Способ диагностики трихинеллеза у экспериментально зараженных лабораторных животных

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к медицинской и ветеринарной гельминтологии. Для определения трихинеллеза у экспериментально зараженных лабораторных животных используют микроскопическое исследование. Пробы мышечной ткани животных, подвергнутые компрессии, исследуют на наличие, количество и жизнеспособность личинок трихинелл. При этом исследование проводят прижизненно. Масса биоптата из скелетных мышц составляет 1-1,5 мг. Компрессию биоптата осуществляют между двумя предметными стеклами, в процессе микроскопии мануально варьируют интенсивность компрессии и характер компрессии от постоянного до импульсивного. Повторное исследование биоптатов у животного проводят в разные сроки после заражения стандартными дозами инвазивного материала, используемыми при моделировании инвазии. Способ повышает информативность и ускоряет исследование экспериментально зараженных лабораторных животных трихинеллезом. 3 табл.

 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к медицинской и ветеринарной гельминтологии, и может быть использовано для диагностики экспериментального трихинеллеза в исследованиях на лабораторной модели инвазии патогенеза заболевания, взаимоотношений хозяин-паразит, при скрининге и изучении эффективности новых средств профилактики и лечения трихинеллеза человека, сельскохозяйственных и домашних животных.

Экспериментальные исследования по фундаментальным и прикладным проблемам трихинеллеза, актуального для всех стран мира, проводятся на лабораторной модели инвазии. Диагностика трихинеллеза у экспериментально зараженных лабораторных животных основана на известном способе компрессорной трихинеллоскопии (КТ), который осуществляется путем микроскопического исследования сдавленных в компрессории проб мышечной ткани подопытных животных. Однако этот способ, перенесенный из практической ветеринарии в экспериментальные исследования без существенных изменений со времени основополагающих рекомендаций [2, 3, 1], сопряжен с обязательным убоем животных и позволяет выявлять лишь инкапсулированные личинки трихинелл (ЛТ), что исключает возможность определения на морфологическом уровне в динамике качественных и количественных параметров инвазии на миграционной и мышечной фазах у одного и того же животного в разные сроки после заражения.

В качестве прототипа избрана работа А.С.Бессонова [1], в которой приведены следующие параметры традиционной КТ. У животного после убоя иссекают образец поперечно-полосатой мышцы (скелетные мышцы и диафрагма) массой около 1 г. Образец разделяют вдоль мышечных волокон на 24 пробы массой около 50 мг каждая. Пробы помещают в компрессории между двумя компрессорными стеклами (выполненными из зеркального стекла и снабженными скрепляющими винтами для создания компрессии), сдавливают и исследуют под микроскопом на наличие, количество и жизнеспособность ЛТ.

К недостаткам способа прототипа относятся следующие:

- ограниченная разрешающая способность (сдавливание в компрессории мышечной пробы массой 50 мг не создает оптимально тонкий слой пробы, достаточный для визуализации внутренней структуры и двигательной активности живых и погибших инкапсулированных ЛТ; постоянная интенсивность компрессии не приводит к вытеснению инкапсулированных ЛТ из их капсул вместе с жидким содержимым капсул за пределы мышечной пробы для максимальной визуализации освобожденных от капсул ЛТ; тот же режим компрессии не обеспечивает вытеснение тканевой жидкости из мышечной пробы вместе с новорожденными ЛТ и другими неинкапсулированными ЛТ разного возраста в краевую зону за пределы мышечной пробы для выявления ювенильных форм паразита);

- низкая информативность (ввиду ограниченной разрешающей способности выявляет лишь инкапсулированные ЛТ без четкой визуализации их внутренней структуры и двигательной активности; однократное посмертное применение исключает возможность определения в динамике особенностей развития, морфологических изменений и жизнеспособности паразитов у каждого животного в разные сроки после заражения; не выявляет новорожденные ЛТ и другие неинкапсулированные ЛТ разного возраста, что исключает возможность диагностики инвазии на миграционной и ранней мышечной фазах; следствием ограниченной разрешающей способности являются и поздние сроки диагностики заболевания - через 1-1,5 мес после заражения животных);

