Способ определения индивидуальной чувствительности лейкоцитов крови людей к лекарственному препарату
Изобретение относится к области медицины. Способ определения индивидуальной чувствительности или иммунотоксичности к лекарственному препарату основан на индивидуальном моделировании in vitro их воздействия на продукцию ИФН-альфа и/или ИФН-гамма лейкоцитами/лимфоцитами цельной крови пациента. Способ предусматривает оценку степени костимулирующего/корригирующего или подавляющего действия и/или последействия лекарственных препаратов на основные показатели реактивности системы ИФН. Способ обеспечивает индивидуальный подбор адекватных лекарственных средств и соответственно повышение их клинической эффективности, а также на предупреждение развития возможных лекарственных интерфероно-иммунодефицитов. 2 з.п. ф-лы.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, фармакологии, вирусологии, и касается разработки способа определения индивидуальной чувствительности лейкоцитов/лимфоцитов крови людей к иммунотропным или другим лекарственным препаратам, модифицирующими, в зависимости от таковой, в той или иной степени выработку иммунокомпетентными клетками интерферонов (ИФН) - основных антиинфекционных цитокинов, уровень продукции которых отражает напряженность противовирусного и антибактериального иммунных ответов организма в целом.
Способ может быть использован для прогнозирования клинической эффективности (или возможной иммунотоксичности) иммунотропных (или других фармакологических) препаратов и их научно-обоснованного индивидуального отбора для терапии различных заболеваний.
В настоящее время фармацевтический рынок предлагает большой арсенал иммунотропных и/или иммуноактивных препаратов: рекомбинантных и природных человеческих ИФН, интерлейкинов, индукторов ИФН и иммуномодуляторов, применяемых в профилактике и лечении вирусных и других инфекционных, аллергических, аутоиммунных, онкологических и различных иммуноопосредованных заболеваний. Реакция на указанные препараты в популяции людей, в зависимости от индивидуальных особенностей каждого организма, характера и тяжести течения патологического процесса, может существенно варьироваться и выражаться не только в наличии ожидаемого положительного иммунокорригирующего действия и клинического эффекта, но и в отсутствии такового или, что особенно важно, в обратном супрессивном действии и нежелательных побочных эффектах.
Кроме того, большой арсенал различных фармакологических препаратов, применяемых в медицинской практике, не относимых формально к модуляторам активности иммунной системы или синтеза цитокинов (кортикостероиды, антибиотики, сульфаниламиды, противотуберкулезные и другие химиопрепараты), могут наряду с основным фармакологическим действием негативно влиять на ИФН-ответ лейкоцитов крови, вызывать супрессию системы ИФН, клеточного и гуморального иммунитета, а следовательно, оказывать в целом иммунотоксическое действие.
Технической задачей данного изобретения является получение опережающей информации о возможном иммунокорригирующем действии препарата на лейкоциты крови данного пациента, а следовательно, об его индивидуальной чувствительности к иммунотропным препаратам и переносимости ими других лекарственных средств и связанное с этим прогнозирование их последующей клинической эффективности, позволяющее научно обосновать и облегчить выбор адекватного для данного пациента иммуноактивного препарата, своевременно предупредить и корригировать возможную иммунотоксичность других лекарственных средств.
Для решения поставленной задачи проводится индивидуальное моделирование in vitro воздействия различных иммунотропных или иммуноактивных (или других лекарственных) препаратов на цельную кровь пациента, которое оценивается по изменению под их действием 2-х основных показателей ИФН-статуса: ИФН-α и ИФН-γ продуцирующей способности лейкоцитов крови данного пациента, т.е. по изменению количества продуцируемого лейкоцитами/лимфоцитами его крови ИФН-α и ИФН-γ in vitro, костимулированных каждым из исследуемых препаратов.
