемилюминесценции во всех случаях увеличивалось более чем на 10 мин по сравнению с контролем.
При оценке среднегрупповых значений получили, что в контроле время достижения максимума хемилюминесценции составило 151,3±5,1 мин, а добавление в хемилюминесцентную систему бемитила увеличивало время достижения максимума до 175,7±5,5 мин (различия между группами достоверны, р<0,05).
Таким образом, предложенный способ выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов позволяет проводить оценку in vitro, что упрощает процедуру исследования и не требует лабораторных животных. Способ может быть использован в экспериментальной фармакологии и клинической медицине для индивидуального подбора препаратов данной группы.
| Способ выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов | ||
| Время достижения максимума кинетической кривой (мин) | ||
| № | контроль | бемитил |
| 1 | 158 | 182 |
| 2 | 149 | 160 |
| 3 | 165 | 180 |
| 4 | 128 | 198 |
| 5 | 154 | 167 |
| 6 | 153 | 167 |
Способ выявления антигипоксической активности фармакологических препаратов, отличающийся тем, что в кювету для хемилюминесцентного анализа, содержащую питательную среду, кровь, люминесцентный зонд, добавляют исследуемый препарат и проводят хемилюминесцентный анализ, сравнивая показатели с контрольной кюветой, содержащей питательную среду, кровь, люминесцентный зонд, физиологический раствор, и, если время достижения максимума кинетической кривой в опытной кювете будет больше, чем в кювете сравнения на 10 мин, то исследуемый препарат обладает антигипоксическими свойствами.