- трудоемкость и продолжительность осуществления (забор 24 мышечных проб массой 50 мг каждая и исследование их в компрессории общей продолжительностью до 1 часа) ограничивают удобство способа;

- высокая затратность экспериментальных исследований с применением традиционной КТ (поздняя диагностика, позволяющая выявлять инвазию через 30-40 дней после заражения животных, приводит к необходимости в продолжительных экспериментах длительностью до 3 мес на нескольких группах зараженных животных численностью 7-10 голов в группе, что сопряжено с удорожанием модели инвазии, большими затратами на приобретение лабораторных животных и их содержание).

Задачей изобретения является создание способа диагностики экспериментального трихинеллеза, обеспечивающего прижизненную диагностику инвазии на миграционной, ранней и поздней мышечных фазах, повышение информативности и ускорение исследования.

Предложенный способ основан на впервые выявленном феномене манифестации наличия инвазии и важнейших ее качественных и количественных параметров при микроскопическом исследовании в тонком слое малых проб скелетных мышц массой 1-1,5 мг у лабораторных животных, зараженных стандартными дозами инвазионного материала, обычно используемыми при моделировании трихинеллеза (10-15 декапсулированных ЛТ на 1 г массы тела животного).

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Исследуемое животное фиксируют. На месте предполагаемого разреза выстригают шерсть и проводят местную анестезию. Скальпелем или глазными ножницами рассекают кожу (длина разреза - 3-4 мм) и наружную фасцию до обнажения скелетной мышцы. Глазным пинцетом захватывают участок мышцы и отрезают от него глазными ножницами фрагмент массой 1-1,5 мг. Точность навески контролируют на аналитических торсионных весах. У каждого животного берут 1-10 проб из скелетных мышц одной или разных групп (массетер, бедренная, икроножная, корня хвоста и др.). После взятия мышечной пробы кожную и мышечную раны обрабатывают антисептическим раствором. Каждую мышечную пробу помещают между двумя предметными стеклами и подвергают микроскопии при малом увеличении микроскопа. В процессе микроскопии пробу подвергают мануальной компрессии в три последовательных этапа, характеризующихся разными интенсивностью и характером компрессии: 1) при слабой и постоянной компрессии, необходимой для умеренного сдавливания пробы, достигаются выявление и визуализация внутренней структуры всех живых, погибающих и погибших инкапсулированных ЛТ в пробе; у живых ЛТ выявляется двигательная активность в течение 10-15 мин после взятия пробы; 2) более интенсивная и импульсивная по характеру компрессия приводит к вытеснению всех живых инкапсулированных ЛТ из их соединительнотканных капсул (искусственное декапсулирование) вместе с жидким содержимым капсул в краевую зону за пределы мышечной пробы; у живых декапсулированных ЛТ двигательная активность повышается, максимально визуализируется их внутренняя структура; искусственное декапсулирование погибающих и погибших ЛТ не происходит; 3) дальнейшее повышение интенсивности импульсивной компрессии приводит к вытеснению тканевой жидкости из мышечной пробы вместе с новорожденными ЛТ (длиной 80-100 мкм) и другими неинкапсулированными ЛТ разного возраста в краевую зону за пределы мышечных волокон и обеспечивает визуализацию их количества, размеров, внутренней структуры и двигательной активности; некоторые не вытесненные из пробы новорожденные ЛТ просматриваются внутри мышечных волокон.