Прототипом заявляемого способа является разработанный нами ранее способ определения ИФН-статуса людей в пробах цельной крови (1-3), включающий тестирование следующих показателей:
- количества циркулирующего в крови ИФН (сывороточный ИФН),
- уровня продукции лейкоцитами/лимфоцитами цельной крови ИФН-α, индуцированного in vitro эталонным индуктором ИФН-α - вирусом болезни Ньюкасла (ВБН),
- уровня продукции лейкоцитами/лимфоцитами цельной крови ИФН-γ, индуцированного in vitro эталонным индуктором ИФН-γ - фитогемагглютинином (ФГА),
- уровня продукции лейкоцитами/лимфоцитами цельной крови спонтанного ИФН in vitro без какой-либо дополнительной индукции.
Предлагаемое изобретение отличается от прототипа тем, что тестируется и сравнивается количественное содержание продуцированного лейкоцитами/лимфоцитами цельной крови пациента in vitro ИФН-α и ИФН-γ под действием того или иного иммуноактивного или другого фармпрепарата и без него.
Иными словами, моделируется и оценивается индивидуальное костимулирующее/корригирующее воздействие лекарственного средства на 2 наиболее информативных показателя интерфероногенеза и реактивности системы ИФН данного пациента, опосредованное чувствительностью лейкоцитов/лимфоцитов его крови к каждому из исследуемых препаратов, т.е. определяется индивидуальный индекс костимуляции и коррекции каждого препарата для данного пациента.
В зависимости от индекса костимуляции и коррекции (индекс КК) продукции ИФНов α и γ лейкоцитами/лимфоцитами цельной крови in vitro возможны 5 основных вариантов индивидуальной чувствительности (ИЧ) к иммуноактивным (индукторам ИФН, иммуномодуляторам, цитокинам) и другим лекарственным препаратам:
1. Слабая ИЧ - (индекс КК=2) - 2-кратное увеличение титров ИФН-α и ИФН-γ, индуцированных in vitro в присутствии препарата по сравнению с таковыми в отсутствии препарата при стандартной индукции (показатели продукции ИФН-α и ИФН-γ по данным ИФН-статуса пациента).
2. Выраженная ИЧ - (индекс КК=3-4) - 3-4-кратное увеличение титров ИФН-α и ИФН-γ, индуцированных in vitro в присутствии препарата по сравнению с таковыми в отсутствии препарата при стандартной индукции (показатели продукции ИФН-α и ИФН-γ по данным ИФН-статуса пациента).
3. Сильно выраженная ИЧ - (индекс КК>4) - более чем 4-кратное увеличение титров ИФН-α и ИФН-γ, индуцированных in vitro в присутствии препарата по сравнению с таковыми в отсутствии препарата при стандартной индукции (показатели продукции ИФН-α и ИФН-γ по данным ИФН-статуса пациента).
4. Отсутствие ИЧ - (индекс КК=1) - титры ИФН-α и ИФН-γ, индуцированных in vitro в присутствии препарата по сравнению с таковыми в отсутствие препарата при стандартной индукции (показатели продукции ИФН-α и ИФН-γ по данным ИФН-статуса пациента), остаются без изменений.
5. Индивидуальная иммунотоксичность (ИИ) - (индекс КК<1) титры ИФН-α и ИФН-γ, индуцированных in vitro в присутствии препарата ниже таковых в отсутствие препарата при стандартной индукции (показатели продукции ИФН-α и ИФН-γ по данным ИФН-статуса пациента).
Известно, что система ИФН человека является первой линией резистентности организма к инфекциям и его иммунореактивности при других формах патологии.
Согласно современным представлениям, иммунотропные или иммуноактивные препараты реализуют свои эффекты на систему ИФН человека через индукцию не только (а иногда и не столько) ИФН, но и ряда других про- и противовоспалительных цитокинов, оказывающих, в силу прямых и обратных связей, положительное или отрицательное воздействие на интерфероногенез в целом и на α- и γ-ИФН продуцирующую способности лейкоцитов/лимфоцитов в частности.
Другие фармакологические препараты, не относящиеся к иммунотропным или иммуноактивным, могут также подавлять ИФН-ответ иммунокомпетентных клеток крови (в том числе вследствии изменения или повреждения сигнальных путей этих клеток) и, следовательно, подавлять резистентность и иммунореактивность организма в целом.
Заявляемый способ позволяет объективно оценить и прогнозировать индивидуальную переносимость и возможную иммунотоксичность этих препаратов, предупредить ее адекватным для данного пациента иммунотропным препаратом.
