Амфифильная высокополимерная рнк из пекарских дрожжей

Авторы патента:

Загребельный Станислав Николаевич (RU)

C12N15/10 - способы выделения, получения или очистки ДНК или РНК (химические способы получения ДНК или РНК C07H 21/00; получение неструктурных полинуклеотидов из микроорганизмов или с помощью ферментов C12P 19/34)

Владельцы патента RU 2430968:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Описан препарат амфифильной высокополимерной дрожжевой РНК, стимулирующий лейкоцитарную реакцию и первичный гуморальный иммунный ответ. Препарат получен из дрожжей Saccharomyces cerevisiae экстракцией кипящей водой, содержащей оттитрованную NaOH олеиновую кислоту в течение 40 минут при температуре 99-102°С, с добавлением по мере упаривания кипящей воды до 0,3 л и NaOH через 10, 20 и 30 минут после начала экстракции. Предложенный препарат стимулирует лейкоцитарную реакцию и первичный гуморальный иммунный ответ.

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к применению в лечебных целях новых физиологически активных соединений.

Известен препарат высокополимерной РНК, с фирменным названием Полирибонат, извлеченный из клеток пекарских дрожжей с помощью 2-этилгексановой кислоты. Он производится в препаративных количествах и применяется в качестве противовирусного средства в ветеринарии [1].

Однако данный препарат высокополимерной дрожжевой РНК ввиду своей относительной гидрофильности плохо проникает через биологические мембраны и слабо стимулирует биосинтез белка в иммунокомпетентных органах и тканях лабораторных животных [2].

Целью настоящего изобретения является придание высокополимерной дрожжевой РНК амфифильных свойств поскольку именно амфифильные соединения легче других проникают через биологические мембраны.

Поставленная цель достигается выделением высокополимерной РНК из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты.

Характеристики полученного препарата: выход из 30 г сухих дрожжей - 0,7-1,0 г; содержание олеиновой кислоты в комплексе с высокополимерной дрожжевой РНК, % - 10-20; цвет лиофилизованного препарата - белый; растворимость в воде - удовлетворительная (в отличие от относительно гидрофильного Полирибоната, растворяющегося в воде в течение нескольких секунд, данный амфифильный препарат растворяется в воде только через 0,5-1 ч при периодическом перемешивании), водный раствор мылкий, нерастворенные крупинки скользкие; весовая экстинкция, ОЕ₂₆₀/мг - 16-18; содержание КРФ, % ≤2,5; прирост КРФ за 1 сут при 22-25°С в дистиллированной воде, % ≤0,4; спектральные отношения: D₂₃₀/D₂₆₀ - 0,30-0,45; D₂₅₀/D₂₆₀ - 0,88-0,92; D₂₈₀/D₂₆₀ - 0,45-0,60.

Пример осуществления предлагаемого метода

30 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) с содержанием влаги ~7,4% суспендировали по порциям в течение 1-2 мин в 0,3 л кипящей воды, содержащей 4,5 г олеиновой кислоты (ЗАО «Купавнареактив», соответствует квалификации «ч» по ТУ 6-09-5290-86), оттитрованной 2 мл 2,5 М NaOH, так, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 99°С. Суспензию кипятили 40 мин при 99-102°С, периодически перемешивая. По мере упаривания добавляли в нее кипящую воду до 0,3 л. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 1 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию охлаждали до ~40°С, центрифугировали (3000 g, 10 мин, без охлаждения), супернатант (~0,16 л) сливали в стеклянную емкость на 0,5 л, добавляли в нее 53 г NaCl (ФГУП комбината «СИБСОЛЬ», г.Усолье-Сибирское, Иркутская обл., ГОСТ Р 51574-2000) и свежую дистиллированную воду до 0,3 л. Суспензию интенсивно перемешивали до полного растворения соли и оставляли при комнатной температуре на 22 ч. Высоленный осадок-шрот, содержащий амфифильную высокополимерную РНК, отделяли от супернатанта центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения), промывали 2 порциями по 80 мл 3 М раствора NaCl и 4 порциями по 20 мл 96-97%-ного этанола (ОАО «Спиртовый комбинат», г.Мариинск, Кемеровская обл., ГОСТ Р 51652-2000); при этом шрот отделяли от 3 М раствора NaCl и этанола центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения).

Товарную амфифильную высокополимерную РНК получали экстракцией ее из промытого шрота дистиллированной водой, осветлением экстракта центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения) и заключительной лиофилизацией.

Полученный препарат амфифильной высокополимерной дрожжевой РНК (предполагаемое рыночное название «Виталанг-2») при внутрибрюшинном введении лабораторным животным - мышам - самцам-гибридам CBF1 - высокоотвечающего генотипа в дозе 100 мг/кг в течение 5 дней ежедневно сильно стимулировал лейкоцитарную реакцию - количество ядросодержащих клеток в крови увеличивалось в 1,7 раза, а также первичный гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген - эритроциты барана - количество антителообразующих клеток классов IgG и IgM в селезенке по сравнению с контрольной группой увеличивалось на 30-60 и 70% соответственно. Вместе с тем данный препарат малотоксичен (LD₅₀>2 г/кг), ни одна мышь не погибла.

