Способ создания модели частичной атрофии зрительного нерва

Изобретение относится к медицине, офтальмологии и может быть использовано для создания модели частичной атрофии зрительного нерва. Для этого внутривенно вводят кролику фотосенсибилизатор хлоринового ряда в дозе 2,4 мг/кг веса. Через 15 минут транспупиллярно проводят лазерное облучение диска зрительного нерва с плотностью энергии 200-250 Дж/см². При этом диаметр пятна лазерного излучения 5 мм. Заявленный способ позволяет расширить арсенал средств создания модели частичной атрофии зрительного нерва. 5 ил.

 

Изобретение относится к медицине, а точнее к офтальмологии, и может быть использовано в экспериментальной офтальмологии для моделирования частичной атрофии зрительного нерва с целью оценки эффективности различных способов лечения данной патологии.

Атрофия зрительного нерва (АЗН) является одной из самых распространенных и прогностически неблагоприятных поражений органа зрения, приводящих к значительному необратимому снижению зрительных функций. Данное заболевание является последствием весьма разнообразных патологических процессов: воспаления, дегенеративных изменений, отека, сдавления и повреждении ЗН. Различают приобретенную АЗН, которая возникает в результате повреждения зрительного нерва, и врожденную, генетически обусловленную. В основании патогенеза АЗН лежат два основных процесса: распад нервных волокон и заместительные процессы. Атрофированные нервные волокна впоследствии замещаются соединительной тканью. Наряду с этим происходит нарушение кровообращения зрительного нерва - запустевают капилляры, питающие пораженные участки. В результате этих изменений атрофия приводит к истончению зрительного нерва. Состояние зрительных функций при этом зависит как от локализации, так и от интенсивности склеротического процесса.

Для поиска новых методов лечения АЗН и оценки их эффективности необходимо создать экспериментальную модель АЗН.

Известно создание модели частичной атрофии зрительного нерва в серии экспериментов на зрительном нерве животных (кролики, крысы, лягушки) с помощью механического сдавления, гематомы в области зрительного нерва, химического воздействия этиловым и метиловым спиртами (Голубцов К.В., Кругов С.В., Куман И.Г. и др. Применение электрического тока в диагностике и лечении патологии зрительного нерва и сетчатки // http://www.rmj.ru/articles_4682.htm).

Задачей изобретения является расширение арсенала способов создания модели частичной атрофии зрительного нерва.

Техническим результатом заявляемого способа является развитие частичной атрофии зрительного нерва.

Технический результат достигается за счет того, что кролику внутривенно вводят фотосенсибилизатор хлоринового ряда в дозе 2,4 мг/кг веса, через 15 минут транспупиллярно проводят лазерное облучение диска зрительного нерва с плотностью энергии 200-250 Дж/см², диаметр пятна лазерного излучения - 5 мм.

Изобретение поясняется следующими данными и чертежами.

Экспериментальные исследования были проведены на 10 кроликах (10 глаз) породы шиншилла, массой 1,5-2,0 кг. Экспериментальным животным внутривенно (в ушную вену) вводили фотосенсибилизатор хлоринового ряда, например, «Фотодитазин», или «Фотолон», или «Радахлорин» в дозе 2,4 мг/кг веса, через 15 минут транспупиллярно проводили лазерное облучение диска зрительного нерва с плотностью энергии от 200 до 250 Дж/см², диаметр пятна лазерного излучения составлял 5 мм. Парные глаза животных лазерному воздействию не подвергались.

Гистологическому исследованию подвергали глазные яблоки кроликов после фотодинамического воздействия на область диска зрительного нерва, энуклеированные на 14 сутки и через 3 месяца после эксперимента. Глазные яблоки фиксировали в растворе нейтрального формалина, промывали проточной водой, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин, затем выполняли серии меридиональных гистологических срезов с применением окраски гематоксилин-эозином и по методике Ван Гизон. Препараты изучали под микроскопом фирмы Leica DM LB2 при ×50, ×100, ×200 кратном увеличении с последующим фотографированием.

На фиг.1 представлен гистологический препарат глаза кролика, область диска зрительного нерва через 3 месяца после ФДТ. Окраска гематоксилин-эозином. Ув. ×50.

На фиг.2 представлен гистологический препарат глаза кролика, область диска зрительного нерва через 3 месяца после ФДТ: разрастание глиальной и фиброзной ткани на диске зрительного нерва. Окраска по методике Ван Гизон. Ув. ×100.

На фиг.3 представлен гистологический препарат глаза кролика, область диска зрительного нерва через 3 месяца после ФДТ: разрастание глиальной и фиброзной ткани на диске зрительного нерва. Окраска по методике Ван Гизон. Ув. ×200.

На фиг.4 представлен гистологический препарат глаза кролика, область диска зрительного нерва в норме. Окраска гематоксилин-эозином. Ув. ×50.

На фиг.5 представлен гистологический препарат глаза кролика через 3 месяца после ФДТ: сохранные отдельные нервные волокна (НВ) окрашены пикрофуксином в серо-желтый цвет, фиброзная ткань (ФТ) и твердая мозговая оболочка (ТМО) нерва - в малиновый, межоболочечное пространство (МОП) сужено. Окраска по методике Ван Гизон. Ув. ×200.

После фотодинамического воздействия на поверхности диска зрительного нерва отмечали появление дополнительных новообразованных сосудов. Отличие новообразованных сосудов состояло в том, что размерами они значительно уступали ветвям центральной артерии сетчатки и притокам центральной вены сетчатки. Прослеживали различные конфигурации малого диаметра и деформацию просвета этих сосудов, что говорит о патологической, не до конца сформированной, сосудистой стенке. Кроме того, отмечено частичное поверхностное замещение нервной ткани соединительной тканью, элементы фиброзирования после фотодинамического воздействия.

В результате лазерного воздействия на область диска зрительного нерва отмечается уменьшение его в размерах (фиг.1), частичное разрушение аксонов оптикоганглионаров сетчатки (третий нейрон) с последующим замещением глиальной рубцовой тканью (фиг.2, 3). Из аксонов этих клеток формируется вещество зрительного нерва, представленное в норме пучками нервных волокон, разделенных тонкими соединительнотканными перегородками после прохождения lamina cribrosa (фиг.4).

На 14 сутки эксперимента морфологически отмечается увеличение доли соединительной ткани при изучении внутриствольного строения зрительного нерва, что в динамике приводит через 3 месяца практически к полному замещению нервных волокон фиброзной тканью, трудно отличимой от склеры и твердой мозговой оболочки нерва, на фоне сужения межоболочечного пространства (фиг.5).

Таким образом, гистологически подтверждено, что фотодинамическое воздействие на область диска зрительного нерва может служить моделью частичной атрофии зрительного нерва. Необходимо учитывать усугубление процессов атрофии с риском полной атрофии начального отрезка зрительного нерва в более поздние сроки наблюдения.

Способ создания модели частичной атрофии зрительного нерва, отличающийся тем, что кролику внутривенно вводят фотосенсибилизатор хлоринового ряда в дозе 2,4 мг/кг веса, через 15 мин транспупиллярно проводят лазерное облучение диска зрительного нерва с плотностью энергии 200-250 Дж/см², диаметр пятна лазерного излучения - 5 мм.