Постановка тестов на ИЧ и переносимость лекарственных препаратов по заявляемому способу может осуществляться в 3-х вариантах:
Вариант I - эффект действия исследуемого препарата, когда все реагирующие компоненты: кровь пациента, препарат в конечной концентрации, соответствующей его разовой и/или суточной терапевтической дозе, и эталонный индуктор ИФН-α или ИФН-γ вводятся в реагирующую смесь одновременно, т.е. реакции осуществляются в присутствии препарата.
Вариант II - эффект последействия исследуемого препарата, когда проводится 24 часовая предварительная инкубация крови пациента с исследуемым препаратом в конечной концентрации, соответствующей его разовой и/или суточной дозе, с последующим введением эталонных индукторов α- и γ-ИФНов.
Вариант III - эффект исследуемого препарата (действие и/или последействие) оценивается по результатам его воздействия только на γ-звено системы ИФН, т.е. на продукцию лейкоцитами/лимфоцитами крови пациента in vitro только ИФН-γ - ключевого цитокина, определяющего направленность и напряженность иммунного ответа при вторичных иммунодефицитах ассоциированных с вирусными, другими инфекционными, аутоиммунными, онкологическими и различными иммуноопосредованными заболеваниями.
Во всех 3-х вариантах наряду с постановкой тестов на ИЧ проводится исследование ИФН-статуса по 4-м основным показателям (1-3), которое позволяет оценить функциональную активность системы ИФН in situ в целом и определить степень ее недостаточности по различным звенья у данного пациента при данной патологии.
Недостаточность системы ИФН по α- или γ-звеньям (по ИФН-α или ИФН-γ продуцирующей способности лейкоцитов/лимфоцитов крови) может быть:
1-й степени - когда показатели продукции ИФН-α или ИФН-γ лейкоцитами/лимфоцитами крови по данным определения ИФН-статуса ниже таковых в норме в 2 раза,
2-й степени - когда показатели продукции ИФН-α или ИФН-γ лейкоцитами/лимфоцитами крови по данным определения ИФН-статуса ниже таковых в норме в 4 раза,
3-й степени - когда показатели продукции ИФН-α или ИФН-γ лейкоцитами/лимфоцитами крови по данным определения ИФН-статуса ниже таковых в норме в 8 раз,
4-й степени - когда показатели продукции ИФН-α или ИФН-γ лейкоцитами/лимфоцитами крови по данным определения ИФН-статуса ниже таковых в норме более чем в 8 раз.
Сравнение показателей продукции ИФНов-α и/или -γ в вариантах I, II или III с контрольными (по данным ИФН-статуса, без препарата) позволяет судить о наличии или отсутствии и степени костимулирующего/корригирующего (или ингибирующего) действия данного препарата на соответствующие показатели пациента (индексы КК или ИИ препарата), а следовательно, и о ИЧ или переносимости лейкоцитами/лимфоцитами его крови исследуемого препарата.
Активность индуцированных α- и/или γ-ИФНов во всех вариантах определяется через 24 часа после контакта с эталонными индукторами ИФН-α и ИФН-γ биологическим или иммуноферментным методом (ИФА) с использованием диплоидной культуры фибробластов человека или соответствующих тест-систем и выражается в ед/мл или пкг/мл (пикограмм/мл) соответственно.
Варианты I, II и III целесообразны как при исследовании иммунотропных/иммуноактивных, так и остальных лекарственных препаратов. На практике чаще, как правило, используется постановка тестов на ИЧ по Варианту III.
Отсутствие ИЧ у пациента к определенному препарату в данный момент не исключает ее восстановление в последующем в ходе лечения или после излечения от данного заболевания, равно как и имеющаяся в начале заболевания высокая чувствительность к данному препарату в ходе лечения может снизиться. Поэтому при лечении иммунотропными/иммуноактивными препаратами целесообразно проводить мониторинг ИЧ пациента, что позволит своевременно отменить один и применить другой препарат, т.е. осуществить обоснованную комбинированную терапию различными иммунотропными/иммуноактивными препаратами для достижения максимального клинического эффекта. Возможно также увеличение концентрации препаратов в пределах максимально допустимых одноразовых терапевтических доз. В таких случаях реакции на ИЧ осуществляются в присутствии различных расчетных концентраций одного и того же препарата.