Ввиду существенных отличительных признаков, приведенных в таблице 1, заявляемый способ имеет следующие преимущества перед способом прототипа:

- высокая разрешающая способность (сдавливание между двумя предметными стеклами малой мышечной пробы массой 1-1,5 мг создает оптимально тонкий слой пробы, достаточный для визуализации внутренней структуры и двигательной активности живых, погибающих и погибших инкапсулированных ЛТ; постепенно повышаемая импульсивная компрессия малой мышечной пробы приводит к вытеснению инкапсулированных ЛТ из их капсул вместе с жидким содержимым капсул за пределы мышечной пробы и обеспечивает максимальную визуализацию структуры и двигательной активности освобожденных от капсул ЛТ; дальнейшее повышение интенсивности импульсивной компрессии приводит к вытеснению тканевой жидкости из мышечной пробы вместе с новорожденными ЛТ и другими неинкапсулированными ЛТ разного возраста в краевую зону за пределы мышечной пробы, что обеспечивает выявление количества, морфологических особенностей и двигательной активности ювенильных форм паразита; при том же режиме компрессии выявляются новорожденные ЛТ внутри мышечных волокон);

- высокая информативность (благодаря повышенной разрешающей способности выявляет количество, морфологические параметры, двигательную активность неинкапсулированных и инкапсулированных ЛТ разного возраста, что обеспечивает диагностику инвазии на миграционной и мышечной фазах; прижизненное применение позволяет определять в динамике индивидуальные особенности инвазии у каждого зараженного животного на протяжении всей его жизни начиная с 8-го дня после заражения, а именно сроки начала и окончания миграционной фазы, элиминации кишечных трихинелл, формирования соединительнотканной капсулы, что повышает точность диагностики и расширяет ее возможности);

- малая трудоемкость и быстрое осуществление (забор 1-10 мышечных проб массой 1-1,5 мг каждая, микроскопия каждой пробы в течение 2-8 мин) повышают удобство исследования;

- ускорение и снижение затратности исследований с применением заявляемого способа (ранняя прижизненная диагностика, позволяющая выявлять инвазию через 6-8 дней после заражения животных, и повышенная информативность исследования позволяют проводить скоротечные эксперименты, такие как скрининг противотрихинеллезных препаратов длительностью до 1 недели на ограниченном количестве животных в группах численностью в 3-5 голов каждая, что обеспечивает экономию животных, повышение рентабельности модели инвазии, ускорение и продуктивность экспериментальных исследований).

Таблица 1 Сравнительная характеристика способов компрессорной трихинеллоскопии (КТ) и прижизненной диагностики (ПД) у экспериментально зараженных лабораторных животных
Отличительный признак	Способы
КТ (прототип)	ПД (заявляемый)
Применение метода	посмертное	прижизненное
Максимальная масса пробы мышечной ткани (ПМТ), мг	50	1,5
Минимальное число ПМТ	24	1
Инструменты	пинцет, ножницы	глазные пинцет и ножницы
Приспособление, обеспечивающее компрессию ПМТ	компрессорий	два предметных стекла
Степень и характер компрессии	постоянная	мануальная, постепенно повышаемая, импульсивная
Срок от начала взятия ПМТ до начала ее исследования, мин	20-30	1
Продолжительность исследования ПМТ, мин	15-20	2-8 (в зависимости от фазы инвазии)
Возможность визуализации нормальной структуры, деструктивных изменений и двигательной активности инкапсулированных личинок трихинелл (ИЛТ) в ПМТ	отсутствует (из-за ограниченной компрессии ПМТ, исследуемой в толстом слое)	имеется (благодаря интенсивной компрессии малой массы ПМТ, исследуемой в тонком слое)
Возможность искусственного декапсулирования всех ИЛТ в ПМТ для повышения точности тестирования жизнеспособности каждой личинки	исключена (из-за большой массы ПМТ и недостаточной ее компрессии для вытеснения личинок из капсул)	реализуется (благодаря импульсивной компрессии ПМТ, обеспечивающей вытеснение каждой живой личинки из капсулы за пределы ПМТ)
Возможность выявления, количественной характеристики, визуализации нормальной структуры, деструктивных изменений и двигательной активности неинкапсулированных личинок трихинелл (НЛТ)	исключена (ввиду недостаточной компрессии для вытеснения из ПМТ тканевой жидкости вместе с НЛТ)	реализуется (благодаря компрессии ПМТ, обеспечивающей вытеснение НЛТ с тканевой жидкостью за пределы ПМТ)
Пригодность способа для определения сроков начала и окончания миграционной фазы инвазии	не пригоден (так как с помощью компрессория новорожденные личинки не выявляются)	пригоден (благодаря тому, что он обеспечивает раннее выявление новорожденных личинок)
Определение наличия, интенсивности, фазы инвазии и жизнеспособности личинок у одного и того же животного в динамике на протяжении всей его жизни	исключено (ввиду того, что ПМТ исследуют посмертно)	реализуется (благодаря возможности многократного прижизненного исследования ПМТ на протяжении всей жизни животного)
Минимальный срок выявления инвазии после заражения животных, дни	30-40	6-8

