Сукцинат ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(n-изопропиламино)пропана, обладающий антиаритмической активностью

Изобретение относится к медицине, конкретно к новому соединению - сукцинату ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино)пропана (1), обладающему антиаритмической и антигипертензивной активностью.

Соединение (1) синтезировано в три стадии. На первой стадии к раствору 2,6-ди-трет-бутилфенола в трихлорэтилене добавляют этиленхлоргидрин и четыреххлористое олово. Полученное соединение нагревают далее с изопропиламином, что приводит к образованию соответствующего амина. Конечный продукт, сукцинат (1), получен смешиванием растворов амина и янтарной кислоты в ацетоне, из которого сукцинат (1) выпадает в виде белых кристаллов. 2 табл.

 

Изобретение относится к медицине, конкретно к новому химическому соединению, а именно к производному пространственно затрудненных аминоалкилфенолов формулы (1), которое обладает высоким антиаритмическим действием, связанным с блокадой катехоламиновых рецепторов, и проявляет антигипертензивную активность.

В настоящее время достигнуты значительные успехи в разработке как антиаритмических, так и антигипертензивных препаратов, относящихся к различным классам химических соединений. В то же время для усовершенствования терапии и профилактики различного рода сердечно-сосудистых заболеваний необходимо создание новых лекарственных средств, эффективно действующих в значительно меньших дозах, чем известные.

Заявляемое соединение относится по структуре к группе ароматических биологически активных соединений, содержащих в соседних положениях алифатической цепочки заместителя гидроксильную и аминогруппу [Б.Ф.Хоффман. Средства, активирующие адренорецепторы, и другие симпатомиметрические средства. В книге Б.Г.Кангцунг. Базовая и клиническая фармокология. 2000. Т.1 С.151-189.]. Близким аналогом по биологическому действию является метопролол, который является кардиоселективным β₁-адреноблокатором без внутренней симпатомиметической активности [Лекарственные препараты зарубежных фирм в России. Справочник. М.: Астрафармсервис.1993. Метопролол. С.381-382]. Этот препарат оказывает антигипертензивное, антиангинальное и антиаритмическое действие, понижает автоматизм синусового узла, уменьшает ЧСС, замедляет AV-проводимость, снижает сократимость и возбудимость миокарда, уменьшает минутный объем сердца, снижает потребность миокарда в кислороде, а также подавляет стимулирующее влияние катехоламинов на сердце при физической и психоэмоциональной нагрузке [В.И.Подзоликов, В.В.Самойленко, К.К.Осадчий, Л.А.Стрижаков. Применение метопролола CR/ZOK в кардиологической практике. // Терапевтический архив. 2000. №9. С.78-80].

Задачей изобретения является создание нового химического соединения, обладающего низкодозной высокой антиаритмической активностью по отношению к различным видам аритмий и проявляющего в низких концентрациях дополнительно антигипертензивный эффект.

Поставленная задача решается новым химическим соединением формулы 1, обладающим высокой антиаритмической активностью.

Соединение (1) синтезировано химическим путем в три стадии исходя из промышленно доступного 2,6-ди-трет-бутилфенола.

На первой стадии к раствору 2,6-ди-трет-бутилфенола в трихлорэтилене при температуре около 0°С порциями добавляют этиленхлоргидрин и четыреххлористое олово. Полученное с выходом 52% соединение (2) нагревают далее с изопропиламином, что приводит к амину (3) с 50%. Конечный продукт, сукцинат (1), получен с выходом 85% смешиванием растворов амина (3) и янтарной кислоты в ацетоне, из которого сукцинат (1) выпадает в виде белых кристаллов.

Биологическая активность соединения (1) изучалась путем определения токсичности, антиаритмической активности на моделях хлоридкальциевой и адреналиновой аритмии, а также антигипертензивного эффекта.

Острую токсичность определяли на белых беспородных мышах массой 18-22 г при пероральном введении в дозах от 50 мг/кг до 1 г/кг. Параметры токсичности рассчитывали по методу Кербера. LD₅₀ для соединения (1) они составили 158 мг/кг и LD₁₀₀-200 мг/кг.