Примеры процедуры осуществления изобретения.
Пример 1. Определение ИЧ лейкоцитов/лимфоцитов крови пациента К., 28 лет, часто болеющего (5-6 раз в год) ОРВИ, к индукторам ИФН - амиксин и циклоферон и иммуномодуляторам - полиоксидоний и ликопид (по выбору лечащего врача) - всего 4 препарата.
Кровь забирают из вены (или из безымянного пальца) любой руки после предварительной обработки сначала спиртовым, а затем сухим ватным тампоном, стерильным одноразовым шприцом (или скарификатором) в объеме 1-2 мл и переносят в стерильную пластмассовую микропробирку, содержащую 10-20 ед. гепарина или другого антикоагулянта.
Вариант I - эффект действия исследуемых препаратов.
Постановку тестов ИЧ к препаратам осуществляют параллельно с определением показателей ИФН-статуса пациента без препарата в 3-х повторах, в общем объеме 200 мкл всех реагирующих компонентов, включая кровь пациента.
В стерильную 96-луночную круглодонную планшету вносят среду RPMI-1640 по 160 мкл в 9 лунок и по 140 мкл - в 24 лунки.
В каждую лунку, содержащую 160 мкл RPMI, вносят:
1) в первые три лунки - по 20 мкл ВБН (эталонный индуктор ИФН-α),
2) во вторые три лунки - по 20 мкл ФГА (эталонный индуктор ИФН-γ),
3) в третьи три лунки - по 20 мкл среды RPMI-1640 (спонтанная индукция ИФН).
В каждую лунку, содержащую 140 мкл RPMI-1640, вносят:
4) в первые 6 лунок - по 20 мкл препарата амиксин в разовой терапевтической дозе + по 20 мкл ВБН в 3 лунки из них (костимуляция продукции ИФН-α в присутствии амиксина) и по 20 мкл ФГА в 3 другие лунки из них (костимуляция продукции ИФН-γ в присутствии амиксина);
5) во вторые 6 лунок - по 20 мкл препарата циклоферон в разовой терапевтической дозе + по 20 мкл ВБН в 3 лунки из них и по 20 мкл ФГА в 3 другие лунки из них (костимуляция продукции ИФНов α и γ соответственно в присутствии циклоферона);
6) в третьи 6 лунок - по 20 мкл препарата полиоксидоний в разовой терапевтической дозе + по 20 мкл ВБН в 3 лунки из них и по 20 мкл ФГА в 3 другие лунки из них (костимуляция продукции ИФНов α и γ соответственно в присутствии полиоксидония);
7) в четвертые 6 лунок - по 20 мкл препарата ликопид в разовой терапевтической дозе + по 20 мкл ВБН в 3 из них и по 20 мкл ФГА в 3 другие (костимуляция продукции ИФНов α и γ соответственно в присутствии ликопида);
8) в каждую из лунок с реагирующей смесью (по варианту I всего 33 лунки) вносят по 20 мкл цельной гепаринизированной крови исследуемого пациента;
9) содержимое каждой лунки хорошо перемешивают, планшеты закрывают крышкой и инкубируют при 37°С в атмосфере CO2 24 часа;
10) через 24 часа инкубации планшеты центрифугируют в обычном режиме, надосадочную жидкость в объеме 150 мкл с каждой лунки из 3-х повторов отбирают и объединяют в одну пробу (всего 11 образцов проб).
Расход крови в описанной процедуре постановки ИЧ и ИФН-статуса составляет 660 мкл. Оставшуюся кровь центрифугируют для получения и определения содержания сывороточного ИФН пациента.
Титрование биологической активности полученных проб ИФН проводят в диплоидной культуре фибробластов человека в 3-х повторах или определяют содержание в исследуемых пробах ИФН-α и ИФН-γ в 3-х повторах с помощью соответствующих тест-систем общепринятыми методами, которую выражают в ед/мл или в пкг/мл соответственно.
Пример 2. Вариант II - эффект последействия исследуемых препаратов.