Опыт 3-летнего применения предлагаемого способа в лаборатории экспериментальной химиотерапии ИМПиТМ им. Е.И.Марциновского ММА им. И.М.Сеченова в исследованиях по скринингу и изучению эффективности новых средств профилактики и лечения трихинеллеза на лабораторной модели инвазии показал, что биопсия легко переносится зараженными трихинеллезом лабораторными животными разных видов (около 4 тыс. биопсий у белых мышей и крыс, золотистых хомяков и хлопковых крыс). Полное заживление кожной раны происходит через 4-5 дней после взятия мышечной пробы. При необходимости повторные биопсии у одного и того же животного проводили в течение продолжительных специальных исследований длительностью до 1 года.

Эффективность предлагаемого способа иллюстрируют следующие примеры.

Пример 1. При экспериментальном трихинеллезе белых мышей оценивали терапевтическую активность оригинальной масляной суспензии микронизированного мебендазола (МСММ)* (* Состав и способ получения МСММ является предметом отдельной патентной заявки) с помощью способа прижизненной диагностики инвазии. Штамм Trichinella spiralis (выделенный от спонтанно инвазированной свиньи в Белоруссии), был получен из ВИГИС. 7 аутбредных мышей обоего пола в возрасте 1,5-2 мес средней массой тела 24,8 г заражали в желудок (с помощью шприца и канюли) декапсулированными ЛТ (выделенными методом пептического переваривания из скелетных мышц и диафрагмы экспериментально зараженной мыши-донора) в дозе инвазионного материала 10 ЛТ на 1 г средней массы тела животных (248 ЛТ на 1 животное). Через 47 дней после заражения каждую мышь взвешивали на коммерческих весах ВНЦ-2 с точностью до 1 г и метили индивидуальной меткой. 4-м мышам экспериментальной группы средней массой тела 31,8 г вводили в желудок по 0,2 мл МСММ (концентрация ДВ - 5,0 мг/мл) 3 раза в день в течение 5-ти дней подряд (средняя суточная доза ДВ - 0,1 г/кг; средняя суммарная доза ДВ - 0,5 г/кг). Остальные 3 зараженные мыши средней массой тела 32,4 г служили контролем инвазивности ЛТ. У животных экспериментальной группы в течение 5-ти дней лечения ежедневно определяли индивидуальную массу тела с точностью до 1 г и исследовали биоптат из мышц икроножной группы. У контрольных животных аналогичные биоптаты исследовали однократно через 52 дня после заражения. Биопсию и исследование мышечных проб осуществляли следующим способом. Животное фиксировали, выстригали шерсть на коже в области икроножных мышц и проводили местную анестезию (подкожная инъекция 0,1 мл 1%-ного лидокаина). Скальпелем или глазными ножницами рассекали кожу (длина разреза - 3-4 мм) и наружную фасцию до обнажения скелетной мышцы. Глазным пинцетом захватывали участок мышцы и отрезали от него глазными ножницами фрагмент массой 1-1,5 мг. Точность навески контролировали с помощью аналитических торсионных весов типа ВТ. После взятия мышечной пробы кожную и мышечную раны обрабатывали 5%-ной спиртовой настойкой йода. Пробу помещали между двумя предметными стеклами и подвергали микроскопии при малом увеличении микроскопа. Срок от момента взятия пробы до начала ее исследования составлял 1 мин. Продолжительность исследования пробы не превышала 5 мин. В процессе микроскопии пробу подвергали мануальной компрессии разных характера и интенсивности в два последовательных этапа: 1) при слабой и постоянной компрессии выявляли наличие, количество, морфологические особенности, двигательную активность живых, погибающих и погибших инкапсулированных ЛТ в пробе; 2) при более интенсивной и импульсивной компрессии осуществляли искусственное декапсулирование и вытеснение живых ЛТ в краевую зону за пределы пробы, где определяли количество, морфологические особенности и двигательную активность свободных ЛТ.