Источники информации

1. Ред. Масычева В.И. Сб. науч. трудов сотр. НИКТИ БАВ, 1996.

2. Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Биологическая активность разных препаратов РНК из пекарских дрожжей // Бюлл. Сибирского отделения РАМН, 2006, №3(121). С.117-121.

Препарат амфифильной высокополимерной дрожжевой РНК, стимулирующий лейкоцитарную реакцию и первичный гуморальный иммунный ответ, отличающийся тем, что его получают из дрожжей Saccharomyces cerevisiae экстракцией кипящей водой, содержащей оттитрованную 2,5 М NaOH олеиновую кислоту в течение 40 мин при температуре 99-102°С, добавлением по мере упаривания кипящей воды до 0,3 л и 2,5 М NaOH через 10, 20 и 30 мин после начала экстракции.

Днк-микрочип для идентификации генов бета-лактамаз расширенного спектра действия класса а // 2415937

Изобретение относится к области молекулярной биологии, химической энзимологии и аналитической биотехнологии. .

Фаговый дисплей с применением котрансляционной транслокации слитых полипептидов // 2412249

Способ и устройство для очистки, разделения, модификации и/или иммобилизации химических или биологических объектов, находящихся в текучей среде, и опора из микропроволоки // 2411291

Днк-конструкции для специфического ингибирования экспрессии генов посредством рнк-интерференции // 2410431

Изобретение относится к области генетической инженерии и может быть использовано в практических целях для ингибирования в клетках продукции целевых белков. .

Способ получения плазмидной днк из бактериальных клеток // 2408729

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения плазмидной ДНК из бактериальных клеток. .

Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления рнк вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции (пцр) // 2405039

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выявления РНК вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, и может быть использовано в ветеринарии.

Способ получения высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей // 2403288

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделению физиологически активных соединений, и может быть использовано в медицине. .

Способ выделения и очистки дезоксирибонуклеиновых кислот // 2400537

Изобретение относится к области молекулярной биологии, а именно к способу выделения и очистки дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК) из образцов тканей растений, а также продуктов переработки растительного и животного происхождения.

Бесконтактные способы обнаружения молекулярных колоний, наборы реагентов и устройство для их осуществления // 2394915

Изобретение относится к способам праймер-зависимого размножения нуклеиновых кислот в иммобилизованных средах, в частности, к способам обнаружения продуктов такого размножения.

Нуклеотидная последовательность, кодирующая иммуногенный полипептид lcrv(g113), вызывающий защитный иммунный ответ против yersinia pestis; рекомбинантная плазмидная днк petv-i-3455, кодирующая иммуногенный полипептид lcrv(g113); рекомбинантный штамм escherichia coli bl21(de3)/petv-i-3455 - продуцент иммуногенного полипептида lcrv(g113); полипептид lcrv(g113) и способ его получения // 2439155

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению иммуногенного полипептида, обеспечивающего формирование иммунного протективного ответа против инфекции, вызываемой Yersinia pestis

Способ получения рибонуклеиновой кислоты // 2439156

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной генетике, и может найти применение в диагностике и терапии бактериальных и вирусных инфекций

Способ одномоментного определения длины теломер и количества делений популяции пролиферирующих клеток in vitro // 2443777

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу измерения длины теломер в клетках

Способ получения рекомбинантной вакцины // 2444570

Изобретение относится к области биотехнологии, генной инженерии и иммунологии

Способ и набор для получения образца для применения в амплификации нуклеиновой кислоты // 2453600

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения образца для амплификации нуклеиновой кислоты и к набору для получения образца для амплификации нуклеиновой кислоты

Способ выявления экспрессирующихся генов патогенных буркхольдерий методом дифференциального дисплея // 2458140

Изобретение относится к микробиологии и молекулярной генетике микроорганизмов и касается способов выявления экспрессирующихся генетических детерминант патогенных микроорганизмов рода Burkholderia с использованием реакций обратной транскрипции и сопряженной амплификации (ОТ-ПЦР) для их последующего структурно-функционального анализа, что, в свою очередь, позволит оценить влияние адаптационных изменений клеток при изменении условий внешней среды на выраженность важнейших биологических характеристик микроорганизмов, в частности вирулентности и устойчивости к антимикробным препаратам

Способ клонирования когнатных антител // 2459868

Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной генетики

Соединение, содержащее кодирующий олигонуклеотид, способ его получения, библиотека соединений, способ ее получения, способ идентификации соединения, связывающегося с биологической мишенью (варианты) // 2459869

Изобретение относится к области биологической химии

Способ обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секретах // 2463349

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и предназначено для обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек экспресс-методом с количественной оценкой данного явления

Улучшенная направленная замена нуклеотидов модифицированными олигонуклеотидами lna // 2463350

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано для направленной модификации последовательности дуплексной ДНК (днДНК)