Процедура постановки ИЧ лейкоцитов/лимфоцитов крови пациента К. к препаратам амиксин, циклоферон, полиоксидоний и ликопид отличается от предыдущего варианта тем, что предварительно, в течение 24 часов, осуществляется контакт исследуемых препаратов с кровью пациента (без эталонных индукторов ИФН-α и ИФН-γ).
В стерильную 96-луночную круглодонную планшету вносится среда RPMI-1640 по 180 мкл в 9 лунок и по 160 мкл - в 24 лунки;
В каждую лунку, содержащую 160 мкл RPMI-1640, вносят:
1) по пунктам 4, 5, 6 и 7 варианта I - только по 20 мкл препаратов амиксин, циклоферон, полиоксидоний и ликопид соответственно по 6 лунок на каждый препарат, в разовой и/или суточной терапевтической дозе (24 лунки);
2) в каждую из лунок с реагирующей смесью (т.е. во все 33 лунки по пунктам 1-7 варианта I) вносят по 20 мкл цельной гепаринизированной крови исследуемого пациента;
3) содержимое каждой лунки хорошо перемешивают, планшеты закрывают крышкой и инкубируют при 37°С в атмосфере СО2 24 часа;
4) через 24 часа инкубации планшеты центрифугируют при обычном режиме, надосадочную жидкость сливают, в лунки вносят по 20 мкл ВБН и ФГА в 3-х повторах по пунктам 1, 2, 4-7 варианта I и 20 мкл среды RPMI-1640 по пункту 3.
5) содержимое каждой лунки хорошо перемешивают, планшеты закрывают крышкой и повторно инкубируют при 37°С в атмосфере CO2 24 часа;
6) затем осуществляют процедуру по пункту 10 варианта I и определяют активность индуцированных ИФН аналогично предыдущему варианту.
Варианты I и II постановки ИЧ к исследуемым препаратам могут быть поставлены отдельно или параллельно.
Пример 3. Вариант III - эффект действия и/или последействия исследуемых препаратов на продукцию лейкоцитами/лимфоцитами крови пациента ИФН-γ.
Процедура постановки ИЧ лейкоцитов/лимфоцитов крови пациента К. к препаратам амиксин, циклоферон, полиоксидоний и ликопид по этому варианту включает:
Подвариант А - эффект действия исследуемых препаратов.
В стерильную 96-луночную круглодонную планшету вносится среда RPMI-1640 по 160 мкл - в 9 лунок и по 140 мкл - в 12 лунок;
В каждую лунку содержащую по 160 мкл RPMI-1640, вносят:
1) по 20 мкл ВБН, ФГА или среды RPMI-1640 в 3-х повторах соответственно (по 3 лунки на каждый) по пунктам 1-3 варианта I - (для постановки тестов ИФН-статуса);
В каждую лунку, содержащую по 140 мкл среды RPMI-1640, вносят:
2) по 20 мкл каждого из исследуемых препаратов в 3-х повторах (по 3 лунки на каждый препарат в разовой терапевтической дозе) + по 20 мкл ФГА во все 12 лунок;
3) во все лунки с реагирующей смесью (9+12 - всего 21 лунки) вносится по 20 мкл цельной гепаринизированной крови исследуемого пациента;
4) содержимое каждой лунки хорошо перемешивают, планшеты закрывают крышкой и инкубируют при 37°С в атмосфере CO2 24 часа;
5) через 24 часа инкубации планшеты центрифугируют в обычном режиме, надосадочную жидкость в объеме 150 мкл с каждого из 3-х повторов объединяют в одну пробу (7 образцов проб);
6) активность индуцированных ИФНов в полученных образцах проб определяют, как это описано в предыдущих вариантах.
Подвариант Б - эффект последействия исследуемых препаратов.