Для исследования антиаритмической активности заявляемого соединения были использованы стандартные модели экспериментальных аритмий: адреналиновая (0,3 мг/кг, внутривенно) и хлоридкальциевая (250 мг/кг, внутривенно) на крысах. Для определения величины активности оценивали параметры электрокардиограммы [значения частоты сердечных сокращений и амплитуду зубца RR]. Полученные данные представлены в таблице 1.

Таблица 1.
Данные фармакологических показателей для различных видов аритмий
Препарат, мг/кг	LD50 мг/кг	ЭД50, мг/кг
CaCl2 - аритмия	Адреналиновая аритмия
Исследуемый агент(1)	49	1,5	0,0015
Метопролол	70	3	0,15

Из данных табл.1 видно, что введение агента в дозе 0,0015 мг/кг предотвращает развитие аритмии, вызванной введением адреналина, и восстанавливает ЭКГ до нормы у 50% крыс. Исследование антиаритмической активности на хлоридкальциевой аритмии показало эффективность изучаемого агента в 50% случаях в дозе 1,5 мг/кг. В этом случае его эффективность в два раза выше, чем у метопролола.

Введение исследуемого агента в дозе 0,015 мг/кг блокирует развитие адреналиновой аритмии у 100% исследуемых животных. Как видно из таблицы, по сравнению с препаратом сравнения он показывает в целом более выраженные антиаритмические свойства.

Антигипертензивный эффект определяли при внутривенном введении агента в бедренную вену во время мониторинга давления путем введения датчика в сонную артерию крыс линии Вистар массой 180-220 г. Полученные результаты приведены в табл.2.

Таблица 2.
Данные фармакологических показателей при исследовании антигипертензивной активности.
Препарат	Доза агента (мг/кг)	Нативное давление (мм. рт.ст.)	Доза агента (мг/кг)	Давление после введения агента (1) через 5 минут (мм рт.ст.)	% снижения
Систолическое	Диастолическое	Систолическое	Диастолическое
Агент (1)	-	152±10	130±12,3	0.015	135,2±9,3	130,2±9,3	12

Из таблицы 2 видно, что агент снижает давление в дозе 0,015 мг/кг на 12% от исходной величины у крыс с нормальным артериальным давлением. Снижение давления наблюдалось через 5 минут после введения исследуемого вещества в бедренную вену. Увеличение дозы соединения (1) в этом эксперименте не приводит к более заметному снижению артериального давления у животных.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение сукцината ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино)пропана (1).

Стадия А. Получение 3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидроксихлорпропана-1 (2). В стеклянную колбу с мешалкой и капельной воронкой помещают раствор 20 г 2,6-ди-трет-бутилфенола в 20 мл трихлорэтилена. К охлажденному раствору до -3°С прибавляют при перемешивании 4 мл перегнанного SnCl₄ и при этой температуре в течение 30 минут в реактор медленно прибавляют 6 мл эпихлоргидрина. В реактор помещают новую порцию 4 мл SnCl₄ и при температуре 0-3°С в течение 30 минут в реактор прибавляют новую порцию раствора 5 мл эпихлоргидрина в 4 мл трихлорэтилена, следя за тем, чтобы температура в реакторе не повышалась выше 5-7°С. В реактор вводят новую порцию 4 мл SnCl₄ и в течение 40 минут в реактор вводят раствор 5 мл эпихлоргидрина в 4 мл трихлорэтилена при температуре в реакторе не выше 5°С. Затем реакционную массу выдерживают при перемешивании при температуре 10-15°С в течение 20 мин, после чего в реактор небольшими порциями вводят 20 мл охлажденной воды, следя за тем, чтобы температура реакционной массы не превышала комнатную. Органический слой отделяют, промывают водой до нейтральной реакции и упаривают растворитель. Из полученного масла отгоняют под вакуумом 4,6 г не вступившего в реакцию 2,6-ди-трет-бутилфенола. Кубовый остаток - масло (20 г) - растворяют в 10 мл петролейного эфира и полученный раствор выдерживают сутки при температуре -15°С. Осадок отфильтровывают и промывают 10 мл охлажденного петролейного эфира. Получают 13,9 г 3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-хлорпропана (2). Объединенные фильтраты упаривают и перегоняют под вакуумом, собирая 3,7 г фракции с т.кип. 160°С/1 мм рт.ст. Ее кристаллизуют из гексана и получают дополнительно 2,1 г соединения (2) с т.пл. 97-98°С. Общий выход соединения (2) 16 г (53%). Найдено, %: С 68. 56; Н 9.34; Cl 11.90. ММ (хромато-масс-спектрометрически) 283. Вычислено, %: С 68,5; Н 9.1; Cl 11,9. ММ 283. ПМР-спектр (в CDCI₃: 1,45 с.18 Н (две трет-С₄Н₉-группы); 2.31 с. 1H (-СНОН); 2.81 д. 2Н (PhCH ₂); 3.5-3.7 м. (-CH ₂Cl); 4.02 м. 1Н (-CHOHCH₂Cl); 5.16 с. 1Н (ArOH); 7.03 с. 2Н (Ar-H).