У всех леченых животных биопсию проводили ежедневно в течение 7-ми дней после начала лечения и в день вскрытия (через 32 дня после начала лечения). Убой всех леченых мышей и исследование у них скелетных мышц и диафрагмы на наличие, количество и жизнеспособность ЛТ проводили с помощью традиционной КТ для подтверждения излечения животных от инвазии. Контрольных мышей оставляли живыми и использовали в других экспериментах.

Результаты опыта, приведенные в таблице 2, показали, что МСММ обладает быстрым губительным действием на инкапсулированные ЛТ. Гибель единичных ЛТ в мышечных пробах была отмечена уже через 2 дня после начала лечения. В последующие дни число погибших ЛТ в пробах прогрессивно возрастало и достигало через 3 и 4 дня после начала лечения в среднем 43,4% и 74,6% соответственно от всех ЛТ, выявленных в пробе. Гибель всей популяции ЛТ у леченых мышей установлена через 5 дней после начала лечения. В более поздние сроки в биоптатах из мышц леченых животных выявлялись только погибшие ЛТ. Высокая эффективность химиотерапии мышей подтверждена результатами исследования скелетных мышц и диафрагмы с помощью традиционной КТ у леченых животных, вскрытых через 32 дня после начала лечения. По данным КТ интенсивность инвазии у леченых мышей, определенная по икроножным мышцам, массетеру и диафрагме, составляла в среднем соответственно 7,84, 11,32 и 13,74 тыс. ЛТ на 1 г мышечной ткани; все выявленные ЛТ были погибшими.

При исследовании прижизненных биоптатов из скелетных мышц леченых животных во время лечения и после его окончания признаками гибели инкапсулированных ЛТ были следующие: развернутое положение, утолщение, сглаженность структуры, отсутствие двигательной активности, размытость контуров или исчезновение стихоцитных клеток и потемнение тела паразита; помутнение, зернистость и потемнение содержимого капсулы, утрата четкости ее контуров; ЛТ не поддавались искусственному декапсулированию.

Инвазивность штамма трихинелл, использованного для заражения мышей, подтверждена результатами исследования прижизненных биоптатов из скелетных мышц животных контрольной группы. В мышечных пробах контрольных животных все выявленные ЛТ были живыми, развернутыми и проявляли двигательную активность внутри капсулы в течение 10-15 мин после взятия пробы. Затем ЛТ постепенно сворачивались в характерную тугую спираль в течение 52-60 мин после взятия пробы и становились неподвижными. После искусственного декапсулирования ЛТ разворачивались, их двигательная активность возобновлялась. Капсула была прозрачной, ее контуры были четко очерчены. Стихоцитные клетки ЛТ четко визуализировались.

Пример 2. Оценивали протективную активность оригинального препарата на основе новых паразитарных антигенов (НПА)* (* Состав и способ получения НПА является предметом отдельной патентной заявки) при экспериментальном трихинеллезе белых крыс с помощью способа прижизненной диагностики инвазии. Протективный эффект определяли в двух опытах, которые характеризовались разными режимами иммунизации, кратностью и дозами инвазионного материала, использованного для контрольного заражения животных. Всего в двух опытах использовали 34 аутбредные крысы обоего пола массой тела 110-140 г.