В стерильную 96-луночную круглодонную планшету вносится среда RPMI-1640 по 180 мкл - в 9 лунок и по 160 мкл - в 12 лунок;
В каждую лунку, содержащую по 160 мкл среды RPMI-1640, вносят:
1) по 20 мкл каждого из исследуемых препаратов в 3-х повторах (по 3 лунки на каждый препарат в разовой и/или суточной терапевтической дозе);
2) во все лунки с реагирующей смесью (9+12 - всего 21 лунки) вносят по 20 мкл цельной гепаринизированной крови исследуемого пациента;
3) содержимое каждой лунки хорошо перемешивают, планшеты закрывают крышкой и инкубируют при 37°С в атмосфере СО2 24 часа;
4) через 24 часа инкубации планшеты центрифугируют при обычном режиме, надосадочную жидкость из всех лунок сливают, в лунки вносят по 20 мкл ВБН, ФГА или среды RPMI-1640 в 3-х повторах соответственно (по 3 лунки по пунктам 1-3 варианта 1-9 лунок для постановки тестов ИФН-статуса), во все остальные 12 лунок, предобработанные исследуемыми препаратами, вносят по 20 мкл ФГА;
5) содержимое каждой лунки хорошо перемешивают, планшеты закрывают крышкой и повторно инкубируют при 37°С в атмосфере СО2 24 часа;
6) после повторной инкубации планшеты центрифугируют при обычном режиме, надосадочную жидкость в объеме 150 мкл с каждого из 3-х повторов объединяют в одну пробу (7 образцов проб);
7) активность индуцированных ИФНов в полученных образцах проб определяют, как это описано в предыдущих вариантах.
Подварианты А и Б Варианта III постановки тестов на ИЧ к исследуемым препаратам могут быть поставлены отдельно или параллельно.
Примеры результатов и заключения по определению ИЧ к различным препаратам.
Пример 1 - пациент К. Вариант I.
Заключение.
По результатам исследования в примере 1 у пациента К. имеется недостаточность системы ИФН по продукции ИФН-альфа и ИФН-гамма 2-й и 3-й степени соответственно. Определяется выраженная чувствительность к циклоферону по костимуляции и коррекции продукции ИФН-гамма (индекс КК равен 4) и слабо выраженная - по костимуляции и коррекции продукции ИФН-альфа (индекс КК равен 2). К другим исследованным препаратам (полиоксидоний, ликопид) лейкоциты/лимфоциты пациента К. менее чувствительны (индексы КК продукции ИФН-альфа или ИФН-гамма соответственно равны 2) или не чувствительны (амиксин).
Рекомендуется курс лечения циклофероном, действие которого на альфа-звено системы ИФН может быть усилено комбинацией с полиоксидонием.
Пример 2 - пациент Н. Вариант II.
Заключение.
По результатам исследования в примере 2 у пациента Н. имеется недостаточность системы ИФН по продукции ИФН-альфа и ИФН-гамма 3-й степени соответственно. Определяется сильно выраженная чувствительность к ридостину по костимуляции и коррекции продукции ИФН-альфа (индекс КК равен 8) и выраженная - по костимуляции и коррекции продукции ИФН-гамма (индекс КК равен 4), а также выраженная чувствительность к циклоферону по костимуляции и коррекции продукции как ИФН-альфа, так и ИФН-гамма (индекс КК равен 4). К другим исследованным препаратам (имунофан, полиоксидоний) лейкоциты/лимфоциты пациента Н. после 24 часовой инкубации менее чувствительны (индексы КК по продукции ИФН-альфа или ИФН-гамма соответственно равны 2) или не чувствительны (полиоксидоний).
Рекомендуется лечение ридостином, циклофероном, возможна комбинация циклоферон + имунофан.
Пример 3 - пациент С. Вариант III (подварианты А и Б).
Заключение.
По результатам исследования в примере 3 у пациента С. имеется недостаточность системы ИФН по продукции ИФН-альфа и ИФН-гамма 2-й и 4-й степени соответственно. Определяется сильно выраженная чувствительность лейкоцитов/лимфоцитов крови пациента к ридостину по костимуляции и коррекции продукции ИФН-гамма как под действием, так и после его действия (индекс КК равен 8 и 16 соответственно), а также выраженная чувствительность к циклоферону, в присутствии и после действия которого продукция ИФН-гамма повышается в 4 и 8 раз соответственно, и имунофану, действие и последействие которого костимулирует ИФН-гамма продуцирующую способность иммунокомпетентных клеток крови пациента в 4 раза. Менее выраженная чувствительность определяется под действием неовира, который, однако, после 24 часового контакта с кровью пациента также вызывает выраженную костимуляцию продукции ИФН-гамма лейкоцитами/лимфоцитами крови пациента С. (индекс костимуляции равен 4).