Стадия Б. Получение 3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино) пропана (3). В стальной вращающийся автоклав вместимостью 0,2 л помещают раствор 9,18 г (0,03 мол) (4-(3-хлор-2-гидроксипропил)-2,6-ди-трет-бутилфенола (2) в 30 мл изопропанола, 20 мл изопропиламина (0,23 мол). Содержимое выдерживают при вращении 12 часов при температуре 100°С. Затем упаривают на ротационном испарителе и получают 8,5 г твердого коричневого остатка, который растворяют в метил-трет-бутиловом эфире и встряхивают в течение 5 минут с раствором 1,3 г NaOH в 10 мл воды. Органический слой упаривают и получают смесь кристаллов с маслом, из которого масло отделяют на фильтре. Твердый остаток кристаллизуют из петролейного эфира и получают 5 г (выход 50%) белых кристаллов соединения (3), т.пл. 90-91°С. Найдено, %: С 74,10; Н 11,20; N 4,26. М 321 (хромато-масс-спектрометрически). Вычислено, %: С 74,6: Н 10,9; N 4,35. С₂₀Н₃₅О₂ N. М 321,2668. ПМР - спектр в (CD₃)₂SO, δ, м.д., J/Гц): 0,95 (д. J=7.5, 6Н, (СН₃)₂СН-); 1,40 (с.18 Н 2С₄Н₉-трет.); 2,6-2,7 (т. J=7.0, 2Н ArCH₂-); 3,5-3,6 (м. 1Н -СН₂ СНОН-) Спектр ¹³С в растворе (CD₃)₂SO, δ, м.д.): С^6' и С^7' 22,8; С⁷ 30,47; С⁸ 34,30; С^1' 41,72; С^3' 48,19; С^5' 53,9; С^2' 70,92; С³ и С⁵ 125,29; С¹ 130,17; С² и С⁶ 138,67; С⁴ 151,85.

Стадия В. Получение сукцината ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино)пропана (1). При температуре 50°С при перемешивании готовят раствор 4,0 г соединения (3) в 20 мл изопропанола. К нему прибавляют раствор 0,72 г янтарной кислоты в 20 мл изопропанола и смесь растворов выдерживают при перемешивании 1 ч при 50°С, а затем оставляют на ночь при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 5 мл изопропанола и сушат на воздухе. Получают 4,0 г (85%) белого вещества - сукцината (1), растворяющегося при комнатной температуре в воде. Т.пл. 186-189°С. Найдено, %: С 68,70; Н 10,00; N 3,68. М 761 (методом парофазной осмометрии). C₄₄H₇₆O₈N₂. Вычислено, %: С 69,00; Н 10,00; N 3,60. М 760,1. ИК-спектр в KBr, v/см^-1: 651,8 (ср.), 1137 (ср.), 1155 (ср.), 1382 (c.), 1435 (c.), 1638,5 (ср.), 2456 (ср.), 2915 (c.), 3641 (ср.).