В первом опыте использовали 18 крыс массой тела 120-140 г. 7-ми крысам экспериментальной группы вводили НПА внутрибрюшинно 3-кратно с интервалами между введениями в 24 дня. 11 крыс служили контролем. Контрольное заражение животных обеих групп проводили на 17-й день после последней иммунизации путем введения в желудок каждому животному по 2000 декапсулированных ЛТ.

Во втором опыте использовали 16 крыс массой тела 110-135 г. 8-ми крысам экспериментальной группы вводили НПА внутрибрюшинно 3-кратно с интервалами между введениями в 26 и 28 дней. Протективную активность НПА оценивали после 5-ти последовательных контрольных заражений животных обеих групп начиная с 14-го дня после последней иммунизации в возрастающих дозах инвазионного материала от 2200 до 5940 декапсулированных ЛТ на 1 крысу. Интервалы между заражениями составляли 13-65 дней.

Прижизненную диагностику инвазии у иммунизированных и контрольных крыс в обоих опытах путем микроскопического исследования биоптатов из мышц икроножной группы и (или) массетера осуществляли у каждого животного начиная с 6-го дня после заражения в течение 1-1,5 мес инвазии. У каждого животного брали по 1-10 мышечных проб так же, как в примере 1. Микроскопию каждой пробы проводили в три последовательных этапа: 1) при слабой и постоянной компрессии пробы выявляли живые инкапсулированные ЛТ, определяли их количество, размеры, морфологические особенности и двигательную активность; 2) при более интенсивной и импульсивной компрессии подтверждали жизнеспособность свободных ЛТ после их искусственного декапсулирования; 3) при дальнейшем повышении интенсивности импульсивной компрессии выявляли наличие, количество, размеры, морфологические особенности и двигательную активность новорожденных ЛТ и других неинкапсулированных ЛТ разного возраста. Эффективность прижизненной диагностики подтверждали результатами посмертной КТ скелетных мышц и диафрагмы иммунизированных и контрольных крыс, вскрытых через 51-89 дней после заражения. По данным прижизненной и посмертной диагностики инвазии рассчитывали значение протективной активности (ПА) в процентах по формуле:

ПА=СЧЛТк-СЧЛТи/СЧЛТк•100,

где СЧЛТк и СЧЛТи - среднее число ЛТ на 1 г мышечной ткани у контрольных и иммунизированных животных соответственно.

Результаты двух опытов, приведенные в таблице 3, показали, что прижизненное диагностическое исследование не выявило ЛТ у всех 15-ти иммунизированных крыс, тогда как у всех 17-ти контрольных животных установлена гиперинвазия ЛТ (ПА=100%). В первом опыте у контрольных крыс определены в динамике количественные и качественные параметры инвазии при однократном заражении трихинеллезом (без специфических отклонений за счет последовательных 5-кратных заражений, имевших место в опыте №2): начало миграционной фазы - 6-8 дней после заражения (ранний срок выявления новорожденных ЛТ); окончание миграционной фазы и элиминация кишечных трихинелл - 31-38 дней после заражения (максимально поздний срок выявления новорожденных ЛТ); начало формирования соединительнотканной капсулы вокруг ЛТ - 18-23 дня после заражения (ранний срок выявления инкапсулированных ЛТ); фаза инкапсулирования всех ЛТ - 29-37 дней после заражения (максимально поздний срок выявления неинкапсулированных ЛТ); средняя интенсивность инвазии - 2,12 тыс ЛТ на 1 г мышечной ткани (на стадии стабилизации количества прижившихся инкапсулированных ЛТ).