Рекомендуется лечение ридостином, циклофероном, имунофаном или комбинацией неовир + имунофан.
Пример 4. Пациент Т. Определение возможной иммунотоксичности антибиотиков - цефалексин, доксициклин и цитостатиков - циклофосфан и 5-фторурацил. Вариант III (подварианты А и Б).
Заключение.
По результатам исследования у пациента Т. имеется недостаточность (дефицит) системы ИФН по продукции ИФН-альфа и ИФН-гамма 4-й степени. Определяется умеренное иммунотоксическое действие цефалексина на продукцию ИФН-гамма лейкоцитами/лимфоцитами крови пациента (А), которое усиливается после 24-часовой инкубации с препаратом (Б) и выраженное иммунотоксическое последействие 5-фторурацила на продукцию ИФН-гамма (Б).
В терапии различных заболеваний для пациента Т. предпочтительно применение антибиотика доксициклин и цитостатика циклофосфан.
В целом, определение индивидуальной чувствительности и иммунотоксичности различных препаратов по заявляемому способу направлено на получение опережающей информации о клинической эффективности применения иммунотропных/иммуноактивных препаратов и предупреждение возможного развития лекарственных интерфероно-иммунодефицитов и может использоваться как важный дополнительный тест доклинического исследования широкого круга фармакологических препаратов.
Литература.
1. Григорян С.С., Майоров И.А., Иванова A.M., Ершов Ф.И. Оценка интерферонового статуса людей по пробам цельной крови. Вопросы вирусологии 1988, 4, 433-436.
2. Григорян С.С., Иванова A.M., Прицкер А.Д., Ершов Ф.И. Определение интерферонового статуса в цельной крови у людей при массовых обследованиях. М., Академия медицинских наук СССР, 1989, стр.1-14.
3. Григорян С.С., Ершов Ф.И. Методические принципы определения интерферонового статуса. В кн. «Система интерферона в норме и при патологии». М., Медицина, 1996, стр.147-155.
1. Способ определения индивидуальной чувствительности (ИЧ) лейкоцитов крови к лекарственному препарату, отличающийся тем, что через 24 ч действия и/или после действия препарата на цельную кровь пациента in vitro в разовой и/или суточной дозе по увеличению или снижению уровня продукции (титров) ИФН-альфа и/или ИФН-гамма лейкоцитами крови, по сравнению с таковыми в отсутствии препарата, определяют степень костимулирующего или подавляющего действия препарата на указанные показатели пациента; рассчитывают индекс костимуляции и коррекции (КК) препарата и оценивают ИЧ к лекарственному препарату, подразделяя на 5 основных вариантов: слабая ИЧ - при 2-кратном увеличении титров ИФН-альфа и/или ИФН-гамма и индексе КК=2; выраженная ИЧ - при 3-4-кратном увеличении титров ИФН-альфа и/или ИФН-гамма и индексе КК=3-4; сильно выраженная ИЧ - при более чем 4-кратном увеличении титров ИФН-альфа и/или ИФН-гамма и индексе КК>4; отсутствие ИЧ - при отсутствии изменений в титрах ИФН-альфа и/или ИФН-гамма и индексе КК=1; индивидуальная иммунотоксичность (ИИ) - при снижении титров ИФН-альфа и/или ИФН-гамма и индексе КК<1.
2. Способ по п.1, в котором индукция ИФН-альфа и/или ИФН-гамма в лейкоцитах цельной крови пациента соответствующими эталонными индукторами in vitro проводится в присутствии препарата в разовой и/или суточной дозе (эффект действия препарата).
3. Способ по п.1, в котором индукция ИФН-альфа и/или ИФН-гамма в лейкоцитах цельной крови пациента соответствующими эталонными индукторами in vitro проводится через 24 ч после действия препарата в разовой и/или суточной дозе (эффект последействия препарата).