ПМР-спектр в растворе CD₃OD(δ, м.д., J/Гц): 1,30 (т. J=6,5, 6Н, 2СН₃, Н^6' и Н^7'), 1,45 (с. 18Н 2C₄H₉-трет. Н⁹), 2,50 (с.4Н -СН₂СН_2-, Н¹⁰), 2,71-2,81 (кв. кв. 2Н, Н^1'), 2,84-2,90 (д.д. J=11, 1Н, Н^3'), 2,29-3,05 (д.д. J₁=4, J₂=11, 1H, Н^3'), 3,28-3,34 (м. 1Н, Н^5'), 4,00-4,08 (м., 1Н, Н^2'), 4,93 (с. 1Н, ArOH), 7,06(с. 2Н, Н² и Н⁶).

Спектр ¹³С в растворе (CD₃OD, δ м.д.): С^6' 19,2; С^7' 19,7; С⁷ 30,8; С¹⁰ 34,4; С⁸ 35,4; С^1' 42,9; С^3' 50,9; С^5' 51,3; С^2' 70,0; С³ и С⁵ 126,8; C¹ l29,4; С² и С⁶ 139,4; С⁴ 153,9; С⁹ 181,7.

Пример 2. Изучение антиаритмической активности сукцината ди-3-(3,5-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино)пропана.

Опыты проводили на наркотизированных (тиопентал натрия в дозе 30 мг/кг внутрибрюшинно) половозрелых самцах крыс массой 190-220 г. Все манипуляции проводили в соответствии с правилами и принципами гуманного обращения с животными. Опыты проводились в одно и то же время с 9⁰⁰ до 12⁰⁰. Для выполнения исследований животных разделяли на группы по 10 особей в каждой. Изучение антиаритмической активности агента проводили при внутривенном введении агента в дозах 1,5 мг/кг, 0,015 мг/кг и 0,0015 мг/кг. Аритмию вызывали путем однократного введения в бедренную вену 10% раствора CaCl₂ в дозе 250 мг/кг или адреналина гидрохлорида (АГ) в дозе 0,3 мг/кг. Данные дозы CaCl₂ и АГ являются летальными для крыс в 100% случаях.

Запись ЭКГ проводилась в течение 10 мин. ЭКГ регистрировали во втором стандартном отведении на приборе фирмы «LabLinc V» model v75-11. Оценивали длительность интервалов RR, PQ, QRS, QT, зубца Р; амплитуду зубцов Р, Т, R. Обработка данных велась программой "Statistica 6.0", используя параметрический анализ Стьюдента. В качестве отклонения от среднего значения использовалась средняя статистическая ошибка. Полученные данные представлены в таблице 1.

Пример 3. Изучение антигипертензивных свойств сукцината ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино) пропана.

Измерение артериального давления проводили в остром эксперименте путем введения канюли в сонную артерию. Регистрацию показателей вели с помощью прибора фирмы «Coulbourn instruments)) (США). Обработку данных вели с помощью программы "Statistica 6.0" посредством усреднения основных показателей систолического и диастолического артериального давления. В качестве отклонения от среднего значения использовалась средняя статистическая ошибка, в качестве критерия достоверности был взят t-критерий Стьюдента. Полученные данные представлены в таблице 2.

Из данных следует, что соединение в одной и той же низкой дозе 0,015 мг/кг является эффективным антиаритмическим и антигипертензивным агентом.

Таким образом, новое соединение - сукцинат ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино) пропана - обладает высокой антиаритмической активностью на моделях хлоридкальцевой и андреналиновой аритмии. Соединение проявляет достоверную антиаритмическую активность на модели адреналиновой аритмии в дозе 0.0015 мг/кг. Кроме того, соединение обладает антигипертензивной активностью в дозе 0.015 мг/кг.

Способ получения заявляемого соединения (1) отличается доступностью реагентов и простотой технологического оформления. Как само соединение (1), так и промежуточные соединения его синтеза (2) и (3) - являются новыми.

Сукцинат ди-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-2-гидрокси-1-(N-изопропиламино)пропана формулы (I):

обладающий антиаритмической активностью.