Таблица 3 Результаты оценки протективной активности (ПА) препарата на основе новых паразитарных антигенов (НПА) при экспериментальном трихинеллезе аутбредных крыс с помощью способов прижизненной диагностики (ПД) инвазии и последующей посмертной компрессорной трихинеллоскопии (КТ)
№ опыта	Группа животных	Число животных	Показатели наличия и интенсивности инвазии, определенные способами
			ПД	КТ
			наличие личинок трихинелл (ЛТ) в биоптатах из скелетных мышц	интенсивность инвазии, среднее число ЛТ на 1 г ткани
диафрагмы	массетера	икроножных мышц
1*	Иммунизированные НПА	7	не выявлены	4,97±3,48	0,94±0,39	-
	Контрольные	11	выявлены	4293,8±913,2	2581,6±526,6	-
ПА, %	100	99,88	99,96	-
2**	Иммунизированные НПА	8	не выявлены	2,74±2,69	3,84±3,20	3,07±3,06
	Контрольные	6	выявлены	5098,6±987,5	4679,3±1039,6	2719,2±907,3
ПА, %	100	99,95	99,92	99,89
* - В опыте №1 иммунизированным крысам вводили внутрибрюшинно НПА 3-кратно с интервалом между инъекциями в 24 дня. Иммунизированных и контрольных животных заражали в желудок декапсулированными ЛТ в дозе инвазионного материала 2000 ЛТ на 1 крысу на 17-й день после последней иммунизации. Животных обеих групп вскрывали через 75-83 дня после заражения.
** - В опыте №2 иммунизированным крысам вводили внутрибрюшинно НПА 3-кратно с интервалами между инъекциями в 26 и 28 дней. Иммунизированных и контрольных животных заражали 5-кратно в желудок декапсулированными ЛТ с 14-го дня после последней иммунизации. Интервалы между заражениями составляли 13-65 дней. Дозы инвазионного материала варьировали в пределах 2200-5940 ЛТ на 1 крысу. Животных обеих групп вскрывали через 51-89 дней после последнего заражения.

Результаты традиционной посмертной КТ подтвердили высокую протективную активность НПА при экспериментальном трихинеллезе белых крыс в двух опытах (ПА, определенная по трем группам мышц, составила 99,88-99,96%); при этом у 5-ти (33,3%) из 15-ти иммунизированных крыс в двух опытах все исследованные мышцы были свободны от ЛТ. Применение способа прижизненной диагностики позволило тестировать целевой эффект НПА уже с 8-го дня инвазии, тогда как при использовании КТ определение эффективности НПА было возможным не ранее чем через 1-1,5 мес после заражения животных.

Таким образом, заявляемый способ обеспечивает диагностику экспериментального трихинеллеза на миграционной и мышечной фазах инвазии и позволяет осуществлять контроль за качественными и количественными параметрами инвазии в динамике у каждого зараженного животного в норме и под влиянием лечебных и профилактических средств. Его применение позволяет повысить информативность, снизить затратность и ускорить экспериментальные исследования по проблемам трихинеллеза фундаментального и прикладного характера.

Источники информации

1. Бессонов А.С. Диагностика трихинеллеза. - Вильнюс: Минтис. - 1975. - 380 с.

2. Reissman E. Kann die Trichinenschau ohne sanitaren Nachteil bescharankt und verbilligt warden // Fleisch und Milchhyg. - 1908. - V.19 (1). - P.1-9.

3. Strobel H. Die Serodiagnostik der Trichinosis // Munch. med. Wochenschr. - 1911. - V.58. - P.672.

Способ определения трихинеллеза у экспериментально зараженных лабораторных животных, включающий микроскопическое исследование подвергнутых компрессии проб мышечной ткани животных на наличие, количество и жизнеспособность личинок трихинелл, отличающийся тем, что исследование проводят прижизненно, масса биоптата из скелетных мышц составляет 1-1,5 мг, компрессию биоптата осуществляют между двумя предметными стеклами, в процессе микроскопии мануально варьируют интенсивность компрессии и характер компрессии от постоянного до импульсивного, повторное исследование биоптатов у животного проводят в разные сроки после заражения стандартными дозами инвазивного материала, используемыми при моделировании инвазии.